目的:探究Akkermansia muciniphila(AKK)对葡聚糖硫酸钠溶液(DSS)诱导的小鼠模型的影响。方法:无特定病原体(SPF)级C57BL/C雄性小鼠30只，依次分为空白组、结肠炎组、AKK+结肠炎组。观察每组小鼠的日常活动量、排便情况，选择疾病活动指数(DAI)进行疾病活动度评估，收集粪便行粪便做隐血试验等，在建模结束7 d后采用断头法处死小鼠，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，苏木精-伊红(HE)检测结肠病理结构，蛋白质印迹法(Western blot)检测结肠黏膜中紧密连接蛋白Occludin-1的表达，二喹啉甲酸(BCA)法测定结肠组织二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸的浓度。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行统计分析，组间两两比较用LSD- t或Tamhane’s T2法进行显著性分析。 结果:第3、7、21天空白组的体重分别为(17.01±1.30)、(19.77±1.85)、(21.07±1.80) g，结肠炎组的体重分别为(15.67±0.65)、(13.66±0.62)、(11.72±0.53) g，AKK+结肠炎组的体重分别为(15.74±1.43)、(15.14±1.31)、(13.37±1.46) g，第3天结肠炎组的体重有低于AKK+结肠炎组的趋势，但差异无统计学意义(LSD- t＝0.133， P>0.05)，第7天及第21天时结肠炎组及AKK+结肠炎组体重显著低于空白对照组(LSD- t＝10.061、15.272， P<0.01)，结肠炎组低于AKK+结肠炎组(LSD- t＝2.436、2.706， P<0.05)。第3、7、21天空白组的DAI指数均为0，结肠炎组的DAI指数分别为1.25±0.06、2.26±0.13、3.13±0.08，AKK+结肠炎组的DAI指数分别为0.89±0.43、1.53±0.05、2.45±0.10，AKK+结肠炎组DAI评分低于结肠炎组(LSD- t＝3.242、20.444、2.027， P<0.05)。HE结果显示结肠炎组隐窝排列不规则、炎症细胞浸润、肠腺水肿，AKK菌灌胃后，结肠水肿和出血减轻，肠腺结构清晰，空白组、结肠炎组、AKK+结肠炎组的病理评分分别为(0.76±0.03)、(4.07±0.05)、(2.82±1.03)分，AKK+结肠炎组高于空白组、低于结肠炎组(LSD- t＝13.208、5.985， P<0.05)。结肠炎组中IL-1β、IL-6、TNF-α分别是(8.61±3.06)、(5.58±2.23)、(55.68±18.57) pg/ml，明显高于空白组(Tamhane’s T2＝6.584、7.175、9.239， P<0.01)，与结肠炎组相比，AKK+结肠炎组IL-1β、IL-6、TNF-α表达下降，分别是(5.51±2.32)、(3.12±0.89)、(20.94±8.05) pg/ml(Tamhane’s T2＝3.047、3.667、6.617， P<0.05)。结肠炎组中Occludin-1、D-乳酸、DAO分别是(615.56±41.87) ng/ml、(4.37±0.15) μg/ml、(8.93±0.07) ng/ml，明显高于空白组(Tamhane’s T2＝19.059、36.071、23.676， P<0.01)，与结肠炎组比较，AKK+结肠炎组Occludin-1、D-乳酸、DAO分别是(887.55±42.48) ng/ml、(3.57±0.20) μg/ml、(7.41±0.07) ng/ml。与结肠炎组相比，差异有统计学意义(Tamhane’s T2＝14.421、47.183、1.020， P<0.01)。 结论:AKK菌可降低IL-1β、IL-6、TNF-α含量，通过调控Occludin-1等结肠紧密连接蛋白，从而降低结肠炎的严重程度，增强结肠的屏障功能。

1例63岁男性患者行开颅血肿清除术后因颅内感染给予头孢哌酮钠舒巴坦钠3 g、1次/8 h联合多黏菌素B 50万U、1次/12 h静脉滴注，5 d后加用多黏菌素B 5万U、1次/d鞘内注射。用药前患者左、右下肢肌力分别为3、4级。第4次鞘内注射硫酸多黏菌素B后约20 min，患者出现双下肢无力，约9 h后双下肢肌力均降至1级。考虑患者的下肢肌无力可能与鞘内注射多黏菌素B有关，停用鞘内注射及静脉滴注用多黏菌素B，改为头孢哌酮钠舒巴坦钠2 g、1次/6 h联合万古霉素1 g、1次/12 h静脉滴注。5 d后，患者左、右下肢肌力分别恢复至3级和4级。

目的:建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病(IBD)模型，分析不同时期肠道炎症改变及巨噬细胞亚群变化，为IBD的治疗寻找新靶点。方法:将30只6～8周雄性C57BL/6小鼠简单随机分为对照组、急性活跃期组、组织消退期组。后2组连续5 d饮用25 g/L DSS建立IBD模型，5 d后更换为滤过除菌水，分别在第10天和第15天处死小鼠。对小鼠结肠炎症进行评估，包括体质量、疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度变化、病理组织学及其评分；采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测结肠组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β的表达水平；采用流式细胞术检测肠道巨噬细胞亚群变化。结果:急性活跃期组小鼠结肠炎症较对照组明显严重，组织消退期组小鼠结肠炎症减轻。急性活跃期组小鼠结肠长度为(5.94±0.40) cm，较对照组[(7.25± 0.29) cm]明显缩短，组织消退期得到轻微改善[(6.87±0.95) cm]，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。急性活跃期小鼠促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平分别为53.40±6.58、117.69±30.78、2.52±0.25，均明显高于对照组(1.00±0.13、1.00±0.39、1.00±0.10)；组织消退期IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平分别为2.51±0.13、5.43±0.51、1.73±0.14，均明显低于急性活跃期组(均 P<0.05)；组织消退期抗炎细胞因子TGF-β表达水平为2.41±0.17，明显高于急性活跃期组(0.94±0.12)，差异有统计学意义( P<0.05)。IBD进展过程中，小鼠肠黏膜固有层存在三群巨噬细胞，其中成熟度最低的F4/80 lowCD 64-MHCⅡ -亚群巨噬细胞在IBD活跃期数量显著升高，占比为(10.68±4.62)%，在消退期数量减少并恢复至正常水平，占比为(4.63±1.06)%，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:巨噬细胞在IBD进展中发挥重要作用，其成熟发育受阻可能是IBD活跃期炎症损伤的主要原因，而针对巨噬细胞亚群转化可能成为IBD治疗的新靶点。

目的:探讨黏附侵袭性大肠埃希菌( E. coli)LF82菌株对UC小鼠肠道屏障结构和功能的影响。 方法:将24只清洁级C57BL/6小鼠分为菌株UC组、UC组和健康对照组，每组8只。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型，造模前1周，给予菌株UC组小鼠1×10 9 CFU E． coli LF82菌株灌胃，使菌株定植。通过疾病活动指数(DAI)、结肠大体形态损伤评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)、结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性、组织病理学表现等比较 E. coli LF82对UC小鼠结肠炎症的作用。通过透射电子显微镜和直接免疫荧光染色法观察3组小鼠结肠组织超微结构和细胞骨架F-肌动蛋白的变化，采用过碘酸希夫反应(PAS)染色和天狼星红染色评估结肠黏液分泌能力和纤维化程度。采用 t检验、最小显著差异法、重复测量方差分析和单因素方差分析进行统计学分析。 结果:菌株UC组小鼠造模第4、5、6、7天DAI评分均高于UC组[分别为(2.53±0.38)分比(2.01±0.53)分、(3.02±0.62)分比(2.67±0.24)分、(3.13±0.61)分比(2.20±0.24)分、(3.27±0.28)分比(2.20±0.69)分]，差异均有统计学意义( t＝3.37、2.25、9.56、10.24， P均<0.05)。菌株UC组小鼠结肠的大体形态损伤评分高于UC组[(6.17±1.94)分比(2.83±0.98)分]，差异有统计学意义( t＝－3.75， P<0.05)。菌株UC组小鼠CMDI和结肠黏膜MPO活性均高于UC组[(16.80±2.79)分比(11.80±3.11)分、(729.3±77.5) U/mg比(594.4±31.9) U/mg]，差异均有统计学意义( t＝－2.83；均值差值为134.82，95% CI 72.12～197.51； P均<0.05)。透射电子显微镜下结果显示，菌株 E. coli LF82可侵入小鼠肠上皮下，引起结肠组织进一步损伤，使结肠骨架蛋白F-肌动蛋白分布状况发生改变。PAS染色结果显示，菌株UC组和UC组PAS阳性细胞百分比低于健康对照组[(32.40±8.02)%、(41.90±8.99)%比(57.70±11.52)%]，差异有统计学意义( F＝17.63， P<0.01)，菌株UC组PAS阳性细胞百分比低于UC组，差异有统计学意义(均值差值为－9.50，95% CI －18.33～－0.67， P<0.05)。天狼星红染色结果显示，菌株UC组结肠黏膜绒毛上皮部分被破坏，胶原纤维增生严重；菌株UC组和UC组胶原纤维面积比高于健康对照组[(51.83±5.78)%、(37.11±5.59)%比(15.41±2.25)%]，差异有统计学意义( F＝86.72， P<0.01)；菌株UC组胶原纤维面积比高于UC组，差异有统计学意义(均值差值为14.83，95% CI 8.91～20.76， P<0.05)。 结论:E． coli LF82可加重DSS诱导的UC小鼠结肠炎症，导致结肠超微结构和细胞骨架发生改变，还可降低小鼠结肠黏液分泌能力，增加结肠组织纤维化程度。

目的:构建能够表达人重组蛋白Elafin的益生菌大肠杆菌Nissle 1917（EcN），并探讨其对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的急性小鼠结肠炎的保护作用。方法:构建带有Elafin基因的重组质粒，将其转入感受态EcN，构建能够表达Elafin蛋白的益生菌EcN-Elafin。通过Western印迹证实该益生菌在体外成功表达Elafin。C57/BL6J小鼠随机分为4组：健康对照组（PBS组）、结肠炎组（DSS组）、野生型EcN（EcN-WT）治疗结肠炎组（EcN-WT组）、EcN-Elafin治疗结肠炎组（EcN-Elafin组）。每天同一时间测量小鼠体重、观察小鼠排便情况及计算疾病活动度指数（DAI）。小鼠处以安乐死后测量结肠长度，苏木精-伊红（HE）染色及组织病理学评分比较各组肠黏膜炎症程度，流式细胞术检测结肠固有层浸润中性粒细胞和巨噬细胞的比例，酶联免疫吸附法（ELISA）定量结肠组织中的肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6及趋化因子CXCL-1的蛋白表达水平。结果:在EcN-Elafin的培养基上清和菌体沉淀中均能检测到Elafin蛋白。与DSS组相比，EcN-Elafin组和EcN-WT组小鼠体重减轻状况和DAI评分均明显改善。EcN-Elafin组小鼠结肠长度显著长于DSS组。EcN-Elafin组结肠炎组织学评分显著低于DSS组（5.3±2.3比9.3±1.4， P<0.05）。与DSS组小鼠相比，EcN-Elafin组小鼠结肠固有层浸润的中性粒细胞［（8.65±1.49）% 比（17.60±2.16）%， P<0.01］和巨噬细胞［（3.79±0.26）% 比（5.73±0.45）%， P<0.01］比例均显著降低。EcN-Elafin组和EcN-WT组结肠中TNF-α、IL-6、和CXCL-1蛋白质表达水平均显著低于DSS组。 结论:表达Elafin的益生菌EcN-Elafin能够显著减轻DSS诱导的急性小鼠结肠炎，对肠黏膜炎症具有保护作用，为临床炎症性肠病的治疗提供一种新的经济有效的方法。

目的:观察并分析肠屏障在自身免疫性肝炎(AIH)发病中的作用，为阐释AIH的发病机制和探索基于肠道的治疗策略提供方向。方法:纳入2017年1至12月在天津医科大学总医院就诊的14例AIH患者(AIH无肝硬化组6例，AIH肝硬化组8例)和10名健康对照(健康对照组)，采用ELISA法检测各组血清D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)含量，实时荧光定量PCR检测各组回肠末端组织紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)]、细胞因子[IL-2、干扰素γ、IL-4和IL-10]和TLR4的相对表达量，蛋白质印迹法检测回肠末端组织分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的相对表达量。选取30只BALB/c小鼠分为空白组、葡聚糖硫酸钠(DSS)组、刀豆蛋白A(ConA)组、DSS＋ConA组、DSS＋灌菌＋ConA组，每组6只，检测各组小鼠结肠组织ZO-1和闭合蛋白的相对表达量，血清转氨酶水平(ALT、AST)和肝组织学炎症活动度Knodell评分。统计学方法采用独立样本 t检验和单因素方差分析。 结果:AIH肝硬化组和AIH无肝硬化组的血清D-乳酸和DAO水平均高于健康对照组[(1 768.2±147.1) μg/L、(436.2±197.0) μg/L比(100.2±10.9) μg/L和(11.5±2.5) U/L、(5.4±0.9) U/mL比(3.5±0.9) U/mL]，且AIH肝硬化组血清D-乳酸和DAO水平最高，差异均有统计学意义( t＝5.512、36.010、4.088和9.443， F＝396.958、46.640， P均<0.01)。AIH肝硬化组的肠黏膜ZO-1、闭合蛋白的相对表达量均低于健康对照组(0.20±0.14比1.67±0.51，0.12±0.09比0.90±0.21)，AIH无肝硬化组ZO-1的相对表达量低于健康对照组(0.99±0.37比1.67±0.51)，差异均有统计学意义( t＝8.641、7.407、2.295， P均<0.05)。AIH肝硬化组回肠末端组织中IL-2、干扰素γ的相对表达量均高于健康对照组(1.11±0.43比0.24±0.16和3.50±1.90比0.32±0.30)，肠黏膜sIgA的相对表达量低于健康对照组(0.506±0.024比1.081±0.102)，差异均有统计学意义( t＝4.679、3.981、5.493， P均<0.05)；AIH肝硬化组和AIH无肝硬化组IL-10的相对表达量均低于健康对照组(0.30±0.20、0.42±0.24比0.84±0.23)，回肠末端组织TLR4的相对表达量均高于健康对照组(8.74±5.13、6.74±3.65比0.89±0.70)，差异均有统计学意义( t＝3.095、4.816、3.856、3.685， P均<0.05)。DSS＋ConA组肠黏膜ZO-1和闭合蛋白的相对表达量均低于ConA组(0.14±0.08比0.98±0.13和0.09±0.02比0.98±0.16)，血清ALT、AST水平和Knodell评分均高于ConA组[(5 496.67±618.83) U/L比(3 325.00±1 030.06) U/L、(8 825.00±1 165.35) U/L比(5 433.33±1 691.14) U/L和(18.00±2.00)分比(9.33±3.01)分]，差异均有统计学意义( t＝13.480、13.520、4.427、4.045、－2.892， P均<0.01)。DSS＋灌菌＋ConA组肠黏膜ZO-1和闭合蛋白的相对表达量均高于DSS＋ConA组(0.46±0.08比0.14±0.08和0.53±0.15比0.09±0.02)，血清ALT、AST水平均低于DSS＋ConA组[(4 343.33±252.16) U/L比(5 496.67±618.83) U/L和(6 123.33±1 086.60) U/L比(8 825.00±1 165.35) U/L]，差异均有统计学意义( t＝6.928、7.122、4.228、4.153， P均<0.01)。 结论:AIH患者的肠道通透性增高、肠屏障被破坏，且肝硬化患者较非肝硬化患者的程度更严重。肠屏障被破环会加重ConA诱导的免疫性肝损伤，而保护和修复肠屏障则可相对减轻ConA诱导的免疫性肝损伤。

目的:探讨连续性肾脏替代治疗（CRRT）对硫酸黏菌素血药浓度、临床疗效及安全性的影响。方法:从本课题组前期临床注册研究，即硫酸黏菌素治疗重症监护病房（ICU）重症感染患者的有效性和药代动力学特点的前瞻性、多中心观察研究中，收集接受硫酸黏菌素治疗患者的临床数据进行回顾性分析，根据是否接受血液净化治疗将患者分为CRRT组和非CRRT组。收集两组患者的基线资料（性别、年龄、是否合并糖尿病、慢性神经系统疾病等）、一般资料（感染病原菌及部位、稳态谷浓度、稳态峰浓度、临床有效率，28 d全因病死率等）以及不良事件（肾功能损伤、神经症状、皮肤色素沉着等）。结果:共纳入90例患者，其中CRRT组22例，非CRRT组68例。①两组患者在性别、年龄、基础疾病、肝功能、感染病原菌、感染部位、硫酸黏菌素剂量等资料比较差异均无统计学意义。与非CRRT组相比，CRRT组患者急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）、序贯器官衰竭评分（SOFA）更高〔APACHEⅡ（分）：21.77±8.26比18.01±6.34， P<0.05；SOFA（分）：8.5（7.8，11.0）比6.0（4.0，9.0）， P<0.01〕，血肌酐水平更高〔μmol/L：162.0（119.5，210.5）比72.0（52.0，117.0）， P<0.01〕。②血药浓度：CRRT组与非CRRT组患者稳态谷浓度差异未见统计学意义（mg/L：0.58±0.30比0.64±0.25， P＝0.328），稳态峰浓度差异也未见统计学意义（mg/L：1.02±0.37比1.18±0.45， P＝0.133）。③临床疗效：CRRT组与非CRRT组临床有效率差异无统计学意义〔68.2%（15/22）比80.9%（55/68）， P＝0.213〕。④安全性：仅非CRRT组患者中有2例（2.9%）发生急性肾损伤；两组患者均未发现明显的神经系统症状以及皮肤色素沉着等不良反应。 结论:CRRT对硫酸黏菌素药物的消除影响较小。对于接受CRRT治疗的患者，常规的血药浓度监测（TDM）是有必要的。

目的:研究复合益生元制剂对右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）小鼠的治疗效果及其作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、美沙拉嗪组和益生元组，每组10只。对照组连续7 d给予饮用水，其余3组连续7 d自由饮用3% DSS水溶液建立UC小鼠模型。造模成功后第1天起美沙拉嗪组和益生元组同步灌胃给药（10 ml/kg），对照组和模型组给予等体积生理盐水，连续9 d，每天记录小鼠体重、粪便性状及便血情况；9 d后处死小鼠，测量结肠长度，HE染色评估小鼠结肠组织病理学变化，ELISA法检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）水平，并通过16S rRNA测序法检测小鼠肠道菌群的变化。结果:与模型组相比，益生元组制剂给药治疗后小鼠体重降低减缓，腹泻和便血症状显著改善，差异有统计学意义（ P<0.05），结肠黏膜病理损伤显著减轻（ P<0.05），结肠组织TNF-α、IL-6水平均显著降低［（945.3±7.23）ng/ml vs.（1 069.0±12.07）ng/ml，（178.0±1.24）ng/ml vs.（182.7±1.16）ng/ml］，差异有统计学意义（ P<0.05）。UC小鼠肠道菌群多样性降低，经复合益生元制剂治疗后，菌群多样性有一定的提高，在门水平上主要表现为厚壁菌门和变形菌门显著降低，拟杆菌门丰度增高，属水平上主要为 Muribaculaceae_unclassified和拟杆菌属丰度增高，螺杆菌属丰度降低。 结论:复合益生元制剂可有效治疗UC小鼠，其通过恢复和改善肠道菌群多样性调节UC小鼠的肠道菌群组成，从而发挥治疗作用。

患者女，38岁，因口腔糜烂1个月，面部、躯干、四肢红斑、水疱20 d就诊。患者1个月前无明显诱因下出现口腔黏膜糜烂，伴疼痛，糜烂逐渐增多，当地医院行组织病理检查示寻常型天疱疮（pemphigus vulgaris，PV）。20 d前躯干部皮肤开始出现红斑、松弛水疱、大疱，易破溃，逐渐蔓延至四肢近端及面部，无发热、关节疼及光敏等症状。既往史：15年前诊断系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE），近10年服用甲泼尼龙（6 mg/d）并间断加用硫酸羟氯喹（0.2 g每日2次）。对头孢类抗生素、青霉素、磺胺、洛美沙星、阿奇霉素、达那唑过敏。除长期服用甲泼尼龙及硫酸羟氯喹外否认接触新药史。体检：各系统未见明显异常。皮肤科检查：颊部、胸背及四肢近端散在红斑和0.5 ~ 4.0 cm不等薄壁松弛水疱，疱液清亮，尼氏征阳性，其间散在糜烂及渗出（图1A）。上下齿龈黏膜、颊黏膜及上腭后部多处糜烂（图1B）。未见面部蝶形红斑、脱发及关节肿胀。实验室检查：血常规示白细胞9.10 × 10 9/L，嗜酸性粒细胞计数1.12 × 10 9/L[参考值：（0.02 ~ 0.52） × 10 9/L，下同]，红细胞4.35 × 10 12/L，血红蛋白126 g/L（115 ~ 150 g/L），血小板503 × 10 9/L。肝肾功能、尿便常规未见异常。抗核抗体阴性（1个月及2个月复查均为1∶320），红细胞沉降率、免疫球蛋白、补体C3及C4、抗链球菌溶血素O、类风湿因子、抗ENA抗体、抗双链DNA抗体、C反应蛋白均正常；抗桥粒芯糖蛋白1（Dsg1）抗体26.19 RU/ml（阴性< 20 RU/ml），Dsg3抗体138.02 RU/ml（阴性< 20 RU/ml）。血清免疫印迹试验：表皮产物出现Dsg3条带，未见其他条带。口腔黏膜病理：表皮内水疱，基底细胞层上棘层松解（图1C）；未见基底细胞空泡样变性，炎症细胞浸润以淋巴细胞为主。

例1 　男，31岁，2019年11月3日因脑外伤后意识障碍至福建医科大学附属第一医院就诊，住院期间患者持续发热、昏迷。11月11日脑脊液培养示肺炎克雷伯菌阳性，药敏试验示多黏菌素、米诺环素、替加环素敏感。诊断为脑室炎及肺炎。予静脉注射硫酸多黏菌素B 50 mg/d、脑室内注射5 mg/d，用药后全身皮肤黏膜色素沉着并逐渐加深，用药5 d后，肤色较前显著变黑（图1A），此后持续加深，范围逐渐扩大，期间行2次肝肾功能检查：丙氨酸氨基转移酶71、63 U/L（参考值9 ~ 50 U/L，下同），肌酐31.6、35.0 μmol/L（57 ~ 97 μmol/L）。用药后患者神志较前好转，治疗1个月后体温回落至正常。