微管蛋白抑制剂特异性作用于微管蛋白、干扰细胞有丝分裂、造成细胞周期停滞,从而诱导细胞凋亡.微管蛋白抑制剂按其结合部位可分为作用于秋水仙碱位点、长春花碱位点和紫杉醇位点的抗寄生虫微管蛋白抑制剂.综述了微管蛋白抑制剂抗寄生虫病的研究进展及其作用机制,旨在对抗寄生虫药物的研究提供参考.

目的:本论文深入探究黎药海南地不容抗乳腺癌活性化合物氧化克班宁对微管网络的破坏能力,研究氧化克班宁在分子层面和细胞层面对微管网络稳态的影响.方法:首先采用EBI位点竞争法和分子对接来确定氧化克班宁对微管位点的占据力;其次,采用Western Blot法检测STAT3、PKA1、CAMK4和PKA 检测氧化克班宁对微管蛋白的影响.结果:EBI位点竞争法结果显示,EBI与β-微管蛋白加合物比β-微管蛋白出现在分子量更小的区域(ctrl2).分子对接结果显示,氧化克班宁可以占据微管蛋白的秋水仙碱位点.Western Blot结果显示,低、中、高3个浓度的氧化克班宁或阳性药Taxol作用MCF-7细胞48 h后,显著降低STAT3蛋白表达水平(P<0.01),显著降低PKA1和CAMK4蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),并且可降低PKA蛋白表达水平,与对照组差异均有统计学意义(P<0.01).结论:氧化克班宁结合在微管蛋白秋水仙碱位点扰乱微管蛋白聚合,造成MCF-7细胞有丝分裂,从而导致MCF-7细胞死亡.氧化克班宁可通过抑制MCF-7细胞中STAT3、PKA1、CAMK4和PKA蛋白的表达水平,干扰纺锤体形成,最终造成MCF-7细胞有丝分裂灾难.

背景:姜黄素对肝纤维化及肝硬化过程中必然发生的、可导致门脉高压的特征性病变"肝窦毛细血管化"是否有干预能力,其作用机制如何,目前尚不明确.目的:观察姜黄科植物药用活性成分姜黄素对肝窦内皮细胞微观结构及分泌功能的影响,及其干预肝窦毛细血管化及抗肝纤维化的药理作用机制和靶位点.方法:培养大鼠肝窦内皮细胞,实验分7组:空白对照组无干预措施,瘦素激活组建立瘦素激活细胞模型;姜黄素高、中、低剂量组为瘦素激活细胞后分别以32, 16,8 μmol/L姜黄素干预;最后2组为瘦素激活细胞后分别以秋水仙碱和丹参酚酸B作为干预的阳性对照药物组;各组均干预48 h.结果与结论:①扫描电镜及透射电镜观察显示,瘦素激活程度越高,肝窦内皮细胞的窗孔数量越少,孔径越小.姜黄素能够干预被瘦素缩小、消失了的窗孔,使其发生明显增多和增大,并使细胞外基底膜变薄及范围减小,降低肝窦内皮毛细血管化的程度,并且姜黄素干预肝窦内皮毛细血管化能力有剂量依赖性;②实时定量PCR和ELISA法检测显示,瘦素激活后,肝窦内皮细胞的内皮素1和血管内皮生长因子的 mRNA 水平及蛋白表达水平较正常对照组相比均出现明显增高(P < 0.05).而上述情况在姜黄素高、中、低剂量组的肝窦内皮细胞中均出现了明显降低(P <0.05);而且随着姜黄素给药浓度上升,各蛋白的表达水平均出现了梯度下降(P <0.05).而且高剂量的姜黄素对内皮素1和血管内皮生长因子的转录和表达的干预强度大于秋水仙碱和丹参酚酸B组(P <0.05);③结果证实,姜黄素能明显降低肝窦内皮毛细血管化程度,从而干预肝纤维化进程,其机制可能与姜黄素下调内皮素1和血管内皮生长因子的表达有关.

目的:从炎症指标的变化探讨痛风宁对急性痛风性关节炎(AGA)模型大鼠抗炎作用的时效性.方法:将SD大鼠分成正常大鼠与造模大鼠,造模大鼠采用踝关节腔注射尿酸钠(MSU)混悬液建立AGA大鼠模型,正常大鼠同部位注射生理盐水.于造模后4h模型鉴定成功后随机分成秋水仙碱组、痛风宁组、模型组和正常组,每组18只.秋水仙碱组及痛风宁组分别予相应药物灌胃,模型组与正常组同步予生理盐水灌胃,2次/d,共3d.在造模后24 h,48 h及72 h三个时间点,每组各随机选6只取材.观察并检测各组各时间点关节液白细胞数、滑膜组织病理改变、关节液中炎症相关细胞因子IL-1β,TNF-α,PGE2及TGF-β1的含量.结果:痛风宁能降低关节液白细胞数、改善病变关节滑膜组织的病理形态及降低IL-1β,TNF-α及PGE2含量,同时可升高TGF-β1含量,各时间点与模型组相比差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),且在48 h对各项指标的改善作用最明显,优于24 h和72 h两个时间点,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论:痛风宁对AGA有明显的抗炎作用,其作用机理可能是通过升高TGF β1含量,抑制促炎性细胞因子IL-1β,TNF-α和PGE2的释放,减少关节液中白细胞数及改善关节滑膜组织病理变化,从而达到对AGA的抗炎作用,且在用药后48 h效果最佳.

目的:从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NALP3) 炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制.方法:将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只.造模大鼠采用踝关节局部注射0.2 mL尿酸钠 (monosodium urate, MSU) 混悬液建立急性痛风性关节炎 (acute gouty arthritis, AGA) 模型, 正常大鼠予相同部位注射生理盐水.造模成功后, 随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组, 分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃, 每天2次, 共3 d.正常大鼠为正常组, 同时予等量生理盐水灌胃.造模成功后72 h, 行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织.采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β (IL-1β), 肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 含量;蛋白免疫印迹法 (Western blot) 及实时荧光定量PCR (Real-time PCR) 检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达.结果:与正常组比较, 模型组大鼠踝关节液IL-1β, TNF-α含量显著升高, 滑膜组织NALP3, 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 (Caspase-1), 凋亡相关斑点样蛋白 (ASC) 蛋白及mRNA表达均显著增加 (P＜0.01);与模型组比较, 痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β, TNF-α含量显著下降, 且滑膜组织中NALP3, Caspase-1, ASC蛋白及mRNA表达均显著降低 (P＜0.01);与秋水仙碱组比较, 痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β, TNF-α含量仍较高 (P＜0.05), 但滑膜组织中NALP3, Caspase-1, ASC蛋白及mRNA表达均较低 (P＜0.05, P＜0.01) .结论:痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达, 从而减少IL-1β, TNF-α的生成, 减轻关节炎症反应.

目的:探讨环磷酰胺(Cyc)、秋水仙碱(Col)和维生素C(VitC)对成年大鼠脑缺血/再灌注后海马、室管膜下区和缺血周边区神经干细胞的增殖,以及对海马脑源性神经生长因子(BDNF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:将雄性SD大鼠140只随机分成5组:单纯缺血再灌注组(I/R组),I/R加Cyc和Col干预组(CC组),I/R加Col干预组(Col组),I/R联合VitC干预组(VitC组)和假手术组(SC组).线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型.药物干预的时间为10 d.用免疫组化和原位杂交的方法观察不同时间点海马、室管膜下区、缺血周边区不同部位阳性细胞计数情况.结果:与SC组比较,I/R组大鼠海马及室管膜下区的Brdu阳性细胞和Nestin阳性细胞记数明显增加,海马和缺血周边区的BDNF和VEGF阳性细胞记数显著升高;而CC组明显减少(P<0.05);VitC组和Col组变化无统计学意义(P>0.05).结论:Cyc和Col联合干预,明显抑制缺血再灌注后神经干细胞的增殖及BDNF和VEGF的表达,而VitC和Col单独作用对神经细胞增殖及BDNF和VEGF表达影响较小.

目的 综述微管蛋白秋水仙碱结合位点抑制剂Combretastatin A-4(CA-4)类似物的研究进展.方法 依据近期国内外公开发表的49篇文献,将CA-4类似物的研究进展分类、归纳并总结.结果 微管蛋白秋水仙碱结合位点抑制剂(colchicine binding site inhibitors,CBSI)具有增殖抑制和血管破坏双重活性,近年来备受抗肿瘤药物研究人员的关注.CA-4类似物的抗肿瘤活性突出且结构简单,是CBSI中的重要组成部分.本文对CA-4类似物的结构特点及其构效关系进行了归纳总结.结论 利用CA-4类似物的构效关系归纳总结进行开发新药已成为研究热点.

对1例TNFRSF13B基因突变致周期性发热患儿的临床资料进行回顾性总结,患儿,男,以反复发热为主要表现,偶伴呼吸道症状及消化道症状,临床应用激素及秋水仙碱均有一定疗效,基因检测发现与免疫缺陷相关的肿瘤坏死因子受体超家族成员13B(TNFRSF13B)基因新型变异.通过对该基因位点保守序列、蛋白结构预测、蛋白相互作用关系以及家系共分离试验,提示该基因位点可能是该患儿的致病基因.但尚需进行细胞功能学验证以明确TNFRSF13B基因突变是否导致了周期性发热.

目的 探讨儿童家族性地中海热(FMF)的临床特征及诊治.方法 回顾分析2例FMF患儿的临床资料及致病基因MEFV变异情况,并复习相关文献.结果 例1,女性,6岁3月龄;例2,男性,3岁.均表现为反复发热,非特异性炎性指标升高.例1患儿经基因测序证实存在MEFV复合杂合变异,给予秋水仙碱治疗后临床症状明显缓解;例2患儿经基因测序证实存在MEFV核酸位点变异,但相应蛋白水平未见变异,给予秋水仙碱治疗后发热症状明显好转.结论 对于经常规治疗仍反复发热、非特异性炎性指标升高者,需警惕儿童FMF.

目的 探讨藏药短穗兔耳草不同极性部位对急性痛风性关节炎大鼠模型的作用,及对模型大鼠Toll样受体2(TLR2)/髓样分化因子88 (MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)和NOD样受体蛋白3(NALP3)信号通路的影响.方法 110只SD雄性大鼠,随机均分成正常组,模型组,秋水仙碱(0.3 mg· kg-1)组及短穗兔耳草30％乙醇低、高剂量组(0.8、3.2 g·kg-1),短穗兔耳草50％乙醇低、高剂量组(0.8、3.2 g·kg-1),短穗兔耳草95％乙醇低、高剂量组(0.8、3.2 g·kg-1),短穗兔耳草水部位低、高剂量组(0.8、3.2 g·kg-1).适应性喂养7d后各给药组每天按10 mL·kg-1灌胃剂量进行给药处理,连续灌胃给药7d,正常组和模型组同等剂量灌胃蒸馏水.于第5d给药1h后向各组(正常组除外)大鼠右后踝关节处注射0.1 mL尿酸钠混悬液(50 mg·mL-1)建立大鼠急性痛风性关节炎模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水.用足趾容积测量仪检测大鼠右后踝关节的肿胀度;造模48 h后取血清和滑膜组织,采用Elisa法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测关节滑膜组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和NALP3等相关蛋白含量的表达;HE染色法检测大鼠滑膜组织的病理学变化.结果 与正常组比较,模型组各时间点均出现明显的踝关节肿胀,且具有明显差异(P＜0.01);模型组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量及滑膜组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和NALP3等蛋白含量水平均明显升高(P＜ 0.05,P＜0.01).与模型组比较,在造模后48 h内,秋水仙碱组、30％乙醇部位低剂量组和50％乙醇部位的低、高剂量组大鼠踝关节肿胀率均明显下降(P＜0.05,P＜0.01).秋水仙碱组及30％乙醇部位低、高剂量组均能使血清TNF-α和IL-1β含量及滑膜组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和NALP3蛋白表达量下调(P＜ 0.05,P＜0.01).同时,滑膜病理切片显示30％乙醇部位更能改善大鼠滑膜组织病理变化.结论 藏药短穗兔耳草对尿酸钠诱导的急性痛风性关节炎大鼠具有一定的保护作用,其中30％乙醇部位为有效部位,其作用机制与TLR/MyD88/NF-κB和NALP3信号通路有关.