-
复制型慢病毒VSV-G qPCR检测方法的验证及初步应用
编辑人员丨5天前
目的:建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus, RCL) VSV-G qPCR检测方法,并进行方法学性能验证及初步应用。方法:以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列,建立荧光定量PCR检测方法,并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、准确度、线性范围、检测限、定量限及耐用性进行验证。利用所建立的方法进行CAR-T细胞、慢病毒载体生产终末细胞及慢病毒载体收获液样品的初步应用性研究。结果:建立的VSV-G荧光定量PCR法,专属性较好,对293T细胞、PBMC细胞及C8166细胞均无特异性扩增,线性范围为1×10 2拷贝/test~1×10 9拷贝/test, R2能够达到0.998以上,扩增效率在93%~98%之间,精密度RSD<12%,准确度回收率为85%~106%,最低检出限和最低定量限分别为5拷贝/test和40拷贝/test。另外,该方法的耐用性较好。各项验证结果均表明该方法能够满足检测的要求。利用该方法对54批样品(包括CAR-T细胞、慢病毒载体及载体生产终末细胞)进行RCL C8166细胞培养法的终点检测,结果显示54批样品均为阴性。 结论:成功建立了VSV-G实时荧光定量PCR法,各项验证参数均可满足检测要求,该方法的应用将进一步提高慢病毒载体相关产品的安全性。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
献血者和慢性乙肝患者隐匿性乙肝病毒感染特征比较
编辑人员丨5天前
目的:研究献血者和慢性乙肝患者(chronic hepatitis B,CHB)隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B infection,OBI)血清学和分子生物学特征与差异。方法:收集19份献血者OBI样本与19份CHB患者OBI样本,分别设为A组和B组,采用化学发光方法进行乙肝五项检测,荧光定量PCR方法进行乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA定量,巢式PCR扩增HBV S基因并测序。结果:A组HBV DNA载量显著低于B组( P<0.05),两组血清学结果无明显差异,B组S基因的"a"决定簇突变率明显高于A组( P<0.05)。 结论:与CHB患者相比,OBI献血者病毒复制水平更低、S基因突变几率更小,血液筛查过程中使用高灵敏度的核酸检测试剂和方法才能最大限度保障输血安全。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
治疗性抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体的研究进展
编辑人员丨5天前
慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)常使用干扰素、核苷(酸)或核苷(酸)类似物等药物进行治疗,虽然可以有效抑制病毒复制,但存在无法彻底清除病毒、长期使用副作用大以及产生耐药性等问题。针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、尤其是针对乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体具有良好的病毒中和能力,在相关动物模型上能有效抑制HBV的复制,展现出了治疗或辅助治疗CHB的潜力。本文就处于临床研发阶段或临床前研发阶段的治疗性抗HBV单克隆抗体药物研发进行综述,旨在为CHB的治疗提供新的参考。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
免疫细胞、细胞因子与慢性HBV感染后发病
编辑人员丨5天前
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染后慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B, CHB)的发生,一方面与病毒的复制和多种病毒蛋白的表达有关,同时另一方面更在于宿主体内固有免疫和特异性免疫的作用。慢性HBV感染的自然过程与免疫系统密切相关,各种免疫细胞及细胞因子与HBV的相互作用,对HBV感染后的转归及CHB的发病都起着决定性的作用。免疫活跃的时期,也是抗病毒治疗的时机。本文就HBV及其相关蛋白产物与免疫系统(包括固有免疫细胞、特异性免疫细胞)、细胞因子的之间的相互作用进行综述,以期为临床识别治疗时机提供依据。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
乙型肝炎临床治愈策略:直接抗病毒药物
编辑人员丨5天前
直接抗病毒药物(DAAs),是治疗慢性乙型肝炎的重要手段。DAAs能直接干扰病毒的感染复制过程,减少子代病毒产率,继而影响体内乙型肝炎病毒(HBV)的两种动态平衡,即肝细胞中病毒复制-循环中病毒衰减之间的平衡,共价闭合环状DNA(cccDNA)池补充-cccDNA衰减之间的平衡。现有核苷(酸)类似物足以影响第一种平衡,却难以撼动第二种平衡。因此,靶向HBV感染复制的不同环节,开发新型DAAs十分必要。现从cccDNA池补充-cccDNA衰减这一平衡的两个方面,探讨近期DAAs研发的主要进展。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
乙型肝炎病毒重点号导读
编辑人员丨5天前
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全球范围内最常见的一种感染性疾病,呈世界性流行。HBV感染可导致慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌等疾病,有效控制HBV感染是预防HBV相关肝癌的关键。目前,抗病毒药物只能抑制HBV复制,但不能完全清除HBV。为进一步了解特异性免疫在清除HBV中的作用,探讨新型HBV防控策略,在2023年7月28日世界卫生组织确定的第13个"世界肝炎日"到来之际,本期推出乙型肝炎病毒重点号,特邀请北京地坛医院成军教授和重庆医科大学唐霓教授担任执行编委。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
慢性乙型肝炎新型诊断标志物的研发概况
编辑人员丨5天前
乙型肝炎已成为严重威胁人类健康的世界性疾病,也是我国当前流行广泛、危害性严重的传染病之一。据《中国卫生健康统计年鉴(2022)》数据显示,2021年,我国乙型肝炎发病率为69.25人/10万人。为了使感染科临床工作者获得乙型肝炎研究的前沿信息,本文对乙型肝炎的靶点和新型诊断标志物与病毒复制的相关性、临床意义及检测技术改进等作了重点介绍,建议有条件单位逐步扩大检测,这将对临床诊断率及抗病毒药物评估有帮助,并有助于实现世界卫生组织提出“到2030年乙型肝炎诊断率要提升至90%”的目标。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
IFNλ在乙型肝炎治疗中的意义及相关研究进展
编辑人员丨5天前
乙型肝炎是我国主要的公共卫生问题。核苷(酸)类似物和干扰素(IFN)两大类药物能够有效抑制HBV的复制,但由于不能彻底清除cccDNA,治疗效果仍不甚满意。IFNλ是新发现的一类细胞因子家族,通过激活Jak-STAT通路从而诱导抗病毒、抗增殖、抗肿瘤作用。近年来研究发现,IFNλ作为一种治疗手段及免疫学指标在乙型肝炎中具有重要意义,IFNλ可有效抑制HBV的复制,其基因多态性与乙型肝炎的预后及易感性密切相关,且IFNλ在乙型肝炎相关的肝细胞癌中也表现出一定的抗肿瘤活性,有望用于临床上乙型肝炎患者的辅助治疗。本文就目前IFNλ在乙型肝炎中的意义及相关研究进展进行阐述。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎病毒携带者PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞和sPD-1水平观察
编辑人员丨5天前
目的:动态观测恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎病毒携带者的临床疗效及其外周血PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞、可溶性程序性死亡受体1(sPD-1)水平变化并探讨其临床意义。 方法:慢性乙型肝炎病毒携带者治疗(A)组31例,慢性乙型肝炎患者治疗(B)组32例,慢性乙型肝炎病毒携带者未治疗(C)组15例,收集并比较3组患者0周、24周、48周外周血标本和临床资料,流式细胞技术检测PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞,酶联免疫吸附法检测sPD-1水平。3组间计量资料行方差分析检验与Spearman相关性分析。 结果:0周时,A组、C组血清HBsAg、HBeAg和HBV DNA水平均显著高于B组;外周血PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞,B组(4.70%±1.58%)显著高于A组(3.25%±1.01%)和C组(2.77%±0.67%)( F=16.65, P<0.05),A组与C组间差异不明显( P>0.05);外周血sPD-1,B组[(1 866.62±1 472.70)pg/ml]显著高于A组[(824.86±538.66)pg/ml]和C组[(618.19±602.62)pg/ml]( F=10.95, P<0.05),A组与C组间差异不明显( P>0.05)。48周时血清HBsAg,A组、C组较基线无显著下降( P>0.05),均显著高于B组( P<0.05);血清HBeAg,A组、B组较基线均显著下降( P<0.05),但A组显著高于B组( P<0.05),A组与C组间差异不明显( P>0.05);血清HBV DNA水平,A组、B组较基线均显著下降( P<0.05),均显著低于C组( P<0.05),A组与B组差异不明显( P>0.05);外周血PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞,A组(1.56%±0.73%)、B组(1.32%±0.43%)较基线均显著下降( P<0.05),均显著低于C组(2.64%±0.85%)( P<0.05),A组与B组无明显差异;外周血sPD-1,A组[(289.05±215.86)pg/ml]、B组[(236.01±173.92)pg/ml]较基线均显著下降( P<0.05),均显著低于C组[(650.34±598.46)pg/ml]( P<0.05),A组与B组无明显差异( P>0.05)。相关性分析结果:48周时A组,PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞比例下降水平与HBsAg、HBV DNA下降水平无相关性,与HBeAg下降水平呈正相关( r=0.376, P<0.05);sPD-1下降水平与HBsAg变化无相关性,与HBeAg、HBV DNA下降水平均呈正相关( r值分别为0.598、0.384, P值均<0.05)。48周时B组,PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞、sPD-1下降水平与HBsAg、HBeAg、HBV DNA下降水平均呈正相关( P值均<0.05)。 结论:HBeAg阳性慢性乙型肝炎病毒携带者抗病毒治疗48周乙型肝炎病毒复制与表达均受到显著抑制,这不仅与恩替卡韦治疗有关,而且与sPD-1参与的免疫学机制有关;且HBeAg的表达抑制与PD-1 +CXCR5 +CD4 +T淋巴细胞数量减少和/或活性降低有关。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
外泌体参与调控乙型肝炎发病机制的研究进展
编辑人员丨5天前
外泌体途径是介导细胞之间物质与信息传递的重要方式,影响乙型肝炎病毒(HBV)感染后疾病发生、发展与预后转归。HBV可能利用外泌体生物发生途径增加病毒本身向周围肝细胞播散并帮助病毒逃避宿主免疫清除,同时外泌体也可通过负载病毒信息介导HBV感染后肝脏免疫炎症损伤、抗病毒免疫应答,影响疾病转归。现就外泌体在HBV感染后病毒复制播散、免疫炎症损伤及抗病毒应答调控等方面的作用与机制进行综述。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
