目的:探讨紫花牡荆素(CAS)对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:体外培养T24细胞，分为对照组、5、10、20 μmol/L CAS组、si-NC组、si-TM7SF4组、CAS+pcDNA组和CAS+pcDNA-TM7SF4组，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞的增殖抑制情况，Transwell法检测细胞迁移和侵袭的能力，Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和7次跨膜超蛋白家族成员4(TM7SF4)蛋白的表达水平，实时荧光定量PCR检测TM7SF4 mRNA的表达水平。结果:5、10、20 μmol/L CAS组T24细胞增殖抑制率分别为(17.68±1.41)%、(33.54±3.16)%和(61.44±5.50)%，均高于对照组[(0.00±0.00)%，均 P<0.001]。5、10、20 μmol/L CAS组细胞迁移数分别为(72.83±5.66)个、(59.13±4.27)个和(41.25±3.22)个，细胞侵袭数分别为(55.83±5.15)个、(42.19±3.06)个和(31.13±3.22)个，均低于对照组[分别为(86.11±5.16)个和(68.82±5.29)个，均 P<0.001]。5、10、20 μmol/L CAS组T24细胞中cyclin D1、MMP-2、MMP-9、TM7SF4蛋白表达水平、TM7SF4 mRNA表达水平均低于对照组(均 P<0.001)，p21蛋白表达水平高于对照组( P<0.001)。si-TM7SF4组T24细胞增殖抑制率[(50.35±4.67)%]高于si-NC组[(6.31±0.58)%， P<0.001]，si-TM7SF4组细胞迁移数[(53.51±4.18)个]和细胞侵袭数[(42.92±3.81)个]均低于si-NC组[分别为(85.26±4.99)个和(67.93±4.64)个，均 P<0.001]。si-TM7SF4组T24细胞中TM7SF4、cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均低于si-NC组(均 P<0.001)，p21蛋白表达水平高于si-NC组( P<0.001)。CAS+pcDNA-TM7SF4组T24细胞增殖抑制率[(21.45±2.46)%]低于CAS+pcDNA组[(64.06±4.49)%， P<0.001]，CAS+pcDNA-TM7SF4组细胞迁移数[(75.66±6.57)个]和侵袭数[(59.35±5.40)个]均高于CAS+pcDNA组[分别为(40.43±3.85)个和(30.25±3.32)个，均 P<0.001]。CAS+pcDNA-TM7SF4组T24细胞中TM7SF4、cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均高于CAS+pcDNA组(均 P<0.001)，p21蛋白表达水平低于CAS+pcDNA组( P<0.001)。 结论:CAS可能通过抑制TM7SF4表达抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭。

目的:研究紫花牡荆素调控磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:肝癌细胞株HepG2、Hep3B经过培养并分为对照组、不同浓度紫花牡荆素(10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L)组、溶剂对照(体积分数0.1%的DMSO)组、溶剂+40 μmol/L紫花牡荆素组、AKT激动剂SC-79(5μmol/L)+40μmol/L紫花牡荆素组.分组处理48h后,检测细胞活力、细胞克隆数、细胞凋亡率及B淋巴细胞瘤基因(Bcl-2)、细胞色素C(CytC)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、裂解型caspase-3(Cleaved caspase-3)、磷酸化 PI3K(p-PI3K)、磷酸化 AKT(p-AKT)的表达水平.结果:10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L紫花牡荆素以浓度依赖的方式降低HepG2、Hep3B的细胞活力;40 μmol/L紫花牡荆素组HepG2、Hep3B的细胞克隆数及Bcl-2、CytC、p-PI3K、p-AKT的表达水平均低于对照组,Bax、Cleaved caspase-3 的表达水平高于对照组(P<0.05);AKT激动剂SC-79削弱40 μmol/L紫花牡荆素对HepG2、Hep3B的调控作用.结论:紫花牡荆素通过抑制PI3K/AKT通路抑制肝癌细胞增殖.

目的:探讨紫花牡荆素(CAS)对脂多糖诱导的人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)损伤和NF-κB-Keap1-Nrf2/ARE通路的影响.方法:利用不同浓度的CAS预处理BEAS-2B细胞1 h、2 h、4 h,用1 μg/ml脂多糖处理BEAS-2B细胞,构建细胞损伤模型,ELISA检测细胞上清炎症因子含量,筛选CAS最适作用浓度和时间;再将细胞分为正常组、模型组、Casticin组、ML385组、Casticin+ML385组、地塞米松组;流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测细胞上清炎症因子的浓度,Western blot检测细胞NF-κB p65、p-NF-κB p65、Keap1、Nrf2以及细胞核中的Nrf2蛋白水平.结果:CAS最适作用条件为10 μmol/L、2 h;与正常组相比,模型组的细胞凋亡率、炎症因子含量、p-NF-κB p65和Keap1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),细胞和细胞核中Nrf2蛋白的表达水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,Casticin组和地塞米松组的细胞凋亡率和炎症因子含量显著降低(P<0.01),Casti-cin组p-NF-κB p65和Keap1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞和细胞核中Nrf2蛋白的表达水平显著升高(P<0.01);与ML385组相比,Casticin+ML385组的细胞凋亡率,炎症因子含量,p-NF-κB p65和Keap1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞和细胞核中Nrf2蛋白的表达水平显著升高(P<0.01).结论:CAS通过调节NF-κB-Keap1-Nrf2/ARE信号通路,抑制脂多糖诱导的细胞炎症.

目的 探讨紫花牡荆素(Casticin,CAS)通过调节环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号通路(Cyclic a-denosine monophosphate/protein kinase A,cAMP/PKA)对氧糖剥夺/复糖复氧(Oxygen glucose deprivation/recovery,OGD/R)诱导的神经元损伤的影响.方法 通过体外培养海马神经元(HT-22),进行OGD/R诱导处理建立神经元损伤模型,使用2～32 μmol/L的紫花牡荆素处理细胞,筛选最佳实验水平;将细胞分为对照组(Control组)、模型组(OGD/R组)、紫花牡荆素低、中、高水平组(CAS-L组、CAS-M组、CAS-H组)、紫花牡荆素+cAMP/PKA信号通路抑制剂组(CAS+H-89组);采用细胞计数试剂-8(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞形态,Hoechst染色及流式细胞术观察并计算细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)以及cAMP水平,Western blot检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Aspartate-specific cysteine proteinase-3,Caspase-3)、PKA、磷酸化 PKA(phosphorylated PKA,p-PKA)表达水平.结果 与 Control 组比较,OGD/R组HT-22细胞细胞核皱缩,细胞崩解,细胞存活率、CAT及SOD,cAMP,p-PKA表达水平显著降低,细胞凋亡率、TNF-α及IL-6,Caspase-3表达水平显著升高(P＜0.05);与OGD/R组比较,CAS-L组、CAS-M组、CAS-H组HT-22细胞损伤减轻,细胞存活率、CAT及SOD、cAMP、p-PKA表达水平显著升高,细胞凋亡率、TNF-α及IL-6,Caspase-3表达水平显著降低,且呈水平依赖性(P＜0.05);与CAS-H组比较,CAS+H-89组HT-22细胞损伤加重,细胞存活率、CAT及SOD,cAMP,p-PKA表达水平显著降低,细胞凋亡率、TNF-α及IL-6,Caspase-3表达水平显著升高(P＜0.05).结论 紫花牡荆素可以通过激活cAMP/PKA信号通路来减轻OGD/R诱导的神经元损伤.

目的:探讨紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞miR-342-3p表达和糖酵解的影响,验证紫花牡荆素是否通过上调miR-342-3p表达抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解.方法:使用不同浓度(0,10,30,100 nmol/L)的紫花牡荆素处理HeLa细胞,采用紫花牡荆素(30 nmol/L)联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染HeLa细胞,随后用实时荧光定量PCR分析HeLa细胞miR-342-3p的表达水平,通过测定相对葡萄糖消耗量和相对乳酸产物,分析紫花牡荆素及紫花牡荆素联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染对宫颈癌HeLa细胞糖酵解的影响.结果:紫花牡荆素以浓度依赖方式上调HeLa细胞miR-342-3p表达水平,同时降低HeLa细胞的葡萄糖消耗量和抑制乳酸产生.此外,miR-342-3p模拟物协同紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生;相反miR-342-3p抑制物减弱紫花牡荆素上调miR-342-3p表达水平的作用和减弱紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生作用.结论:紫花牡荆素通过上调miR-342-3p表达水平抑制HeLa细胞糖酵解.

目的:探讨紫花牡荆素对人胰腺癌细胞凋亡的作用及其可能的作用机制.方法:应用CCK-8法检测0、10、20、30和40 μmol/L紫花牡荆素处理24、48和72 h后,胰腺癌Miapaca-2和Panc1细胞的增殖情况.应用克隆形成实验、FCM法和蛋白质印迹法分别检测0、10、20和30 μmol/L紫花牡荆素对胰腺癌Miapaca-2和Panc1细胞克隆形成、细胞凋亡及剪切型caspase-3、剪切型caspase-9、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-PKB,p-AKT)蛋白表达的影响.结果:10、20、30和40 μmol/L紫花牡荆素可明显抑制胰腺癌Miapaca-2和Panc1细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性(P值均＜0.05).紫花牡荆素对Miapaca-2和Panc1细胞的克隆形成也有明显的抑制作用(P值均＜0.01),且能促进Miapaca-2和Panc1细胞的凋亡(P值均＜0.05).经紫花牡荆素处理后,Miapaca-2和Panc1细胞中剪切型caspase-3、剪切型caspase-9和剪切型PARP蛋白的表达水平均显著上调(P值均＜0.05),而p-PI3K和p-Akt蛋白的表达水平均显著下调(P值均＜0.01).结论:紫花牡荆素可抑制胰腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡,这一作用可能与紫花牡荆素调控线粒体凋亡途径相关蛋白的表达水平有关.

目的 观察紫花牡荆素(Casticin)对肝癌HepG2细胞侵袭迁移的影响及作用机制.方法 配置不同浓度Casticin,体外培养肝癌HepG2细胞系.通过CCK-8实验检测细胞活性,Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,蛋白质免疫印迹法(Westem Blot)检测细胞肿瘤转移相关基因MTA1、nm23-H1、ARHGAP9的蛋白表达水平.结果 Casticin可以显著抑制HepG2细胞的活性,并且呈剂量和时间依赖性;Casticin能够在不影响细胞活力的前提下显著抑制肝癌HepG2细胞的侵袭和迁移能力,并且呈剂量依赖性;Casticin能够显著减少促转移基因MTA1的蛋白表达水平,并且能增加抑转移基因nm23-H1和ARHGAP9的蛋白表达水平.结论 Casticin显著抑制肝癌HepG2细胞的侵袭迁移,其作用机制可能与其能够抑制促转移基因MTA1蛋白的表达和促进抑转移基因nm23-H1、ARHGAP9蛋白的表达有关.

目的:研究紫花牡荆素(casticin,CAS)与表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin gallate,EGCG]联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法:培养肺腺癌A549细胞,取对数生长期细胞活性＞95％的细胞进行实验.SRB法考察CAS(0.5,1,5,10,15,20 μmoL·L-1)联合EGCG(1,5,10,15,20,25 μmoL·L-1)对A549细胞的增殖抑制作用;激光共聚焦显微镜观察CAS+EGCG联合用药在A549细胞中的分布行为;流式细胞仪检测CAS+ EGCG联合用药对A549细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CAS+EGCG用药对A549细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用.结果:不同浓度各药物在24,48 h对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率比较,差异有统计学意义(P＜0.05);各浓度CAS+EGCG用药对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率均高于同浓度CAS或EGCG单独用药(P＜0.05).培养至24 h时,5μmoL·L-1CAS与10 μmoL·L-1 EGCG联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率呈协同作用.培养至48 h时,0.5 μmoL·L-1CAS与1μmoL·L-1 EGCG,1 μmoL·L-1CAS与5μmoL·L-1EGCG,15μmoL·L-1 CAS与20 μmoL·L-1 EGCG,20 μmoL·L-1CAS与25μmoL·L-1EGCG联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率呈相加作用;通过激光共聚焦显微镜观察,CAS(5μmoL·L-1)联合EGCG(10 μmoL·L-1)组进入A549细胞的数量高于同浓度CAS或EGCG单独用药.流式细胞仪检测表明,给药后将细胞培养至24 h时,各浓度CAS+EGCG用药对肺腺癌A549细胞凋亡率高于相同CAS或EGCG浓度下单独用药(P＜0.05).Western blot检测显示,与单用药组相比,CAS+ EGCG联合用药可增强Bax蛋白的表达量以及减少Bcl-2蛋白的表达量(P＜0.01).结论:与单用药相比,CAS+EGCG联合用药能够显著增强对A549细胞抑制及诱导凋亡作用,且诱导凋亡作用机制与Bcl-2和Bax蛋白相关.

目的 研究维药一枝蒿中指标成分紫花牡荆素的单体制备方法,并建立其含量测定方法.方法 利用HPD-450型大孔树脂吸附法提取富集紫花牡荆素,配合Sephadex LH-20柱色谱技术与波谱手段,分离纯化并鉴定其化学结构;含量测定色谱条件:采用色谱柱为Agilent HC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(70:30);柱温30℃,检测波长350 nm,流速1.0 mL·min-1.结果 紫花牡荆素纯度为99.7％,在9.42～ 75.36μg·mL-1(r=0.999 6)内呈良好的线性关系,平均回收率为109.2％(RSD=2.12％).结论 大孔吸附树脂纯化可以获得高纯度紫花牡荆素;建立的含量测定方法简便、准确、稳定,可以用于维药一枝蒿的质量控制.

对马鞭草科牡荆属植物单叶蔓荆Vitex trifolia var.simplicifolia果实中的化学成分进行研究.通过反复硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和制备型高效液相等方法对其提取物进行分离和纯化,并利用核磁共振(NMR)以及质谱等现代波谱学技术对分离得到的化合物的进行结构鉴定.从单叶蔓荆的干燥成熟果实的乙醇提取物的氯仿萃取部位和乙酸乙酯萃取部位中分离得到了18个化合物,分别鉴定为ent-2-oxo-15,16,19-trihydroxy-pimar-8(14)-ene(1)、猫眼草酚D(2)、紫花牡荆素(3)、木犀草素(4)、泽兰黄素(5)、芹素菜(6)、5,4'-dihydroxy-3,6,7-trimethoxyflavone(7)、luteolin-4'-O-glucoside(8)、hypolaetin-7-O-β-D-glucopyranoside (9)、当药黄素(10)、agestricin D(11)、5,3'-dihydroxy-6,7,4'-trimethoxy-flavanone (12)、委陵菜酸(13)、2α,3β,23-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid (14)、3'-acetoxy-4'-angeloyloxy-3',4'-dihydroseselin (15)、dihydrodehydrodiconiferyl alcohol (16)、3,5'-dimethoxy-4',epoxy-8,3'-neolignane-5,9,9'-triol (17)和salicifoliol(18).化合物1,2,5～15,17,18为首次从该植物中分离得到,其中化合物1,5,7～n,15,17,18为首次从该属植物中分离得到.