目的:探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法:选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象，其中男3例、女3例，年龄26~49岁、中位年龄33岁，受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本，先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP)；再加入0.08 mmol/L CaCl 2, 37 ℃孵育激活血小板；然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原，获得sPL。培养RA-FLS，分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组，分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度；细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性；流式细胞术测定各组细胞的凋亡率；体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力；Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力；Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。 结果:(1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL，TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL，IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL，组间比较差异均有统计学意义( F＝12.186、11.934、10.709， P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%，细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%，小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个，迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个，侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个，组间比较差异均有统计学意义( F＝8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组，细胞凋亡率均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组，细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组，Bax蛋白相对表达量均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组，而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用，对RA-FLS凋亡具有促进作用，且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。

目的:探讨环磷酰胺（CTX）联合高压氧（HBO）处理对人类风湿关节炎成纤维样滑膜（RA-FLS）细胞凋亡的影响。方法:将培养好的人RA-FLS细胞按照随机数字表法分为4组：对照组、CTX组、HBO组及联合组（CTX+HBO处理），分别予以不作处理、50 μmol/L的CTX处理、0.2 MPa HBO处理、50 μmol/L的CTX联合0.2 MPa HBO处理。CCK-8法检测人RA-FLS细胞的增殖能力；流式细胞术检测人RA-FLS细胞周期和凋亡情况，Western blotting实验检测人RA-FLS细胞凋亡及细胞周期阻滞相关蛋白的表达。结果:CTX组人RA-FLS细胞存活率明显低于HBO组和对照组（ P<0.05），而联合组人RA-FLS细胞存活被进一步抑制，其存活率明显低于CTX组（ P<0.05）。CTX组人RA-FLS细胞凋亡率明显高于HBO组和对照组（ P<0.05），而联合组人RA-FLS细胞凋亡率明显高于CTX组（ P<0.05）。CTX组G2/M期的人RA-FLS细胞数量明显多于HBO组和对照组（ P<0.05），而联合组G2/M期的人RA-FLS细胞数量明显多于CTX组（ P<0.05）。与对照组和HBO组比较，CTX组人RA-FLS细胞内TLR4蛋白、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（ P<0.05）；与CTX组比较，联合组人RA-FLS细胞内TLR4蛋白、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（ P<0.05）。 结论:CTX+HBO处理对人RA-FLS细胞增殖具有明显的抑制作用，其机制是通过调控TLR4/NF-κB信号通路并将人RA-FLS细胞周期阻滞在G2/M期实现的。

目的:探讨IL-1β对RA患者滑膜成纤维细胞（FLS）中乳腺癌耐药蛋白（BCRP/ABCG2）mRNA表达的影响，探索IL-1β对BCRP介导多药耐药性的调控作用。方法:获取RA 3例和OA 3例患者FLS，建立FLS体外培养体系，培养至Ⅴ代；①采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测RA与OA的FLS中BCRP mRNA的表达水平并比较；②评估RA病情活动度与BCRP mRNA的表达水平的相关性；③ RA-FLS分为4组，A组空白对照组，B组、C组、D组分别加入20、50、100 ng/ml的IL-1β，培养24、48、72 h，比较不同组间BCRP mRNA表达水平。定量资料采用 M（ P25， P75）表示，两独立样本比较采用Mann-Whitney U检验，组间比较采用Friedman检验。 结果:① RA-FLS中BCRP mRNA表达水平高于OA组[0.68（0.26，1.16）与0.06（0.05，0.53）； Z=-2.136， P=0.029]。② RA-FLS的BCRP mRNA的表达量与病程、ESR、CRP及DAS28呈正相关趋势，而与发病年龄呈负相关趋势，与性别无相关性。③相同浓度IL-1β刺激不同时间RA-FLS的BCRP mRNA的表达水平比较：IL-1β浓度为0时，48 h和72 h较24 h BCRP mRNA的表达水平均升高（ χ2=6.00， P=0.034）；IL-1β浓度为20 ng/ml（ χ2=8.00， P=0.014）或100 ng/ml （ χ2=6.50， P=0.040）时，72 h组BCRP mRNA的表达水平较24 h组明显升高。④不同浓度IL-1β刺激相同时间RA-FLS的BCRP mRNA的表达水平比较：72 h时，100 ng/ml组较0 ng/ml组BCRP mRNA表达升高（ χ2=12.00， P=0.006）。 结论:RA-FLS存在BCRP介导的耐药性，且可能与病情活动度有关。炎性细胞因子IL-1β参与调控RA-FLS的BCRP mRNA的表达，且存在时间和浓度依赖性。

目的:探讨RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）中双特异性磷酸酶8（DUSP8）DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）1之间的相互作用，及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法:培养RA-FLS和正常FLS，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术，构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位，免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:DUSP8在RA-FLS mRNA[（2.4±0.6）和（11.2±0.8）， t=21.63， P<0.001]和蛋白表达[（0.24±0.04）和（0.74±0.08）， t=9.45， P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比，在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6），（92.5±1.8），（56.4±4.4）， F=138.60， P<0.001]，增加细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（12.6±1.3）%和（27.5±3.0）%， F=16.98， P<0.001]，上调细胞的DUSP8'[（0.49±0.05），（0.45±0.04）和（0.73±0.07）]、Bax[（0.39±0.06），（0.36±0.05）和（0.89±0.10）]蛋白表达水平，下调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.16）和（0.70±0.08）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.65±0.07）和（0.39±0.03）]蛋白表达水平（均 P<0.001）；与空白对照组和沉默对照组相比，在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6）和（91.1±2.9）和（128.3±4.6）， F=137.50， P<0.001]，降低细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（13.2±1.2）%和（5.4±0.7）%， F=16.98， P<0.001]，下调细胞中的DUSP8[（0.492±0.048）和（0.432±0.051）和（0.102±0.024）]、Bax[（0.391±0.062）和（0.411±0.058）和（0.090±0.011）]蛋白表达水平，上调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.15）和（1.93±0.22）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.68±0.06）和（0.93±0.11）]蛋白表达水平（均 P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。 结论:DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化，抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖，并促进凋亡。

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖及炎性因子mRNA表达的影响。方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS，4~6代细胞用于后续实验。不同浓度的人Ox-LDL刺激RA-FLS 24 h，MTS实验检测细胞增殖情况，实时（RT）-PCR法检测炎性因子IL-6、TGF-β、IL-8、TNF-α及清道夫受体CD36、结合磷脂酰丝氨酸和氧化脂蛋白的清道夫受体（SR-PSOX）mRNA表达水平。siRNA特异性敲减SR-PSOX，RT-PCR法检测敲减效果，同时验证SR-PSOX基因敲减后各相关基因的表达。统计学分析采用 t检验， F检验。 结果:不同浓度Ox-LDL（10、25、50 μg/ml）可明显促进RA-FLS的增殖，其吸光度（ A）值（490 nm）分别为：（1.04±0.15）、（1.05±0.14）、（1.00±0.10），均高于对照组（0.81±0.04），差异有统计学意义（ F=4.737， P<0.01）。在炎性因子mRNA表达方面，与对照组相比较，50 μg/ml和100 μg/ml Ox-LDL可显著促进IL-6 mRNA的表达（ F=14.709， P<0.01）；不同浓度Ox-LDL均可抑制RA-FLS中TGF-β mRNA的表达（ F=299.074， P<0.01），而对IL-8、TNF-α mRNA的表达无明显影响。进一步的机制探讨发现Ox-LDL可促进RA-FLS高表达SR-PSOX（ F=68.636， P<0.01），并抑制CD36的表达（ F=18.085， P<0.01）。siRNA特异性敲减SR-PSOX，可显著抑制Ox-LDL刺激RA-FLS表达IL-6 mRNA（ t=3.875， P<0.01），而对TGF-β mRNA表达水平无显著影响（ t=-0.193， P>0.05）。 结论:Ox-LDL可显著促进RA-FLS的增殖，同时Ox-LDL可能通过上调SR-PSOX的表达促进了IL-6 mRNA的表达，提示Ox-LDL可能参与了RA的滑膜增生及炎症持续过程。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种由免疫介导的慢性炎症性疾病，以滑膜增生和关节破坏为特征，并受遗传和环境因素影响。然而，现有证据表明，遗传多样性和环境暴露并不能解释RA的所有临床特征和异质性，而且越来越多的研究显示表观遗传调控，尤其是DNA甲基化，可在人RA成纤维样滑膜细胞(RA fibroblast-like synoviocytes，RAFLS)中促进疾病的发展，并可能参与RA的发病。文章对RA的发病机制以及RAFLS中DNA甲基化调控进行介绍，并且简要介绍了有关疾病进展及治疗的潜在生物标志物。

目的:探讨间充质干细胞来源外泌体(MSC-EVs)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A的生物学作用及其机制。方法:将MH7A细胞系分为对照组和外泌体组。对MSC的培养上清液采用差速离心法收集MSC-EVs，对照组采用常规方法进行培养，外泌体组则将MH7A细胞与MSC-EVs共同孵育24 h，2组细胞达到收样条件后通过免疫荧光实验、Transwell实验、酶联免疫吸附实验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)等实验观察MSC-EVs对MH7A细胞株生物学行为的影响及其分子机制，各观察指标采用独立样本 t检验进行统计学分析。 结果:粒径分析检测及透射电镜结果表明，通过差速离心法成功提取了MSC-EVs，随后免疫荧光证实MSC-EVs能被MH7A细胞株所摄取。细胞增殖结果表明，MSC-EVs组细胞核增殖抗原(Ki-67)荧光灰度值(4.01±1.01)明显低于对照组(11.67±1.53)，差异有统计学意义( t＝－7.273， P<0.01)。Transwell结果显示，MSC-EVs组侵袭能力(70.00±5.29)显著低于对照组(110.67±6.11)，差异有统计学意义( t＝－8.714， P<0.01)。ELISA结果表明，MSC-EVs组的炎性因子低于对照组，差异有统计学意义[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)： t＝－5.345， P<0.01；白细胞介素(IL)-1β： t＝－3.742， P<0.05；IL-6： t＝－7.579， P<0.01；IL-8： t＝－6.390， P<0.01]。qRT-PCR结果表明，MSC-EVs组MH7A细胞内微小RNA(miR)-125b-5p的表达水平(14.83±2.48)高于对照组(1.01±0.15)，差异有统计学意义( t＝－8.714， P<0.01)。 结论:MSC-EVs能通过上调miR-125b-5p的表达进而抑制MH7A细胞的增殖、侵袭和炎症。

RA是一种以免疫功能障碍和慢性炎症为特征的关节疾病。成纤维样滑膜细胞（FLS）是位于关节囊的内层并介导RA关节破坏的主要细胞，其在RA疾病过程中扮演重要角色。而表观遗传因素能够影响FLS的基因表达，从而对RA的发生发展起到重要的调控作用。表观遗传调控机制主要包括DNA修饰、组蛋白翻译后修饰和非编码RNA调控。随着基因测序门槛降低，大量表观基因组研究揭示了RA相关的表观遗传模式及相关因子的作用机制，这些机制有助于理解疾病并探索新的治疗靶点。本文概述总结了RA中FLS相关的表观遗传学的研究进展。

目的:探讨丹酚酸C（SalC）对RA成纤维样滑膜细胞（FLSs）的作用，及转录因子-E2相关因子（Nrf2）信号通路在其中所扮演的角色。方法:用丹酚酸C 0.1、1、5、10、20 μmol/L分别处理RA-FLSs 24~72 h，之后用CCK8检测细胞活性。根据半抑制浓度（IC 50）值，选取实验所需的时间和剂量处理RA-FLSs。用伤口划痕实验和Transwell小室技术检测细胞迁移及侵袭能力。ELISA检测TNF-α，IL-1β及IL-6水平，蛋白质印迹实验检测MMP-9和MMP-13的表达及细胞凋亡相关蛋白及Nrf2及介导的相关基因的表达。用ML385干扰Nrf2，实验分成3组RA-FLSs、RA-FLSs+丹酚酸C（10 μmol/L）、RA-FLSs+丹酚酸C（10 μmol/L）+ ML385（2 μmol/L），测量迁移及侵袭能力，并检测凋亡、炎性及Nrf2信号通路相关蛋白的表达。统计学分析采用方差分析，两两比较采用Turkey检验。 结果:与对照组相比，丹酚酸C处理后RA-FLS的细胞迁移水平（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.75±0.05；丹酚酸C 5 μmol/L，0.50±0.05；丹酚酸C 10 μmol/L，0.26±0.05）显著性减少（ t=7.65， P<0.001； t=14.25， P<0.001； t=20.67， P<0.001）和侵袭能力（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.75±0.11；丹酚酸C 5 μmol/L，0.49±0.06；丹酚酸C 10 μmol/L，0.26±0.07）显著性降低（ t=4.93， P<0.001； t=10.32， P<0.001； t=14.96， P<0.001），MMP-9（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.72±0.10；丹酚酸C 5 μmol/L，0.48±0.08；丹酚酸C 10 μmol/L，0.27±0.06）水平显著性降低（ t=5.60， P<0.001； t=11.03， P<0.001； t=5.94， P<0.001）及MMP-13（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.77±0.06；丹酚酸C 5 mol/L，0.58±0.06；丹酚酸C 10 μmol/L，0.32±0.13）水平显著性减少（ t=8.66， P<0.001； t=11.03， P<0.001； t=14.22， P<0.001），促进细胞凋亡。丹酚酸C显著性降低促炎性细胞因子的水平（ P<0.001），激活Nrf2信号通路蛋白Nrf2，过氧化氢酶（CAT），醌NADH脱氢酶1（NQO1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）及谷胱甘肽合成酶（GSS）的表达（ P<0.001）。用ML385干扰Nrf2后，显著性逆转丹酚酸C对Nrf2通路蛋白Nrf2（0.68±0.06； t=5.08， P<0.001），CAT（1.44±0.12； t=4.77， P<0.001），NQO1（0.65±0.12； t=5.04， P<0.001），SOD1（1.43±0.10； t=6.36， P<0.001）及GSS（1.42±0.10； t=7.60， P<0.001）的水平，及TNF-α[（260±22）pg/ml； t=13.75， P<0.001]，IL-1β[（701±30）pg/ml； t=12.98， P<0.001]，IL-6[（180.3±10.2）pg/ml； t=16.38， P<0.001]炎症因子的水平。除此之外ML385阻碍丹酚酸C对细胞迁移和侵袭的抑制作用（0.70±0.09； t=11.24， P<0.001；0.64±0.04； t=8.03， P<0.001）及对凋亡的诱导作用（24.4±1.8； t=23.02， P<0.001）。 结论:丹酚酸C可能通过上调Nrf2信号通路，抑制细胞活力及炎症反应，促进凋亡。丹酚酸C是治疗RA的有效潜在药物，但有待进一步动物及临床深入研究。

本文回顾了近年来国内外学者对丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RAF）/丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在RA中的调控机制研究，发现该通路在类风湿关节炎-成纤维细胞样滑膜细胞（RA-FLS）中介导免疫调控、炎症反应、氧化应激、细胞凋亡等，并与RA-FLS自噬关系密切。此外，RAF/MEK/ERK信号通路与RA骨破坏也具有相关性，但目前的研究鲜有报道。因此，RAF/MEK/ERK信号通路与RA骨破坏的相关性研究可能会成为未来的研究热点。同时，提出以RAF/MEK/ERK信号通路为靶点开展RA药物靶向研究，可能会推动RA治疗药物的发展，为治疗RA开辟新途径。