目的:对比猪膀胱脱细胞基质(UBM)和猪脱细胞真皮基质(ADM)对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面促愈合效果的差异。方法:将36只10周龄雄性2型糖尿病BKS db/db小鼠按照随机数字表法分为UBM组和ADM组，每组18只，术前非空腹血糖物质的量浓度大于16.6 mmol/L，于每只小鼠背部制作直径6 mm圆形全层皮肤缺损创面，相应植入猪UBM和猪ADM支架。术后即刻及7、14、28 d，行创面大体观察。术后7、14和28 d，每组各取小鼠6只计算创面上皮化率，计算后处死相应小鼠，取创面组织制作切片。收集2组小鼠术后7与14 d各6张切片行苏木精-伊红(HE)染色、术后7与28 d各6张切片行Masson染色，观察组织病理学变化及支架降解情况。收集2组小鼠术后7、14 d各24张切片，采用免疫组织化学法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CD31阳性表达量，以分别反映肌成纤维细胞(Fb)、新生血管生长情况；观察巨噬细胞的分布和活化。取2组小鼠术后7、14 d创面组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子β 1(TGF-β 1)mRNA含量。上述指标每组各时间点样本数为6。对数据行析因设计方差分析、 t检验及Bonferroni校正。 结果:(1)大体观察显示，UBM组小鼠创面术后大部分时间点与UBM支架融合佳，ADM组小鼠创面术后大部分时间点与ADM支架融合差；术后28 d，ADM组小鼠创面支架表面部分区域仍未形成表皮，UBM组小鼠创面完全上皮化。术后7、14和28 d，UBM组小鼠创面上皮化率分别为(22.4±6.4)%、(68.6±12.4)%、100.0%，均明显高于ADM组[(4.5±2.2)%、(23.6±4.6)%、(64.2±13.2)%， t＝7.427、9.665、7.655， P<0.01]。(2)HE染色和Masson染色显示，术后7 d，UBM组小鼠创面支架出现大量细胞；术后14 d，细胞占据UBM支架的全部区域；术后28 d，创面形成与正常皮肤结构类似的真皮组织，并且UBM支架原有的纤维形态消失。术后7 d，ADM组小鼠创面支架内部仅出现少量细胞；术后14 d，细胞散布于ADM支架之中；术后28 d，ADM支架原有粗大的胶原纤维形态仍清晰可见。(3)术后7 d，UBM组小鼠创面支架底层出现大量聚集的肌Fb，出现新生血管；术后14 d，UBM支架上层出现均匀分布的肌Fb、新生血管，并且大部分血管实现灌注。术后7、14 d，ADM组小鼠创面支架中仅散在分布肌Fb，无或少量未明显灌注的新生管腔结构。术后7、14 d，UBM组小鼠创面支架中α-SMA阳性表达量明显高于ADM组( t＝25.340、6.651, P<0.01)，CD31阳性表达量也明显高于ADM组( t＝34.225、10.581, P<0.01)。(4)术后7 d，UBM组小鼠创面支架底层出现大量巨噬细胞；术后14 d，巨噬细胞迁入UBM支架内部，发生M2型极化、无M1型极化。术后7 d，ADM组小鼠创面支架底部出现少量巨噬细胞；术后14 d，ADM支架内部巨噬细胞稀少，未发生M2型或M1型极化。(5)术后7、14 d，UBM组小鼠创面组织中FGF-2、VEGF、PDGF和TGF-β 1的mRNA表达量均明显高于ADM组( t＝7.007、14.770、10.670、8.939，7.174、7.770、4.374、4.501, P<0.01)。 结论:猪UBM支架通过诱导肌Fb和巨噬细胞迁入、促血管新生与促愈合生长因子的表达，促进糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面的修复和真皮重建，效果优于猪ADM。

目的:探讨舌黏膜耦合颊黏膜与舌黏膜耦合异种脱细胞基质生物膜(ADM)一期尿道成形术治疗男性尿道下裂多次修复失败患者的临床疗效。方法:回顾性分析2017年2月至2019年2月收治的26例成年男性尿道下裂修复失败患者的病例资料，其中上海交通大学附属第六人民医院18例，山西医科大学第二医院3例，郑州大学第一附属医院3例，哈尔滨医科大学附属第二医院2例。根据尿道替代材料不同将患者分为两组，A组为舌黏膜耦合颊黏膜组(14例)，平均年龄(29.5±1.2)(18～41)岁；既往手术次数平均(3.6±0.7)(2～5)次；既往取口腔黏膜次数平均(1.0±0.5)(0～2)次；尿道缺损长度(6.4±0.6)cm。B组为舌黏膜耦合ADM组(12例)，平均年龄(26.5±0.8)(20～38)岁；既往手术次数平均(4.6±0.8)(3～5)次；既往取口腔黏膜次数平均(1.0±0.5)(0～2)次；尿道缺损长度(6.7±0.4)cm。两组上述指标比较差异均无统计学意义( P>0.05)。手术方式：将阴茎伸直，切除纤维组织或瘢痕，测量尿道缺损长度。A组采用舌黏膜铺尿道板，加盖颊黏膜；B组采用舌黏膜铺尿道板，加盖ADM[异种(牛)脱细胞基质敷料，规格5 cm×5 cm]。A组取舌黏膜的长度平均(5.0±0.2)(4.0～6.0)cm，宽度平均(1.2±0.2)(1.0～1.5)cm；取颊黏膜的长度平均(4.1±0.2)(3.5～5.5)cm，宽度平均(1.2±0.2)(1.0～1.5)cm。B组取舌黏膜的长度平均(5.0±0.2)(5.0～6.0)cm，宽度平均(1.2±0.2)(1.0～1.5)cm。两组术中取口腔黏膜长度差异有统计学意义( P<0.05)。尿道下裂修复成功标准：①阴茎外观接近正常；②矫正阴茎下曲；③尿道正位开口；④尿流尿线正常，排尿通畅，成人最大尿流率>15 ml/s。比较两组的疗效和并发症发生率。 结果:术后平均随访(16.3±1.6)(8～24)个月。A、B组口腔区域并发症发生比例分别为：口腔供区疼痛7/14例和1/12例，张口紧绷感8/14例和1/12例，口腔供区麻木感8/14例和1/12例，差异有统计学意义( P<0.05)。A、B组尿道并发症发生比例分别为：尿道瘘1/14例和4/12例，尿道狭窄2/14例和6/12例，差异有统计学意义( P<0.05)；阴茎弯曲2/14例和1/12例，差异无统计学意义( P>0.05)。A、B组手术成功比例分别为12/14例和5/12例，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:对于尿道下裂多次修复失败后皮源缺少的患者，建议采用舌黏膜耦合颊黏膜一期尿道成形术修复尿道。舌黏膜耦合ADM尽管具有口腔黏膜取材少、术后口腔并发症低等优点，为多次手术失败阴茎局部皮源缺损患者提供了一种新途径，但存在术后并发症多、手术成功率低等风险，应谨慎使用，不推荐一线使用。

目的:聚乳酸（PLA）静电纺丝纤维与真皮脱细胞基质（ADM）结合制备适宜伤口愈合的敷料。方法:利用静电纺丝工艺制备不同质量浓度（10%、12%、14%）的聚乳酸（PLA）纤维膜，筛选出最佳浓度后测定一系列生物学性能。采用4%过氧化氢-6%氢氧化钠溶液浸泡法制备兔ADM，评价脱细胞程度。将纤维膜在质量浓度为5%的ADM溶液中孵育24 h，经干燥、辐照灭菌制成负载ADM的PLA纤维膜，评价生物相容性。动物实验：在新西兰兔背部皮肤制造急性创面研究纤维膜促进创面愈合的效果。结果:12%浓度PLA纤维膜性能最佳，平均孔隙率79.37%，纤维直径分布主要范围为0.4～1.0 μm，平均吸水率为550.484%，最大拉伸强度可达5.74 MPa，完全培养基孵育12周失重率为12.47%。制备的ADM无细胞残留，DNA残留量（47.528±0.419） ng/mg，与未脱细胞真皮比较，DNA去除率高达96.01%，脱细胞效果良好，差异有统计学意义（ t＝47.750， P<0.01）。细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测脂肪干细胞增殖能力，48 h复合纤维膜浸提液培养吸光度值（1.121±0.013）与完全培养基培养吸光度值（0.934±0.043）比较，差异有统计学意义（ t＝7.181， P<0.01），说明复合纤维膜生物相容性良好。且动物实验复合纤维膜覆盖创面收缩速度最快，14 d时复合纤维膜组相对伤口面积分别与PLA组、ADM组、纱布对照组比较，差异有统计学意义（ t＝5.908、15.540、23.640， P<0.01）。 结论:本研究制备负载ADM的PLA纤维膜性能良好，可促进兔表皮急性创面修复。

背景:近年来,组织工程学的发展为尿道损伤修复提供了更多的选择.目的:探讨骨髓间充质干细胞联合脱细胞真皮基质修复尿道损伤的效果.方法:取第3代新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,接种于脱细胞真皮基质材料表面,构建组织工程尿道.将36只新西兰大白兔随机分3组,每组12只.实验组于尿道损伤处植入骨髓间充质干细胞-脱细胞真皮基质复合物,对照组于尿道损伤处植入单纯脱细胞真皮基质材料,正常组既无损伤也不做任何处理.术后4,8,12周,尿道修复组织进行苏木精-伊红染色,术后12周,进行免疫组织化学染色和尿动力学检查.结果与结论:①术后4周,实验组尿道缺损区可见有少许薄层上皮再生,连续性较好;对照组修复段尿道新生黏膜尚不连续.术后8-12周,实验组修复段尿道上皮层逐渐变厚,与正常尿道上皮连续性良好,黏膜逐渐增厚,尿道黏膜光滑连续;对照组修复段尿道新生黏膜连续性较好,再生上皮层次较少;②术后12周,免疫组化可见实验组修复尿道标本uroplakin Ⅲa,CK AE1/AE3,α-SMA表达阳性;③实验组手术前后的最大尿道压比较差异无显著性意义;对照组术后最大尿道压高于术前,差异有显著性意义(P <0.05);④结果表明,骨髓间充质干细胞联合脱细胞真皮基质修复尿道损伤的效果优于单纯脱细胞真皮基质材料.

目的: 观察脱细胞真皮基质膜结合改良隧道术治疗牙龈退缩临床疗效.方法: 应用脱细胞真皮基质膜结合隧道术治疗8例患者(共27个牙位) 的牙龈退缩,并进行12个月的随访观察.术前与术后12个月检查相关临床指标: 牙龈退缩深度、牙龈退缩宽度、角化龈高度、探诊深度及临床附着水平.评估根面缺陷覆盖率、完全根面覆盖率及患者满意度.结果: 治疗后1年根面缺陷覆盖率达76％,19颗牙获得完全根面覆盖.牙龈退缩深度、牙龈退缩宽度有显著降低(P ＜ 0. 05).角化龈高度增加(1. 25 ± 0. 24) mm.临床附着水平增加(2. 75 ± 0. 59) mm.结论: 脱细胞基质补片结合改良隧道术治疗牙龈退缩可以达到较好的临床效果.

目的:探究五种交联条件下的巴沙鱼皮脱细胞真皮基质的生物安全性及相容性,为鱼源脱细胞鱼皮基质研制提供实验依据.方法:巴沙鱼皮为原料,通过一系列方法制备5种低免疫原性的巴沙鱼皮脱细胞基质.据国标制备不同浓度浸提液进行体外毒性实验.依据CCK-8检测初步筛选出不同浓度浸提液(10g/L、100g/L)中符合国际标准(100g/L)的材料;再将筛选出来的材料进行扫描电镜观察材料结构,HE和Masson观察材料是否完全脱细胞;通过血液相容性、Live/Dead、Tunel、Annexin V等方法进行细胞相容性及体外毒性研究.结果:CCK-8得出10g/L浓度下,120℃交联和未交联巴沙鱼材料细胞活性＞70％,其余三种材料细胞活性均＜70％;100g/L浓度下,筛选出来的两种材料高温120℃交联和未交联巴沙鱼脱细胞真皮基质材料细胞活性均＞70％.扫描电镜观察得样品呈双层膜结构,一侧疏松多孔,一侧致密光滑.HE染色观察到粉红色条状分布的胶原纤维色,Masson结果与HE染色相一致.溶血率＜5％,凋亡实验中120°交联及未交联巴沙鱼材料、空白组细胞死亡率分别为4.73％,15.21％,0.89％;细胞凋亡率为4.17％,2.83％,2.54％.结论:实验表明,本研究中只有120°高温交联和未交联巴沙鱼脱细胞基质对细胞无毒性,材料安全性能高,具有良好的组织相容性,相对促进细胞生长,其中未交联巴沙鱼材料还需改进,高温120°交联巴沙鱼脱细胞真皮基质材料为最佳材料.为开展水生生物脱细胞真皮基质的研究提供理论基础以及技术指导.

目的 探究5种脱细胞鱼皮基质的生物安全性及相容性,筛选出符合生物相容性要求的材料.方法 以5种鱼皮(马面鱼、黑鱼、鳗鱼、鲤鱼、鲢鱼)为原料,通过脱色、脱脂、脱细胞和交联等制备工艺,制备脱细胞基质.依据国家标准(GB/T 16886.5-2017)将脱细胞鱼皮基质材料制备成稀释浓度10 g/L和标准浓度100 g/L的浸提液,用CCK-8试剂盒检测脱细胞鱼皮基质材料浸提液对人骨髓间充质干细胞的毒性.采用扫描电镜观察脱细胞鱼皮基质材料的结构,通过H-E染色和Masson染色检测制备的鱼皮基质材料是否完全脱细胞.用标准浓度100 g/L的脱细胞鱼皮基质材料浸提液与人骨髓间充质干细胞共同培养,通过溶血实验检测材料的血液相容性,采用Live/Dead染色法、TUNEL法和流式细胞术检测细胞的存活和凋亡情况.结果 在10g/L浓度下,马面鱼及黑鱼脱细胞鱼皮基质材料浸提液中人骨髓间充质干细胞活性均＞70％,其余3种材料细胞活性均＜70％;在100 g/L浓度下,马面鱼脱细胞鱼皮基质材料浸提液中人骨髓间充质干细胞活性＞70％,而黑鱼脱细胞鱼皮基质材料浸提液中细胞活性＜70％.扫描电镜下马面鱼脱细胞鱼皮基质材料为多孔、致密结构,黑鱼脱细胞鱼皮基质材料为平滑结构;H-E和Masson染色结果显示马面鱼和黑鱼脱细胞鱼皮基质材料均为脱细胞胶原纤维结构.马面鱼及黑鱼脱细胞鱼皮基质材料浸提液溶血率分别为(1.23±0.43)％和(6.35±0.47)％(医用材料溶血率国家标准为≤5％).人骨髓间充质干细胞在马面鱼脱细胞鱼皮基质材料浸提液中存活状况良好,而在黑鱼脱细胞鱼皮基质材料浸提液中多数发生死亡或凋亡.结论 马面鱼脱细胞鱼皮基质材料无细胞毒性、无溶血性,具有成为组织工程支架材料的潜能.

背景:真皮来源细胞外基质作为软骨修复支架为软骨组织的生长提供空间支持,同时促进细胞黏附和增殖,骨髓间充质干细胞具有向软骨细胞诱导分化的作用,两者单独应用均有不足.目的:探索比格犬骨髓间充质干细胞复合小牛真皮脱细胞基质修复比格犬膝关节软骨缺损的可行性.方法:抽取比格犬骨髓血,采用密度梯度离心法获取骨髓间充质干细胞并传代.取新生小牛背部真皮组织,通过物理和化学方法脱除细胞成分,制备真皮脱细胞基质.真皮脱细胞基质表面缓慢滴加0.2 mL细胞悬浮液至完全覆盖支架,放在37℃、体积分数为5％CO2培养箱中静置48 h备用.选取12只成年比格犬构建膝关节软骨缺损动物模型,随机分为3组:支架复合骨髓间充质干细胞组软骨缺损处缝合真皮脱细胞基质复合自体骨髓间充质干细胞;单纯支架组软骨缺损处缝合真皮脱细胞基质;模型对照组不进行处理.术后12周获取比格犬右膝关节组织,进行体视显微镜观察、苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色.结果与结论:①扫描电镜显示骨髓间充质干细胞在脱细胞基质中黏附和生长良好;②苏木精-伊红染色显示,支架复合骨髓间充质干细胞组修复平面略低于周边正常组织,修复组织与周围软骨整合很好,单纯支架组软骨缺损处为纤维组织填充,模型对照组缺损周边仅有少量修复;③Ⅱ型胶原免疫组化染色显示,支架复合骨髓间充质干细胞组软骨缺损处为类软骨组织填充,单纯支架组软骨缺损处为纤维组织填充,模型对照组软骨缺损处无修复组织填充;④结果表明,新型小牛真皮脱细胞基质具有良好的生物相容性,可以促进骨髓间充质干细胞增殖,自体骨髓间充质干细胞与真皮脱细胞基质复合物可有效修复比格犬膝关节软骨缺损.

目的 研究脱细胞真皮基质体内转归过程的组织学变化,为内源性再生机制提供理论依据.方法 制备异种脱细胞真皮基质大鼠皮下植入模型.分别于术后1、2、4、6、8、10、14周处死动物,取材,通过大体观察、HE染色及免疫组化等方法观察不同时期ADM组织学变化.结果 ADM植入后于1、2、4、6、8、10、14周取材观察.大体观察:植入后无明显炎症反应;4周时表面产生微细血管透明薄膜,随植入时间延长,ADM与周围组织粘附逐渐牢固不易剥离;14周时肉眼观察ADM质地及大小与1周时相比无明显改变.HE染色:ADM植入后1周炎症反应较重,以中性粒细胞及单核细胞浸润为主,与组织有间隙,周围可见成纤维细胞,其组织连接处可见新生毛细血管芽,随植入时间延长,炎症细胞逐渐减少消失;2周时ADM内部成纤维细胞显著增多;4周时ADM内新生血管丰富,与周围组织间隙消失;植入后6-10周成纤维细胞逐渐减少;14周ADM中成纤维细胞数量已经明显减少,且趋于成熟,新生胶原较多,规则致密,结构清晰.结论 脱细胞基质植入后与机体正常融合,植入后早期即可诱导新生成纤维细胞长入及血管新生.

目的 探索真皮脱细胞基质微载体构建可注射软骨的可能性.方法 将分离培养得到的软骨细胞与真皮脱细胞基质微载体混合培养24 h后分为两组,分别在三维动态系统(实验组)与静态系统(对照组)下培养.体外培养2周、4周分别进行扫描电镜观察,体外培养4周行活死细胞染色观察.体外培养4周后将软骨细胞微载体复合物植入裸鼠皮下,8周后取材进行大体观察、HE染色和番红固绿染色观察.结果 体外培养2周、4周时电镜结果 显示,实验组与对照组均发生细胞增殖与细胞外基质的分泌,实验组更明显.体外培养4周,活死细胞染色结果 显示,实验组软骨细胞活力较好,与微载体结合更充分,细胞进入微载体内部,而对照组软骨细胞仅黏附于微载体表面.体内培养8周,两组组织块大体观无明显差异;组织学染色显示实验组形成连续软骨细胞陷窝,对照组软骨陷窝呈岛状,实验组形成软骨更成熟.结论 真皮脱细胞基质微载体复合软骨细胞可以实现可注射软骨的构建,且动态培养效果优于静态培养.