目的 基于蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路,探讨虎杖苷(PD)对干眼症(DED)大鼠炎症反应的影响及潜在机制.方法 将雄性SD大鼠随机分为空白对照组(Normal组)、模型组(单纯DED组)、0.05％PD组、0.5％PD组和0.5％PD+PKA抑制剂H-89组(0.5％PD+H-89组),每组15只.除Normal组外,其余各组大鼠通过眼球表面注射氢溴酸东莨菪碱12.5 mg/d的方式制备DED模型;与此同时,各药物组给予相应药液(0.5％、0.05％的PD,滴眼,每天3次;1 mg/kg的H-89,腹腔注射,每天1次),共7 d.检测各组大鼠的泪液分泌量、角膜荧光素染色评分和结膜组织杯状细胞密度,观察其角膜组织病理变化,检测其角膜组织中炎症因子(肿瘤坏死因子a、白细胞介素1β、白细胞介素6)水平和PKA/CREB信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与Normal组比较,单纯DED组大鼠角膜组织上皮层增厚,基质层细胞排列紊乱、疏松且部分缺失,核间距较大,有大量炎症细胞浸润;泪液分泌量、结膜组织杯状细胞密度和PKA、CREB蛋白的磷酸化水平均显著降低,角膜荧光素染色评分和角膜组织中炎症因子水平均显著升高(P＜0.05).与单纯DED组比较,0.05％PD、0.5％PD组大鼠的角膜组织病理损伤有所缓解,各定量指标均显著改善,且0.5％PD组的改善效果更优(P＜0.05);而H-89可显著逆转PD对各指标的改善作用(P＜0.05).结论 PD可增加DED大鼠的泪液分泌量和结膜组织杯状细胞密度,减轻其角膜组织炎症反应和病理损伤,上述作用与激活PKA/CREB信号通路有关.

目的:观察不同碘营养水平哺乳期大鼠乳腺组织促甲状腺激素受体（TSHR）、蛋白激酶A（PKA）、钠碘转运体（NIS）mRNA和蛋白的表达，探讨促甲状腺激素（TSH）-THSR-环磷酸腺苷（cAMP）-PKA信号通路在哺乳期乳腺摄碘过程中的作用。方法:采用成组设计，按体质量（80~100 g）采用随机数字表法将110只雌性Wistar大鼠分为适碘（NI）组、重度低碘（SID）组、中度低碘（MID）组、中度高碘（MIE）组、重度高碘（SIE）组，每组22只。另选取22只雄性Wistar大鼠，喂养情况与NI组一致。饲养3个月时，收集雌鼠24 h尿样，并将雌鼠与雄鼠合笼（5 ∶ 1），交配后，每只雌鼠单独喂养，在生育10 d时，处死哺乳期大鼠取甲状腺、乳腺组织。采用砷铈催化分光光度法测定尿碘；HE染色观察甲状腺和乳腺组织形态学改变；实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测甲状腺和乳腺组织TSHR、PKA及NIS mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测乳腺组织TSHR、PKA、磷酸化PKA（p-PKA）及NIS蛋白表达水平。结果:与NI组比较（162.59 μg/L），SID、MID组雌鼠尿碘中位数（3.16、6.36 μg/L）均较低，MIE、SIE组雌鼠尿碘中位数（2 356.27、11 507.29 μg/L）均较高（ P均< 0.01）。HE染色可见，不同摄碘水平对甲状腺滤泡产生不同的影响：NI组多为均匀的圆形或椭圆形滤泡；MID组小滤泡增多，上皮细胞呈单层柱状或立方，滤泡腔变小，胶质减少；SID组滤泡变小，上皮细胞呈柱状或高柱状，滤泡腔内胶质减少或缺如；SIE、MIE组甲状腺滤泡出现多形性变化，既有部分滤泡明显增大，又有部分小滤泡增生。不同摄碘水平对乳腺大导管也产生不同的影响：与NI组相比，SID、MID组乳腺大导管周围的结缔组织呈明显的纤维化，而MIE、SIE组纤维化明显减轻。real-time PCR结果显示，不同碘营养水平哺乳期大鼠甲状腺组织TSHR、PKA、NIS mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 10.73、92.37、115.75， P均< 0.01）；乳腺组织TSHR、PKA、NIS mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 40.25、39.63、14.92， P均< 0.05）。Western blot结果显示，不同碘营养水平哺乳期大鼠乳腺组织TSHR、PKA、p-PKA、NIS蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 4.14、6.73、8.48、4.51， P均< 0.05），其中MIE、SIE组TSHR蛋白表达水平均低于NI组（ P均< 0.05）；SID、MID组PKA蛋白表达水平均高于NI组（ P均< 0.05）；SID组p-PKA蛋白表达水平高于NI组，但SIE组低于NI组（ P均< 0.05）；SID组NIS蛋白表达水平高于NI组（ P < 0.05）。 结论:哺乳期大鼠高碘摄入时乳腺组织TSHR mRNA、蛋白表达水平均降低，低碘摄入时PKA、NIS mRNA和蛋白表达水平均升高。哺乳期大鼠乳腺组织可能通过TSH-TSHR-cAMP-PKA信号通路参与调控碘的摄入，从而对自身及子代产生保护作用。

目的:探讨中药单体贯叶金丝桃素(HPF)与氨来呫诺(AM)联合给药时，对抗肥胖及改善代谢紊乱的叠加治疗作用。方法:采用ob/ob小鼠为肥胖小鼠模型，在HPF单药(2.5 mg/kg，腹腔注射)或与AM(50 mg/kg，灌胃)联合给药4周后，监测小鼠体重、摄食，检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平，并通过小动物核磁共振、代谢笼、糖耐量和胰岛素耐量检测及HE染色等方法，观察小鼠的体重变化、能量消耗、脂肪含量、糖代谢等的变化。Western印迹和酶联免疫吸附测定(ELISA)用以检测环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)信号通路。结果:给药4周后，与对照组相比(平均体重54.07 g)，HPF给药组的小鼠平均体重下降至51.33 g( P＝0.042)；与AM联合给药后，小鼠平均体重进一步降低至47.61 g( P＝0.041)，表现出明显的叠加效应。小鼠核磁共振结果显示，HPF给药后小鼠脂肪含量减少( P＝0.011)，表现为腹股沟白色脂肪和附睾旁白色脂肪的细胞直径都变小( P＝0.014, P＝0.032)，产生棕色化趋势，棕色脂肪组织中白色脂肪浸润减少。然而，与HPF给药组相比，两药联合治疗并没有使白色脂肪细胞进一步变小或减少其在棕色脂肪组织的脂质积累。代谢笼实验显示，HPF处理的小鼠在光照期的氧气消耗率( P<0.001)和二氧化碳释放率( P＝0.002)都显著高于对照组小鼠，HPF与AM的组合可以进一步提高小鼠的能量消耗。此外，HPF与AM联合给药可以进一步激活白色脂肪组织中的儿茶酚胺下游cAMP-PKA信号通路。当联合用药时，肥胖小鼠的胰岛素抵抗改善，肝脏三酰甘油含量减少( P＝0.049)，肝脏损伤指标血清ALT水平下降( P＝0.008)。 结论:HPF和AM联合用药有望成为治疗肥胖、改善代谢紊乱、缓解儿茶酚胺抵抗的有效策略。

目的:评价预输注青年大鼠血浆对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍的影响及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路在其中的作用。方法:SPF级健康雄性Wistar大鼠120只，18月龄，体重550~650 g，采用随机数字表法分为4组( n＝30)：对照组(C组)、七氟烷麻醉组(S组)、青年大鼠血浆组(P组)和ERK抑制剂SL327组(SL组)。P组和SL组尾静脉注射经过处理的3月龄青年大鼠血浆100 μl/次，C组和S组尾静脉注射等容量生理盐水，2次/周，共4周。注射完毕后S组、P组和SL组大鼠吸入3%七氟烷麻醉3 h，麻醉前SL组尾静脉注射ERK抑制剂SL327 50 mg/kg。于麻醉前1 d和麻醉后3、7 d行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能；随后处死大鼠分离海马组织，采用Western blot法测定磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化CREB(p-CREB)、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达水平，透射电镜下观察海马神经元超微结构并记录突触数量。 结果:与C组比较，其余3组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调，突触数量减少( P<0.05)。与S组比较，P和SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达上调，突触数量增加( P<0.05)。与P组比较，SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调，突触数量减少( P<0.05)。 结论:预输注青年大鼠血浆减轻可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，其机制与激活ERK-CREB信号通路，改善海马突触可塑性有关。

目的:观察吡咯并喹啉醌(PQQ)在氧化应激条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)线粒体功能和细胞存活的影响，并探讨其作用机制。方法:体外用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(下称正常培养基)培养大鼠BMSC，选取对数生长期的第3～5代细胞进行实验。(1)取细胞，分为正常对照组、正常对照＋PQQ组、单纯过氧化氢组、过氧化氢＋PQQ组。正常对照组细胞用正常培养基培养24 h；正常对照＋PQQ组细胞用含终物质的量浓度为100 μmol/L PQQ的正常培养基培养24 h；单纯过氧化氢组细胞用含有终物质的量浓度为200 μmol/L过氧化氢的正常培养基培养24 h；过氧化氢＋PQQ组细胞用含有终物质的量浓度为100 μmol/L PQQ的正常培养基培养2 h后，加入终物质的量浓度为200 μmol/L的过氧化氢培养24 h。于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率。(2)取5个批次细胞，均分为正常对照组、单纯过氧化氢组、过氧化氢＋PQQ组，各组细胞处理同实验(1)中相应各组。培养24 h后，采用流式细胞术对1个批次细胞进行细胞凋亡检测，计算细胞凋亡率；采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒和倒置相差荧光显微镜对1个批次细胞分别进行线粒体膜电位检测和JC-1荧光染色观察；采用透射电镜观察1个批次细胞线粒体形态；采用过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒对1个批次细胞分别进行CAT和SOD活性检测；采用蛋白质印迹法对1个批次细胞环磷酸腺苷活化交换蛋白1(Epac1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-3蛋白表达进行检测，计算AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值。除形态观察外，其余各指标每组样本数均为6。对数据行单因素方差分析、独立样本等方差 t检验。 结果:(1)培养24 h后，单纯过氧化氢组细胞出现空泡且数量较正常对照组减少，细胞存活率为(74.3±2.9)%，较正常对照组的100.0%明显降低( t＝6.39， P<0.01)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞形态明显改善，细胞存活率明显升高至(116.9±4.2)%( t＝6.92， P<0.01)；正常对照＋PQQ组细胞存活率为(101.2±1.1)%，与正常对照组相近( t＝1.06， P>0.05)。(2)培养24 h后，与正常对照组的(13.6±1.0)%比较，单纯过氧化氢组细胞凋亡率明显增加[(37.1±2.0)%， t＝10.57， P<0.01]；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞凋亡率明显降低[(17.0±0.7)%， t＝9.49， P<0.01]。(3)培养24 h后，与正常对照组比较，单纯过氧化氢组细胞线粒体膜电位出现去极化，JC-1荧光染料主要以单体形式存在于细胞质中，发出绿色荧光，表现为膜电位明显降低( t＝4.18， P<0.01)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞线粒体膜电位升高至正常水平( t＝4.43， P<0.01)，JC-1荧光染料顺着极化线粒体膜电位进入线粒体聚集，发出红色荧光。(4)培养24 h后，与正常对照组的规则形态比较，单纯过氧化氢组细胞线粒体结构紊乱，线粒体嵴消失，线粒体基质密度降低；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞线粒体结构规则完整，线粒体嵴清晰可见，线粒体基质密度增加。(5)培养24 h后，与正常对照组比较，单纯过氧化氢组细胞CAT活性明显升高( t＝4.54， P<0.05)，SOD活性明显降低( t＝3.93， P<0.05)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞CAT活性明显上升( t＝8.65， P<0.01)，SOD活性无明显变化( t＝0.72， P>0.05)。(6)培养24 h后，与正常对照组比较，单纯过氧化氢组细胞Epac1蛋白表达明显降低( t＝4.67， P<0.01)，AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值明显升高( t＝7.88、3.62， P<0.01)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞Epac1蛋白表达、AMPK磷酸化水平均明显升高( t＝4.34、16.37， P<0.01)，剪切型caspase-3/caspase-3比值明显降低( t＝3.17， P<0.05)。 结论:PQQ预处理能够改善氧化应激条件下大鼠BMSC的线粒体功能，降低细胞凋亡率，提高细胞存活率，且可能与Epac1蛋白表达上调、AMPK信号通路激活和剪切型caspase-3蛋白水平降低有关。

目的:探讨腺苷酸环化酶（ADCY）2/4/5/8在皮肤恶性黑色素瘤中的表达、作用及功能机制，验证ADCY2/4/5/8对黑色素瘤细胞A375增殖和迁移的影响。方法:通过基因表达谱分析（GEPIA）和人类蛋白质图谱（HPA）数据库分析ADCY2/4/5/8 mRNA和蛋白的表达以及基因表达与预后的关联，UALCAN、DeMth和cBioPortal数据库分析ADCY2/4/5/8基因甲基化和突变状态，DAVID和STRING数据库对ADCY2/4/5/8基因进行基因富集分析和通路分析。qPCR检测黑色素瘤A375细胞及色素痣FF细胞中ADCY2/4/5/8 mRNA的相对表达。将A375细胞分为实验组和对照组分别转染ADCY2/4/5/8过表达质粒和对照空载体，采用CCK8和Transwell实验检测过表达ADCY2/4/5/8对A375细胞增殖和迁移的影响，qPCR检测过表达ADCY2/4/5/8基因对A375细胞增殖、迁移相关基因mRNA相对表达的影响，Western印迹法检测过表达ADCY2/4/5/8基因对A375细胞环磷酸腺苷（cAMP）信号通路的影响。组间比较采用单因素方差分析和重复测量方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:GEPIA数据库分析显示，558例正常组织中，ADCY2、ADCY4、ADCY5和ADCY8 mRNA在黑色素瘤组织（ n = 461）中表达下调（ P < 0.01）。对GEPIA数据库中黑色素瘤ADCY2/4/5/8 mRNA的表达分层分析显示，ADCY2 mRNA（ P = 0.015）和ADCY8 mRNA（ P = 0.038）的表达与肿瘤分期相关，表达越低，分期越晚。HPA数据库30例黑色素瘤临床样本和正常组织中，ADCY2/4/5/8蛋白在黑色素瘤组织较正常组织表达降低（ P < 0.001）。UALCAN和DeMth数据库分析显示，与正常组织相比，ADCY2/4/5/8在黑色素瘤组织和转移性黑色素瘤组织中甲基化水平升高（ P < 0.001）。DAVID、STRING分析示，ADCY2/4/5/8基因可能通过激活cAMP信号通路抑制细胞增殖和迁移。qPCR检测显示，A375细胞中ADCY2/4/5/8 mRNA的相对表达均低于FF细胞。CCK8实验显示，培养48、72 h时，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞存活率均低于对照组（均 P < 0.05）。Transwell实验显示，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞迁移数均低于对照组（均 P < 0.01）。qPCR结果显示，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞上皮钙黏蛋白mRNA相对表达高于对照组，Ki67、波形蛋白、神经钙黏蛋白和基质金属蛋白酶2 mRNA相对表达低于对照组（均 P < 0.001）。Western印迹实验显示，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞cAMP和磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）表达高于对照组（ P < 0.001），实验组与对照组细胞PKA蛋白表达水平差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:ADCY2/4/5/8在黑色素瘤组织中低表达，过表达时可抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移，可能作为潜在的抑癌基因参与黑色素瘤的进展。

目的:探讨氟暴露对小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法:自C57BL/6小鼠（6 ~ 8周）股骨分离、培养得到BMSCs，取第3代细胞采用流式细胞术分析干细胞表面标志物。用氟终浓度分别为0.0、0.1、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0 mg/L的培养基培养BMSCs，检测不同浓度氟对BMSCs细胞增殖（CCK8法）、凋亡（流式细胞术分析）、成骨分化能力[茜素红及碱性磷酸酶（ALP）染色]的影响；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白[聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）]、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路成员蛋白[细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2），c-Jun氨基末端激酶（JNK），p38及磷酸化ERK、JNK、p38（p-ERK、p-JNK、p-p38）]，成骨分化相关蛋白[Runt相关转录因子2（Runx2）、ALP]与Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路成员蛋白[糖原合成酶激酶-3β（GSK3β）、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）及β-catenin]的表达水平；并采用免疫荧光染色分析p-GSK3β及β-catenin的表达情况；使用SP600125及DKK-1分别阻断MAPK和Wnt/β-catenin 2个信号通路后，分析细胞凋亡及成骨分化等的变化。结果:成功分离、培养出小鼠BMSCs，流式细胞术分析显示，间充质干细胞表面标志分子CD73、CD90、CD105均呈阳性。各浓度组3个时间点（24、48、72 h）细胞增殖情况比较差异均有统计学意义（ F = 65.36、160.04、365.32， P均< 0.001），各浓度组细胞早期凋亡情况（24 h）比较差异有统计学意义（ F = 214.04， P < 0.001）；与0.0 mg/L氟浓度组比较，15.0、20.0、40.0 mg/L氟浓度组细胞增殖水平均降低，10.0、15.0、20.0 mg/L氟浓度组细胞早期凋亡率均增高（ P均< 0.05）。15.0 mg/L氟处理细胞0 ~ 24 h，p-JNK/JNK比例在2、4、8、12、18、24 h时间点均高于0 min（ P均< 0.05）；与单独氟处理组（15.0 mg/L）比较，SP600125阻断后细胞早期凋亡率降低（ P < 0.05），PARP及p-JNK蛋白表达水平均降低（ P均< 0.05）。成骨诱导后，与0.0 mg/L氟浓度组比较，0.1、1.0 mg/L氟浓度组ALP染色增强、矿化结节数量增多；且0.1、1.0 mg/L氟浓度组Runx2及ALP蛋白表达水平均较高（ P均< 0.05）。成骨诱导后，与0.0 mg/L氟浓度组比较，0.1、1.0 mg/L氟浓度组p-GSK3β/GSK3β比例及β-catenin蛋白表达水平均较高（ P均< 0.05）；与单独氟处理组（1.0 mg/L）比较，DKK-1阻断后p-GSK3β及β-catenin蛋白表达水平均较低（ P均< 0.05），β-catenin入核减少，ALP染色减弱，矿化结节数目减少。 结论:高浓度氟（> 10.0 mg/L）抑制BMSCs增殖、促进凋亡，而低浓度氟（0.1、1.0 mg/L）促进细胞成骨分化。MAPK/JNK通路与Wnt经典通路分别参与了上述细胞过程。

目的:探索腺苷受体2A(A 2AR)调控神经肽Y(NPY)的机制及其在椎间盘退行性病变中对髓核细胞凋亡和细胞外基质的影响。 方法:采用随机数字表分组法将30只雄性SD大鼠分为5组，每组6只。S组为对照组，即穿刺大鼠L5～6椎间盘后注射生理盐水；M组为模型组，即通过椎间盘穿刺联合椎间盘内注射肿瘤坏死因子α构建大鼠椎间盘退变模型；A 2AR-小干扰RNA(siRNA)组、NC-siRNA组和CGS-21680组则为构建椎间盘退变模型基础上分别向椎间盘内注射A 2AR的siRNA、阴性对照(NC) siRNA和A 2AR激动剂CGS-21680。采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应检测A 2AR、NPY、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、蛋白激酶A(PKA)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)等蛋白在椎间盘中的表达。组间比较采用单因素方差分析。 结果:在M组中，A 2AR(1.72±0.50比0.95±0.18， F＝11.49， P>0.05)、NPY(0.40±0.03比0.20±0.04， F＝22.08， P<0.05)和bax(0.62±0.52比0.40±0.04， F＝30.97， P<0.01)蛋白表达水平高于S组，而Col-Ⅱ(0.39±0.03比0.75±0.08， F＝16.24， P<0.01)低于S组；在CGS-21680组中，A 2AR(2.70±0.45比1.72±0.50， F＝11.49， P<0.05)，NPY(0.55±0.05比0.40±0.03， F＝22.08， P<0.05)和Col-Ⅱ(0.53±0.11比0.39±0.03， F＝16.24， P>0.05)表达高于M组，而bax表达低于M组(0.48±0.08比0.62±0.52， F＝30.97， P>0.05)；在A 2AR-siRNA组中，各分子表达变化与CGS-21680组相比与M组相反：A 2AR(0.95±0.29比1.72±0.50， F＝11.49， P>0.05)，NPY表达(0.20±0.06比0.40±0.03， F＝22.08， P<0.01)，bax(0.72±0.09比0.85±0.04， F＝28.01， P>0.05)和Col-Ⅱ(0.42±0.14比0.59±0.19， F＝21.62， P>0.05)。 结论:A 2AR可能通过PKA/CREB信号通路上调NPY及其受体起到减少髓核细胞凋亡和保护细胞外基质的作用。

目的:探讨电针(EA)治疗对脊髓损伤(SCI)小鼠内源性神经干细胞(eNSCs)增殖、分化的影响及其与蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的关系。方法:48只C57BL/6小鼠采用完全随机方法分为假手术组(Sham组)、SCI模型组(SCI组)、SCI＋EA处理组(EA组)、SCI＋EA＋AKT抑制剂MK-2206处理组(EA＋MK-2206组)，每组12只。Sham组仅行椎板切除术，其余3组均建立T 8～9脊髓全横断模型。各组于SCI后第7、14天取损伤处脊髓组织，其中SCI后第7天采用免疫荧光染色方法检测巢蛋白(Nestin)和Ki-67的表达水平，以评估eNSCs的增殖情况，并采用蛋白质免疫印迹(WB)法检测Nestin蛋白的表达水平；SCI后第14天采用免疫荧光染色检测神经生长相关蛋白(GAP-43)和Ki-67的表达水平，以评估eNSCs向神经元的分化情况，检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以评估损伤处星形胶质细胞的活化情况；采用WB法检测GAP-43和AKT/GSK-3β/CREB信号通路蛋白的表达水平。 结果:SCI小鼠的建模成功率为94.7%(36/38)。免疫荧光染色结果显示，与Sham组相比，SCI组脊髓损伤部位Nestin与Ki-67共标阳性细胞数量显著增多( P<0.05)；与SCI组相比，EA组脊髓损伤部位Nestin与Ki-67共标、GAP-43与Ki-67共标阳性细胞数量均明显增多，而GFAP阳性细胞数量减少(均 P<0.05)。WB结果显示，EA组Nestin、GAP-43蛋白的表达量相较于SCI组均明显升高(均 P<0.05)；与Sham组相比，SCI组GSK-3β磷酸化水平减低( P<0.05)，而AKT和CREB磷酸化水平与Sham组的差异均无统计学意义(均 P>0.05)；与SCI组相比，EA组AKT、GSK-3β以及CREB的磷酸化水平均显著升高(均 P<0.05)；EA＋MK-2206组的AKT、GSK-3β和CREB的磷酸化水平均低于EA组(均 P<0.05)，而与SCI组相比AKT、GSK-3β和CREB磷酸化蛋白表达的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:EA治疗可促进小鼠SCI后eNSCs的增殖和向神经元的分化，且通过促进AKT、GSK-3β、CREB的磷酸化激活AKT/GSK-3β/CREB通路，提示EA治疗SCI的机制可能与AKT/GSK-3β/CREB通路有关。

目的:观察脉冲电磁场(PEMF)对椎间盘退行性病变(IDD)大鼠A2A腺苷受体(A2AR)及p38 MAPK信号通路的影响。方法:采用随机数字表法将40只SD大鼠分为对照组、IDD模型组(简称模型组)、PEMF组和PEMF联合CGS-21680治疗组(简称观察组)。将模型组、PEMF组及观察组大鼠制成IDD动物模型，PEMF组于制模后给予PEMF干预，观察组则给予PEMF干预并注射A2AR激动剂CGS-21680。于造模8周后采用番红O-快绿染色评估各组大鼠椎间盘病理改变，同时检测各组大鼠椎间盘A2AR、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-3(MMP3)表达水平。结果:模型组大鼠髓核组织皱缩，纤维成分及软骨细胞增多，观察组大鼠髓核形态基本趋于正常，纤维环完整无破裂。模型组椎间盘组织A2AR蛋白表达及mRNA水平均高于对照组，观察组A2AR蛋白表达及mRNA水平均显著高于其他各组( P<0.05)。PEMF组和观察组椎间盘cAMP含量及PKA mRNA表达均较模型组增高，且观察组与模型组间差异具有统计学意义( P<0.05)。模型组大鼠椎间盘p38 MAPK、p-p38 MAPK含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均显著高于对照组( P<0.05)，PEMF组和观察组p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均有不同程度降低，且观察组上述指标数值均显著低于模型组( P<0.05)，p-p38 MAPK蛋白含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值亦显著低于PEMF组( P<0.05)。模型组大鼠Caspase-3蛋白含量及mRNA表达均显著高于对照组，PEMF组及观察组上述指标含量均较模型组明显降低( P<0.05)。模型组大鼠MMP3含量较对照组显著升高，Col-Ⅱ含量则明显下降；PEMF组、观察组MMP3含量均较模型组降低，Col-Ⅱ表达均较模型组增高，并且观察组上述指标含量与模型组间差异均具有统计学意义( P<0.05)。 结论:炎性因子刺激能活化p38 MAPK信号通路并诱导细胞凋亡，这也是促进IDD大鼠病变的重要原因之一。PEMF联合A2AR激动剂干预能激活A2AR/cAMP/PKA信号通路，进而抑制p38 MAPK磷酸化，减少髓核细胞凋亡，缓解IDD损伤。