目的 原核可溶性表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,纯化后免疫小鼠,检测其免疫原性,为SARS-CoV-2候选疫苗的制备提供新的思路.方法 扩增SARS-CoV-2 RBD蛋白基因片段,酶切后与pNCMO2表达载体连接,构建重组表达质粒pNC-RBD.将重组原核表达质粒转化入短小芽孢杆菌感受态细胞,扩大培养并降温诱导蛋白表达.利用亲和层析纯化目的蛋白,经氢氧化铝佐剂吸附后经背部皮下免疫雌性BALB/c小鼠,以仅免疫铝佐剂为对照,每组10只.ELISA法检测体液免疫效果,体外增殖试验测定细胞免疫效果,ELISA法测定多种细胞因子的体外分泌,流式细胞术测定细胞分型.结果 重组表达质粒pNC-RBD经菌落PCR及测序证明构建正确.重组蛋白相对分子质量约22 000,可分泌表达.纯化后重组蛋白纯度达95％以上.免疫小鼠后血清结合抗体和中和抗体效价分别可达1∶10000和1∶750左右,均显著高于佐剂组(t分别为2.845和2.528,P均＜0.01);体外可刺激淋巴细胞增殖,并促进IL-1β及IFNγ的分泌;细胞分型试验结果表明促进了CD4+和CD8+T细胞淋巴细胞增殖.结论 成功可溶性表达了SARS-CoV-2 RBD蛋白,其免疫原性良好,为以RBD蛋白为基础研制SARS-CoV-2基因工程疫苗奠定了基础.

[目的]本试验旨在研究短小芽孢杆菌对羔羊生长性能及腹泻、血清指标、结肠组织形态、炎性细胞因子和紧密连接蛋白含量的影响.[方法]选取 36 只初生重 3 kg左右的 1 日龄萨能奶山羊公羔,随机分为 4 组(每组 9 个重复,每重复 1 只羔羊);每天分别饲喂 0(CON组)、1 mL(BP1 组)、5 mL(BP5 组)、10 mL(BP10 组)短小芽孢杆菌菌液,其活菌数为 1×108 CFU/mL,试验期 14 d.[结果]饲喂短小芽孢杆菌对羔羊末重、平均日增重、平均日采食和料重比均无显著影响(P>0.05),但均降低了羔羊的粪便评分和腹泻频率(P<0.05);BP1 组血清中谷草转氨酶含量低于对照组(P<0.05),二胺氧化酶含量低于对照组和BP5组(P<0.05),与对照组相比,其它三组均降低了D-乳酸含量(P<0.05);BP1 组增加了结肠肌层厚度(P<0.05);与对照组相比,BP1 组、BP5 组和BP10 组均降低了IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.05),增加了IL-10、TGF-β、IFN-γ、PPAR-γ的含量以及MUC2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin和ZO-1 的含量(P<0.05),而且减少了结肠组织中性粒细胞细胞浸润.[结论]在初生羔羊代乳粉中添加短小芽孢杆菌可以降低羔羊腹泻频率,改善结肠组织形态,缓解炎症反应,增强黏膜屏障功能,但对生长性能无显著影响.

目的 研究电子束射线对不同载体上白色念珠菌和短小杆菌芽孢的消毒效果,探讨电子束辐照在消毒领域的应用价值.方法 在不同材质载体上以白色念珠菌、短小杆菌芽孢为指示微生物制作染菌载体,用2～6kGy工艺剂量的电子束射线辐照,计算杀灭对数值.选各种染菌载体杀灭对数值均≥3.00的最小工艺剂量做模拟现场实验,评价其消毒效果.结果 电子束辐照剂量达到≥4kGy时,对聚四氟乙烯片、玻璃片、不锈钢片上的白色念珠菌和布片、不锈钢片上的短小杆菌芽孢的平均杀灭对数值≥3.00;当工艺剂量达到≥5kGy时,对牛皮纸片载体上的白色念珠菌和聚四氟乙烯片、玻璃片、牛皮纸片上的短小杆菌芽孢的平均杀灭对数值≥3.00.模拟现场试验中,电子束辐照工艺剂量达到5.12～5.54 kGy时,对四种载体上的白色念珠菌和五种载体上的短小杆菌芽孢的的平均杀灭对数值均≥3.00.结论 电子束辐照剂量达到≥5 kGy时,对不同载体上的真菌和辐照指示微生物有较好的消毒效果.电子束辐照穿透式消毒要综合考虑内容物规格、密度差异等,选择合适的辐照剂量.

[背景]稻瘟病是水稻的三大重要病害之一,每年对水稻生产都会造成较大的损失,生物防治稻瘟病已成防治该病害的重要手段,而目前鲜少有报道从药用野生稻中分离内生菌用以防治稻瘟病.[目的]从药用野生稻内生菌中挖掘对稻瘟病具有拮抗作用的微生物资源.[方法]采用分离法从勐遮药用野生稻中先分离出内生菌,再通过平板对峙法筛选对稻瘟病菌具有拮抗作用的菌株,通过形态学和 16S rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定,同时筛选该菌株的最适培养基、pH、培养温度和摇床转速.[结果]筛选得到拮抗菌株Z5,在LB培养基上对稻瘟病菌菌丝生长的抑制率达到96.43%,经形态学和 16S rRNA基因序列分析,初步鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus).在NYBD、CM、LB、NA和YSP这 5种培养基中,菌株Z5的最适培养基为NYBD培养基、最适pH值为 8.0-9.0、最适培养温度为 35℃、最适摇床转速为 250 r/min.[结论]短小芽孢杆菌Z5 对稻瘟病菌的生长具有较好的抑制作用,且该菌株耐高温、较耐酸碱,作为稻瘟病生防制剂研发具有一定的价值.

海洋放线菌是研究抗结核药物及其先导化合物的重要来源.以耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)作为指示菌,采用平板对峙法,从漳州浅滩泥土分离的77株放线菌中筛选出9株对Msm具有抑制作用的抗性放线菌,其中1株对Msm具有高效抑制作用的桔抗放线菌HY286.通过对菌株HY286的菌落形态观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,初步鉴定其为一株马杜拉属放线菌.通过测定菌株HY286发酵产物的抗耻垢分枝杆菌MIC值、抗菌活性和细胞毒活性.结果表明,该菌株产生化合物的抗耻垢分枝杆菌MIC值为200 μg/mL,具有较好的抗结核分枝杆菌的潜力,且对枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌也具有较好的抑制作用,对HeLa和HepG2的抑制率分别为89.3％和94.2％.

目的:芽孢杆菌dhs-330分离自海水,能够产生脂肽-糖脂混合型表面活性剂.考察该菌株产物的抑菌性能.方法:采用抑菌圈法考察dhs-330发酵液对不同指示菌的抑菌活性,对提取的dhs-330产物进行最小抑菌浓度(MIC)测定,并考察该产物对温度、盐度和pH值的稳定性.结果:菌株dhs-330产物对嗜水气单胞菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有抑菌作用,MIC分别为0.005、0.01、0.01和0.02 g/L;经100℃处理20 min、pH2～10处理30 min,或盐度为0～50的条件下,产物仍具有抑菌活性或略有下降.结论:海洋来源的芽孢杆菌dhs-330胞外脂肽-糖脂混合型产物具有抑菌活性,且在高温、低pH值和高盐度条件下具有稳定性.

产香微生物的研究对天然香料的绿色生产具有深远的意义.本文从醇化中期的烟叶上分离得到一株细菌HD-7,根据形态学、生理生化以及16S rRNA基因序列等特征,对产香菌株HD-7进行了初步鉴定,并利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析其发酵液的成分.结果表明,菌株HD-7初步被鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);其GC-MS检测出的物质中含有较多的香气物质,主要的增香成分有丙酸乙酯,乙酸,乙酸丙酯及3-羟基-2-丁酮(乙偶姻)等,其含量分别占25.56％,12.68％,6.80％,4.86％.其中丙酸乙酯及3-羟基-2-丁酮等都是广泛使用的香料.产香细菌HD-7在生产香料上具有很大的研究价值.

枯草芽孢杆菌UMU4和短小芽孢杆菌SCU11是四川省分子生物学及生物技术重点实验室分离的野生菌株经诱变获得的胞外蛋白酶高产菌株,其分泌的蛋白酶在蛋白废弃物处理方面具有良好的应用前景.为了从这两株芽孢杆菌中筛选出高效利用羽毛的最优菌株,将UMU4和SCU11分别接种到羽毛培养基中并持续发酵6d,通过每天测试羽毛降解率、可溶性多肽含量、氨基酸含量、蛋白酶活及抗氧化活性等指标来评价这两株菌对羽毛的降解能力.结果发现SCU11能更高效地利用羽毛,其羽毛降解率是UMU4的1.2倍,第5天时约有65％的羽毛转化为可溶性肽和氨基酸;SCU11发酵液的ABTS自由基清除率和还原力均在第3天达到最大值,且显著高于UMU4羽毛发酵液的抗氧化活性;SCU11在第5天所产角蛋白酶和碱性蛋白酶的活性分别是UMU4的1.6和1.2倍.在此基础上,将来自于SCU11的羽毛降解产物经HCl沉淀和疏水层析获得了4个抗氧化肽组分,其中组分F3的抗氧化活性最高.本研究表明芽孢杆菌SCU11较之UMU4具有更高的产酶活性及更强的羽毛降解能力,结果可为家禽羽毛的资源化应用奠定基础.

从短小芽孢杆菌中克隆阿拉伯呋喃糖苷酶基因xyn43并重组表达,有利于将该酶分离纯化后应用于其他半纤维素多糖的水解.该研究利用E. coli BL21表达系统对实验室克隆到的短小芽孢杆菌的α?L?阿拉伯呋喃糖苷酶基因xyn43进行重组表达并分析其酶学性质,将重组α?L?阿拉伯呋喃糖苷酶Xyn43和来源于棒曲霉突变菌株的商业木聚糖酶联合作用于燕麦木聚糖.结果表明:以燕麦木聚糖为底物,重组α?L?阿拉伯呋喃糖苷酶Xyn43的最适温度为50 ℃,最适pH为6.0.该酶在pH 5.0~10.0和45~55 ℃下较稳定.与木聚糖酶单独作用相比,重组Xyn43酶与商业木聚糖酶同时加入以及先用木聚糖酶水解后加入Xyn43酶,水解产物中的还原糖含量分别增加了16%和20%,木糖含量增加了35%和48%.该结果研究结果表明重组Xyn43酶能够和商业木聚糖酶协同降解燕麦木聚糖,提高水解效率,产生更多的木寡糖,阿拉伯糖和木糖.

为了获得表达量高、稳定性好及染料脱色效率高的细菌漆酶,通过PCR扩增出短小芽孢杆菌LC01的漆酶基因并构建重组表达载体pPICZαA-lac,转化毕赤酵母菌株SMD1168H后利用甲醇诱导培养重组菌获得重组漆酶,纯化并分析了重组漆酶的性质.重组菌株产漆酶活性在第7天达到最高,为1390 U/L.纯化的重组漆酶分子量为65 kD,以丁香醛连氮为底物的最适反应温度和pH分别为70℃和6.8.在pH 9.0放置10d活性没有下降,在70℃保温10h后仍保留36％的酶活.Al3+、Fe3+和Mn2+完全抑制漆酶活性.在介体乙酰丁香酮参与下该漆酶能够有效脱色RB亮蓝、活性黑5和靛红,在pH 9.0时6h的脱色率达到了90％以上,表明该重组漆酶能有效应用于染料废水的脱色处理.