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构建髓系细胞特异性Clcn7突变骨硬化症小鼠模型和表型研究
编辑人员丨5天前
目的:构建髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的骨硬化小鼠模型,并进行表型研究。方法:构建条件性敲入Clcn7基因p.G763R错义突变小鼠,并与溶菌酶M启动子-重组酶转基因小鼠(LysM cre)交配繁殖,最终获取髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的骨硬化小鼠。利用Micro CT分析不同基因型小鼠骨微细结构的差异,利用HE染色观察骨组织形态学改变。诱导原代破骨细胞,通过实时荧光定量PCR技术检测破骨细胞分化和成熟相关基因表达水平。利用骨吸收陷窝实验观察破骨细胞功能。结果:4周龄时纯合突变小鼠体重较野生型小鼠减轻[(12.000±1.666)g对(15.630±2.314)g, P=0.021],股骨长度较野生型缩短[(1.160±0.096)cm对(1.300±0.082)cm, P=0.037)]。Micro CT发现纯合突变小鼠骨密度在4周龄时较野生型小鼠显著增加[(0.753±0.002)g/cm 3对(0.143±0.034)g/cm 2, P=0.003],而杂合突变小鼠骨密度在8周龄时增加明显[(0.236±0.021)g/cm 3对(0.180±0.020)g/cm 3, P=0.030]。HE染色发现纯合突变小鼠骨髓腔消失,松质骨骨小梁数量显著增多,软骨肥大区增宽;杂合突变小鼠骨小梁较野生型小鼠增多。体外实验中,杂合突变小鼠破骨细胞数量较野生型无明显变化( P=0.358),但破骨细胞面积增大[(3.590×10 6±0.911×10 6)μm 2对(1.352×10 6±0.260×10 6)μm 2, P=0.043],骨吸收陷窝相关检测结果提示破骨细胞功能降低,而破骨细胞分化和成熟相关基因NFATc1、c-fos、Ctsk和Acp5表达水平均无显著变化。 结论:本研究成功构建髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的小鼠,突变型小鼠破骨细胞功能受损,骨量显著增加且股骨变短,为后续机制研究和治疗探索提供工具。
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编辑人员丨5天前
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乙醛脱氢酶 2 基因多态性与对乙酰氨基酚所致肝损伤关系的研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与对乙酰氨基酚(APAP)药物所致肝功能异常的相关性。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ALDH2基因敲除小鼠模型,将获得的杂合子型小鼠与异性杂合子交配,提取子代小鼠鼠尾基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法进行ALDH2基因型鉴定;进一步采用APAP在野生型和ALDH2基因敲除小鼠中诱导急性药物性肝损伤模型,采集小鼠血液和肝脏组织行肝功能指标检测及苏木素-伊红染色、F4/80免疫组织化学检测等。组间均数比较采用单因素方差分析、LSD- t检验方法进行两两比较。 结果:ALDH2基因敲除小鼠成功繁殖,子代小鼠基因型分别为野生型(ALDH2 +/+)、杂合突变型(ALDH2 +/-)、纯合突变型(ALDH2 -/-)。APAP造模后的生化和组织学实验结果表明:空白对照组的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBil)水平无明显升高;与空白对照组相比,APAP实验组的ALT、AST、ALP和TBil水平均显著升高( P值均<0.05),其中突变组的ALT( P ?=?0.004)、AST( P ?=?0.002)、TBil( P ?=?0.012)水平显著高于野生型组,且这些指标在纯合突变型的表达水平也显著高于杂合突变型( P值分别为0.003、0、0.006)。另外,杂合突变组小鼠的ALP水平高于纯合突变组( P ?=?0.085)和野生型组小鼠,但只与野生型小鼠的比较差异具有统计学意义( P ?=?0.002)。HE染色结果显示APAP实验组小鼠出现肝细胞变性、坏死,炎性细胞浸润增多,以突变型小鼠最明显;同时,F4/80免疫组织化学染色结果显示APAP实验组小鼠肝组织内可见棕褐色颗粒,其表达水平较空白对照组明显增高。 结论:APAP所致肝功能异常与ALDH2基因多态性相关,ALDH2突变型小鼠在APAP造模后的肝损伤症状有所加重,ALDH2基因缺陷可能在一定程度上加重APAP诱导的肝生物化学指标异常。
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编辑人员丨5天前
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对空盆腔综合征的认识及其防治
编辑人员丨5天前
随着现有手术技术、器械设备及治疗理念的不断更新进步,越来越多的医疗中心开始对于累及盆腔多器官及复发性盆腔恶性肿瘤的患者开展更加积极的扩大切除手术。扩大手术范围可以提高切缘阴性比率,实现肿瘤的R 0切除,有效改善患者预后并延长生存时间。因此,盆腔脏器联合切除术对于局部晚期的盆腔恶性肿瘤患者,已经逐渐成为标准的手术方式。目前,在开展盆腔脏器联合切除手术过程中,面临的主要问题仍然是患者术中和术后并发症发生率及病死率偏高以及长期生活质量较低。对于盆腔脏器联合切除术后并发症的相关研究,现逐渐聚焦于盆腔术后残存的巨大空腔,这可能是此类并发症的重要诱因,并由此提出了“空盆腔综合征”这一概念。本文在汇总空盆腔综合征相关文献基础上,分析其发生的原因可能为盆腔脏器联合切除术后,封闭的盆腔残腔随着空腔内空气被逐渐吸收、细菌繁殖及积液富集等过程而形成持续存在的负压,进而对整个腹盆腔内器官分布产生影响;同时,物理过程在参与空盆腔综合征的发生过程中是否也发挥着作用,有待探讨。汇总提出,其诊断主要依据患者病史、临床表现及影像学征象,而盆腔脏器切除手术史是病史诊断中最重要的指标。在预防措施上,首先应识别空盆腔综合征发生的高危人群,进而采取精准而个体化的预防措施;各种新型生物材料较传统的人体组织填充,在预防性盆腔填充方面更具优势;肠系膜对于小肠形态、蠕动和排列具有重要作用,通过保护肠系膜结构、恢复或重建肠系膜形态等方法,减少小肠异位入盆腔的机会,应获得更多关注。在治疗措施上,目前尚缺乏空盆腔综合征的标准治疗路径。
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编辑人员丨5天前
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狂犬病病毒CVS-11攻毒小鼠动物模型的建立及初步应用
编辑人员丨5天前
目的:建立狂犬病病毒CVS-11以肌肉注射或脑内注射方式攻毒的BALB/c小鼠动物模型。方法:将由BSR细胞传代繁殖的滴度为2.7×10 7 FFU/ml的CVS-11毒株进行10 -1~10 -7倍系列稀释,分别以肌肉或脑内注射的方式对4周龄的雌性BALB/c小鼠进行攻毒,观察小鼠发病死亡情况,并对所有攻毒小鼠的脑组织进行直接免疫荧光试验(direct fluorescent assay, DFA)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测以确定小鼠死因。确定不同攻毒方式下小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD 50),建立小鼠模型。根据已建立的小鼠模型,评估4种国内市售狂犬病疫苗对CVS-11暴露后小鼠的免疫保护效果。 结果:BALB/c小鼠脑内攻毒后于第6~12天开始出现典型的神经症状并死亡,其LD 50为18.3/0.1 ml;肌肉注射攻毒的小鼠在第8~15天出现临床症状并死亡,LD 50为2.7×10 5/0.1 ml。DFA检测结果显示,所有死亡小鼠脑组织印片中均出现特异性黄绿色荧光,RT-PCR检测结果显示所有的扩增产物均出现大小约250 bp的明亮条带。以上结果提示狂犬病病毒感染是小鼠的致死原因。4种不同的市售狂犬病疫苗在无免疫球蛋白应用情况下的保护效果试验显示,接种其中1种疫苗暴露后小鼠的存活率为50%,接种其他3种疫苗小鼠的存活率为30%。以上结果表明,在无狂犬病被动免疫制剂使用的情况下,所选用的4种狂犬病疫苗对经CVS-11暴露后的小鼠提供了部分保护作用。 结论:本研究建立了狂犬病病毒CVS-11不同攻毒方式下的BALB/c小鼠动物模型,为狂犬病及狂犬病疫苗的相关研究提供了一个技术平台。
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编辑人员丨5天前
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常见遗传性聋小鼠模型品系听力学特点
编辑人员丨5天前
耳聋是最常见的感觉功能障碍,遗传性因素是导致感音神经性聋的最主要因素。近年来,利用基因编辑技术构建遗传性聋动物模型已成为研究耳聋基因的重要手段。由于小鼠基因信息相对明确,遗传学及解剖学与人类相近,繁殖能力快等优点逐渐成为遗传性聋模型的首选,但小鼠各品系间听力学特点不同,选择合适的小鼠可以有效降低品系对实验结果产生的影响。基因编辑后小鼠听力表型多样,并非全部可出现遗传性听力损失,实验设计时需考虑周全。本文主要对构建遗传性聋小鼠模型时,常用的不同品系小鼠听力学特点进行归纳,C57小鼠是常用的实验模型,但其听力稳定性较差;CBA小鼠听力稳定性较好,是研究遗传性聋较为合适的候选。
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编辑人员丨5天前
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糖尿病视网膜病变动物模型选择和应用的研究进展
编辑人员丨5天前
根据诱导糖尿病视网膜病变(DR)的实验方法不同以及观察到的视网膜病变特点不同,DR动物模型可分为药物或食物诱发性模型、氧诱导视网膜病变(OIR)模型、自发遗传性模型和基因模型。诱发性模型是目前最常用于DR研究的动物模型,具有耗时短、成本低、方法简便、重复性较好和短期内可批量造模等优点;但其使用的药物对实验动物的全身各器官均有一定的毒副作用,动物死亡风险较大。OIR模型的表型重复性高、稳定性高且成本相对较低,但由于OIR小鼠缺乏全身性高血糖的代谢改变,此模型无法准确反映高血糖状态下由于代谢情况对视网膜病变的影响。自发遗传性模型病理改变较为稳定,但由于价格昂贵,且同系繁殖和单基因遗传会使其糖尿病的遗传同质性与人类有差异,限制了该模型的广泛应用。基因模型的优点是病因明确,但对技术、实验操作和实验仪器要求高,成本高不适合大批量造模,因此在应用中受限。研究者应从特定的研究目的、观察指标、实验条件和经费等多方面综合考量,结合DR模型的特点和局限性,从而选择最佳的动物模型。此外,仍需开发能够更精确模拟DR的动物模型,以扩展对DR机制的探索,为研发可行的预防和治疗方法提供更加有效的工具。
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编辑人员丨5天前
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一种降低VAP发生率的全封闭式吸痰管冲洗装置的设计与运用
编辑人员丨5天前
呼吸机相关性肺炎(VAP)是重症监护病房(ICU)行机械通气患者最常见的感染性疾病之一。尽管使用封闭式吸痰管行吸痰操作是ICU气管插管患者最常见的护理措施,也是减少VAP发生的重要措施,但临床现有技术仍需使用外接冲管液进行湿化和冲洗。在使用过程中,该冲管操作存在无法控制冲洗液量,导致大量冲洗液进入患者气道,造成患者窒息的风险。附着在吸痰管壁的痰液无法完全冲净,痰液长时间滞留导致定植菌繁殖,加重患者感染情况。多次冲管既增加了耗材,又增加了医护人员的工作量。为此笔者设计了一种全封闭式吸痰管冲洗装置,获得了国家实用新型专利(专利号:CN 2019 2 1198740.5),此装置为一体化设计,吸痰、湿化、冲管用物全封闭,均无空气暴露,可严格进行无菌操作;注射器脉冲式冲洗可洗净附着于内壁的痰液,降低VAP发生率;使用过程中可有效控制冲洗液量,保证患者安全,减少浪费;优化操作步骤,减轻医护人员工作量,值得临床实践推广应用。
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编辑人员丨5天前
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杂种优势形成机制和预测方法及其在猪生产中的应用与展望
编辑人员丨2周前
杂种优势是指杂种后代的性能优于双亲群体的现象.杂交能有效提高后代的生长发育性能、繁殖性能和抗病性,因此被广泛应用于动植物生产.研究人员利用杂交育种技术培育了超优千号杂交水稻、小偃6号杂交小麦、杜蒙羊、山下黑猪等优秀的农牧新品系和配套系.然而当前的杂种优势研究仍存在一些亟待解决的问题:现有杂种优势理论只能部分解释动植物杂种优势现象,动物杂种优势理论研究较少,且现有的杂种优势预测方法准确性有限.我国是世界上最大的猪肉生产消费国,杂种优势能够有效提高生猪生产性能,在生猪产业的应用方面具有重要的经济和研究价值.但目前有关猪杂交生产研究还处于起步阶段,亟待进一步深入.本文综述了现有的杂种优势理论、杂种优势预测方法,及其在猪生产中的应用研究,以期为杂种优势在生猪育种中的应用提供借鉴与参考.
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编辑人员丨2周前
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捕虫堇叶片高效再生体系建立
编辑人员丨2周前
以2个不同基因型的捕虫堇圆切捕虫堇(Pinguicula cyclosecta)和塞提捕虫堇(P.'Sethos')叶片为外植体,通过探究不定芽再生的影响因素,成功建立了捕虫堇高效再生体系.结果表明,2种捕虫堇对消毒方式和基本培养基种类要求相同,但再生能力有显著差异.圆切捕虫堇叶片在MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1 NAA培养基上再生能力最强,再生率为92.22%,再生系数达4.84.在MS+0.6 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA培养基上,不定芽增殖系数达4.98.塞提捕虫堇叶片在MS+2.0 mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1 NAA培养基中再生率最高,为77.78%,再生系数为6.12,在增殖培养基MS+0.3 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 NAA上,增殖系数可达4.84.2种捕虫堇在1/2MS+0.1 mg·L-1 IBA培养基上进行生根培养,根系生长状态最佳.该研究解决了捕虫堇繁殖系数低及工厂化育苗难等问题,为其规模化生产和育种改良提供了技术支持.
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编辑人员丨2周前
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微氧射流技术在慢性伤口患者中的应用
编辑人员丨2周前
目的:探讨微氧射流技术在慢性伤口患者中的应用效果.方法:选取 2022 年 11 月 1 日~2023 年 10 月 31 日收治的 60例慢性伤口患者作为研究对象,采用随机数字表法分为研究组和对照组各 30 例,对照组接受常规换药处理,研究组在对照组基础上接受微氧射流技术;比较两组愈合疗效、住院情况、生活质量[采用健康调查简表(SF-36)]、细菌阳性率.结果:研究组创面愈合总有效率高于对照组(P<0.05);研究组换药消耗时间、伤口愈合时间、换药次数、创面深度均低于对照组(P<0.01);干预后,两组SF-36 评分均高于干预前(P<0.05),且研究组高于对照组(P<0.01);研究组铜绿假单菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及其他菌总阳性率低于对照组(P<0.05).结论:微氧射流技术能改善慢性伤口患者愈合情况,抑制细菌繁殖,降低细菌阳性率,提高创面愈合疗效和患者生活质量.
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编辑人员丨2周前
