目的:芽孢杆菌dhs-330分离自海水,能够产生脂肽-糖脂混合型表面活性剂.考察该菌株产物的抑菌性能.方法:采用抑菌圈法考察dhs-330发酵液对不同指示菌的抑菌活性,对提取的dhs-330产物进行最小抑菌浓度(MIC)测定,并考察该产物对温度、盐度和pH值的稳定性.结果:菌株dhs-330产物对嗜水气单胞菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有抑菌作用,MIC分别为0.005、0.01、0.01和0.02 g/L;经100℃处理20 min、pH2～10处理30 min,或盐度为0～50的条件下,产物仍具有抑菌活性或略有下降.结论:海洋来源的芽孢杆菌dhs-330胞外脂肽-糖脂混合型产物具有抑菌活性,且在高温、低pH值和高盐度条件下具有稳定性.

鼠李糖脂是近年来具有广阔应用前景的生物表面活性剂之一,因应用范围广和环境友好等特点,使其成为潜在的合成表面活性剂的替代品.本研究以一株能产生鼠李糖脂的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa) DN1为研究对象,采用Plackett-Burman设计和响应曲面方法(RSM)对其产鼠李糖脂的发酵条件进行优化.Plackett-Burman试验设计表明,磷酸盐、C/N比和pH值对鼠李糖脂的产量具有显著影响.在此基础上,采用RSM对3个显著因素的最佳水平范围进行研究,结果表明当磷酸盐为1.71 g/L、C/N比为15.5、pH值为6.5时,其理论最佳鼠李糖脂产量为40.4 g/L,与实测鼠李糖脂产量39.84 g/L非常接近.摇瓶优化后的鼠李糖脂产量较优化前的22.9 g/L提高了73.97％.

鼠李糖脂是一种具有巨大潜力的阴离子生物表面活性剂,可应用于石油、食品、农业、日化工业等领域.探讨以抽油烟机废油为碳源发酵产鼠李糖脂的可能性,以铜绿假单胞菌WB505为出发菌体,在7 L发酵罐中鼠李糖脂的产量达到12.3±0.52 g/L.利用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析出所产鼠李糖脂的组成,结果显示其主要含Rha-C10-C10和Rha2-C10-C10,其中单鼠李糖脂和双鼠李糖脂的总相对丰度分别为49.7％和50.3％.所产鼠李糖脂的临界胶束浓度(CMC)为45.0 mg/L,能将表面张力从60.5±0.81 mN/m降至25.3±0.68 mN/m,乳化系数E24均>60％,并且对苯的乳化系数达到80.3±0.85％.以抽烟机废油为底物生产鼠李糖脂降低底物成本,为抽油烟机废油提供一种循环再利用处理方式.

近年来,持久性有机污染物对农田污染状况加剧,对人类食品安全和身体健康造成严重威胁.本实验以温室蔬菜基地中老化的有机污染土壤为目标,选取了DDTs和PAHs两种典型持久性有机污染物为去除对象,运用原位实验,研究了不同调控措施对有机污染土壤的修复效果及土壤酶活性的变化情况,并对污染物去除率与酶活性变化进行了相关性分析.结果表明,根际促生菌和木质素共同调控下的鼠李糖脂强化植物-微生物联合修复方法对有机污染物的去除效果最好,DDTs去除率为27.48％,PAHs去除率为53.26％;修复结束后,土壤多酚氧化酶、过氧化氢酶均被激活,激活程度表现为过氧化氢酶＞多酚氧化酶,磷酸酶活性被抑制,使用Pearson双变量法对土壤酶活性与污染物去除率进行统计学分析发现,多酚氧化酶、磷酸酶与DDTs和PAHs去除率存在较好相关性,因此可以将这两种酶活性定义为修复过程中的一项微生态指标.

发酵碳源对铜绿假单胞菌NY3(Pseudomonas aeruginosa NY3)产鼠李糖脂(Rhamnolipids,Rha)的特性影响较大.研究了利用废弃动物油作为发酵碳源时,其碱预水解和酶预水解对NY3菌发酵产鼠李糖脂产量、产物结构和性能的影响,从碳源水解酸值与水解产物、鼠李糖脂组分结构和实际应用效果进行了研究.碱、酶预水解实验发现,碳源酸值由初始的19.81 mg/g分别提高到72.04 mg/g和73.75 mg/g,气质联用(GC-MS)分析检测结果表明,碱、酶预水解后,碳源均释放7种C14-C18碳链的脂肪酸,鼠李糖脂产量由未预水解的8.28 g/L分别提高到15.35 g/L和17.63 g/L.液质联用(LCMS-IT-TOF)分析结果表明,用未预水解及碱、酶预水解碳源发酵时,NY3菌所产鼠李糖脂中单糖脂含量分别为62.07％ 、65.67％ 、87.32％.利用NY3菌在中试条件下处理高浓度石化企业油污泥,发现鼠李糖脂能促进NY3菌去除油污泥中的石油烃,且促进作用强弱顺序为未预水解产Rha>碱预水解产Rha>酶预水解产Rha.

[背号]甘蔗黑穗病是一种主要的甘蔗病害,易造成甘蔗严重减产;鼠李糖脂是一种生物表面活性剂,可作为多种植物真菌病害的抑菌剂.[目的]研究生物表面活性剂鼠李糖脂对甘蔗黑穗病菌的体外抗菌活性及初步的抗菌机理.[方法]采用甘蔗黑穗病冬孢子萌发试验研究鼠李糖脂对甘蔗黑穗病冬孢子的抗菌作用.采用菌丝生长速率法和菌丝干重法对鼠李糖脂的体外抑菌试验进行检测;通过菌丝电导率的变化研究鼠李糖脂对甘蔗黑穗病菌细胞膜通透性的影响.[结果]鼠李糖脂能显著抑制甘蔗黑穗病菌孢子萌发,其中2.0 g/L鼠李糖脂对甘蔗黑穗病冬孢子萌发的抑制效果最好,抑制率达45.03％.鼠李糖脂能显著抑制甘蔗黑穗病菌双核菌丝体、单胞菌a和单胞菌b的生长.鼠李糖脂能使甘蔗黑穗病单胞菌细胞膜透性增加,与对照相比,2.0 g/L鼠李糖脂处理甘蔗黑穗病双核菌丝体0.5 min后电导率升高了约9倍,处理单胞菌a 30 min后电导率提高了94.23％;0.1 g/L鼠李糖脂处理甘蔗黑穗病单胞菌b 30 min后电导率升高了54.49％,随着浓度的增加,各处理电导率升高显著.[结论]鼠李糖脂对甘蔗黑穗病菌有良好的抗菌作用,有望为甘蔗黑穗病的防治提供新方法.

目的 探讨细菌对柴油降解能力以及细胞表面疏水性及环境影响因子的影响.方法 从新疆油田石油污染土壤中分离一株在25℃下高效降解柴油的菌株,考察不同环境因素对细胞表面疏水性的影响,不同疏水性菌体对柴油降解能力的差别,添加不同浓度鼠李糖脂对细胞疏水性及菌株柴油降解性能的影响.结果 经鉴定该菌株为Acinetobacter sp.,命名为3064.通过接触角测量法、盐析凝聚法及烃类化合物吸附等方法证明其为一株高疏水性菌株(CSH>80％),通过改变环境因素会影响菌株的疏水性,进而影响其对柴油的降解效率.添加一定浓度的鼠李糖脂表面活性剂能够增加菌株的疏水性,降低菌株表面脂多糖含量,增加其表面负电荷,这有助于菌株对柴油的吸收和降解.结论 菌株3064的细胞表面具有很强的疏水性,这有助于菌体细胞对柴油中烃类的摄取.通过改变环境因素及外源添加鼠李糖脂可以加快菌株对柴油的降解.

本研究利用Red/ET DNA重组技术对实验室已有的含鼠李糖基转移酶基因RhlAB的分泌表达载体pBBR1-genta-RhlAB进行修饰,将3种不同强度组成型启动子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替换了RhlAB基因在铜绿假单胞菌中的原始启动子,成功获得了表达载体pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并将这些表达载体分别在防御假单胞菌Pf-5中异源表达,通过LB培养基发酵42 h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂产量为17.56 mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-Rh1AB,Pf-5/pBBR1-kan-Plac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分别是11.135 mg/L,441.135 mg/L,557.764 mg/L,启动子优化后产量分别是原始启动子的0.63,25.12和31.76倍.对发酵产物进行高效液相色谱-质谱联用技术分析,共检出相对含量变化的4类质核比不同的鼠李糖脂同系物.并通过实时荧光定量PCR检测RhlAB基因的表达量,发现启动子替换为Ptac和PrhaB后RhIAB基因表达量分别是原始启动子的2.16和2.77倍.本研究初步实现了RhlAB基因在Pf-5中的表达,发现组成型启动子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始启动子表达效率更高,可为异源合成鼠李糖脂提供重要参考.

[目的]研究银杏叶正丁醇部位的化学成分,并对分离得到的化合物进行1,1-二苯基-2-苦肼基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(2,2'-azino bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS)抗氧化活性评价.[方法]采用聚酰胺、硅胶、反相十八烷基硅烷键合硅胶(octade-cylsilyl,ODS)等色谱柱对银杏叶正丁醇部位进行分离纯化,并根据波谱数据和理化性质对单体化合物进行结构鉴定.采用DPPH和ABTS自由基清除实验对分离得到的化合物进行抗氧化活性评价.[结果]从银杏叶正丁醇部位共分离鉴定了6个化合物,分别为5-羟甲基糠醛(1)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷(2)、山奈酚-3-O-β-D-芸香糖苷(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、姜糖脂A(5)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(6).化合物1、2对DPPH自由基的半数清除率(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为(1 156.49±45.37)μmol· L-1和(529.85±11.36)μmol·L-1,化合物1、2、3对ABTS自由基的IC50分别为(843.06±8.94)μmol·L-1、(87.48±2.28) μmol·L-1和(200.86±11.72)μmol·L-1.[结论]化合物1、4～6为首次从银杏叶中分离得到.化合物1、2在DPPH和ABTS自由基清除实验中均显示出抗氧化活性,化合物3仪表现出清除ABTS自由基的能力.

为探讨黄芪-苍术改善糖尿病肾病糖脂代谢的作用机制.运用网络药理学方法,通过中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选出黄芪、苍术的有效活性成分和作用靶点,再利用Drug Bank、GeneCards、OMIM等数据库筛选出与糖尿病肾病相关的潜在作用靶点.采用Cytoscape 3.6.1软件和Metascape数据库构建活性成分-靶点网络图,利用KEGG和GO富集分析药物与糖脂代谢相关的信号通路.通过筛选得出黄芪和苍术有效活性成分29个,其中槲皮素、山奈酚、汉黄芩素、异鼠李素等成分可能是通过靶向PIK3CG、AKT1、MAPK1、IGF2等靶点,参与mTOR、胰岛素、脂肪细胞因子、Jak-STAT信号通路发挥调节糖尿病肾病糖脂代谢作用.综上,黄芪-苍术改善糖尿病肾病糖脂代谢存在多成分、多靶点和多重药理作用,为进一步研究治疗糖尿病肾病提供了线索.