目的 从北部湾红树林区采集的植物样品中分离真菌,并从中发现具有活性的次级代谢产物.方法 采用10倍稀释法通过3种培养基分离北部湾红树林岸边植物中的真菌,发酵后进行化学成分分析,筛选优先研究菌株,并采用现代色谱分离技术对优选菌株次级代谢产物进行分离纯化,通过波谱方法和文献数据对比解析鉴定化合物结构,采用CCK-8法进行化合物细胞毒活性检测.结果 从北部湾红树林区来源的4个植物样品中共分离得到94株真菌,筛选出3株优选菌株,从中分离的3个主产物,分别鉴定为phomoxanthone A(1)、isomeleagrin(2)和(-)-(6S,1'S)-pestalotin(3).细胞毒活性测试表明,化合物1和2具有多种细胞毒活性.结论 首次发现isomeleagrin对5637人膀胱癌细胞、DU145人前列腺癌细胞、A673人横纹肌肉瘤细胞具有一定的细胞毒活性,红树林区来源真菌具有产生细胞毒活性化合物的潜力.

红树林植物长期处于高盐、缺氧、频繁潮汐等独特环境,其内生真菌与宿主植物共同进化,从中挖掘出了许多结构新颖的功能分子,是天然产物先导化合物发现的重要来源.本文综述了2018年1月-2019年12月发现的来源于红树林植物内生真菌的次级代谢产物,重点总结了它们的化学结构类型、宿主来源.描述化合物460个,其中新化合物217个,出新率达47.2％;结构类型涉及聚酮类、萜类、生物碱;研究较多的菌属为曲霉属Aspergillus、间座壳属Diaporthe、青霉属Penicillium、枝孢属Cladosporium;研究较多的宿主植物为秋茄、红海榄、海莲、角果木.本文旨在总结本领域的研究成果与存在问题,为今后研究提供参考.

角果木是长期生长在热带、亚热带潮间带的典型真红树植物,因从其中分离到一系列具有优良抗肿瘤活性的萜类成分使得角果木内生真菌及其次级代谢产物的研究也越来越受到关注.本文对近10年来从角果木内生真菌中分离到的72个化合物进行结构特点和生物学功能评述,以期概述角果木内生真菌代谢产物的最新研究成果和进展,为角果木内生真菌的深入研究和开发利用提供参考.

利用水解圈法从三亚红沙河红树林区分离得到l株纤维素降解真菌SCSIO 43503.分子生物学鉴定表明,该菌ITS序列与菌株Ochrocladosporiumfrigidarii CZ549(FJ755255)的相似度为96％,β微管蛋白(β-tubulin)序列与Shiraia bambusicola(AB355003)的相似性为86％,钙调蛋白(calmodulin)与Paramyrothecium viridisporum CBS 873.85(KU846278)序列相似性为89％;综合其形态学特征,推测其为枝孢属(Gladaxporism)真菌,命名为Gladaxporism sp.SCSIO 43503 (KY224732).进一步对该菌株分泌的纤维素酶进行分析,结果显示该菌株维素酶活性的最适反应温度为50℃,在45～50℃范围内活性较高;最适pH为5.0,在3.0～7.0范围内具有较高的活性,最适发酵时间为3d.在最优条件下,酶活力达到最高,为23.46 U.本研究发现了一株纤维素降解真菌,对纤维素酶的生产和利用具有重要价值.

目的 对红树林植物内生真菌Stachybotrys chartarum (HDN16-358)进行次级代谢产物的研究.方法 利用薄层色谱层析(TLC)、反相ODS、Sephadex LH-20、半制备型HPLC等色谱学方法对菌株的乙酸乙酯粗提物进行分离纯化;利用NMR、MS、UV等波谱学技术手段,解析确定化合物的结构,并对化合物1进行了细胞毒活性筛选.结果 分离鉴定了5个单体化合物:(2S)-5-Hydroxy-2,7-dimethyl-2-(4,8-dimethyl-3E,7-nonadienyl)-2H-chromene-6-carbaldehyde(1)、BR 011 (2)、LL-Z 1272β (3)、stachybotrylactone (4)、5-Methylbenzene-1,3-diol(5).结论 红树林植物内生真菌是活性物质的重要来源.从红树林植物内生真菌Stachybotrys chartarum HDN16-358中分离得化合物1～5,其中化合物1首次从自然界中分离得到,其具有中等强度的细胞毒活性.

目的 评价从红树林内生真菌Penicillium sp.SCNU-F0003中分离得到的新化合物(+)-(5R,5'R)-3,3'-methylenebistetronic acid (1)和5个已知化合物的潜在活性.方法 通过核磁数据分析和单晶衍射分析确定化合物1的绝对构型,并测定所有化合物的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性.结果 化合物1显示中等抗氧化活性,IC50值为81.6 μmol/L,化合物2(IC50=270.3 μmol/L)显示出α-葡萄糖苷酶抑制活性,比阳性药物阿卡波糖(IC50=725.1 μmol/L)活性更好.结论 化合物1和2具有潜在的生物活性.

采用硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析和高效液相色谱(HPLC)等技术,从一株红树马六甲木果楝来源的土曲霉Aspergillus terreusxy03的发酵物中分离得到了7个杂萜类化合物:asptercin A(1)、(1R,4aR,6aR,12aR,12bS)-1,3,4,4a,5,6,6a,12,12a,12b-decahydro-1,4a,12a-trihydroxy-4,4,6a,12b-tetramethyl-9-(4'-methoxyphenyl)-2H,11H-naphtho[2,1-b]pyrano[3,4-e]pyran-11-one(2)、arisugacin D(3)、arisugacin H(4)、territrems A-C(5-7),其中asptercin A(1)为新化合物.化合物2、4、5、6和7具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性,在0.1mmol/L的浓度下,抑制率分别为76.1％、77.1％、86.1％、86.1％和86.0％.

勘探半红树植物海芒果内生和根际细菌多样性,挖掘具有高效广谱抗农用真菌活性菌株.以7种植物病原真菌为指示菌,采用平板对峙法对海芒果组织和根际中分离到的细菌进行抑菌活性筛选,并对活性菌株的基因组DNA进行聚酮合酶(PKS)基因与非核糖体肽合成酶(NRPSs)基因的扩增及检测.从海芒果组织和根际中共分离到454株细菌,隶属于35属71种,从中筛选出15株细菌在至少1个抗菌活性检测中显示阳性,总阳性率为21.13％,其中6株细菌对多种指示菌均有抑制活性;且15株活性菌株的基因组DNA均扩增出至少1种次级代谢产物合成基因.综上所述,广西山口红树林自然保护区内半红树植物海芒果内生和根际细菌具有丰富物种多样性、抗农用真菌活性及合成聚酮类和非核糖体肽类化合物的潜能.

勘探红树植物角果木树皮来源放线菌多样性,挖掘具有高效广谱抗农用真菌、高产多种功能酶和一定耐药性的放线菌,为开发农用生防菌肥提供参考依据.应用可培养技术和16S rRNA基因序列的系统发育分析研究红树植物角果木中可培养放线菌的多样性,并对其进行抑制植物病原菌、功能酶活性及其基因组DNA的聚酮合酶(PKS)基因与非核糖体肽合成酶(NRPS)基因筛选;同时对抑菌活性菌株开展有机磷农药耐受试验.结果 表明,从角果木树皮中共分离到30种放线菌,隶属于10科12属;从中筛选出10株放线菌在至少1个抗菌活性检测中显示阳性,且对多种有机磷农药均表现出一定的耐受性;此外,其中24株放线菌具有至少一种功能酶活性,及18株放线菌的基因组DNA扩增出抗生素生物合成基因.综上所述,海南东寨港红树林保护区内红树植物角果木树皮来源放线菌具有丰富的物种多样性和多种显著的生物活性.

目的 研究红树林植物大红树内生真菌Phomopsis asparagi DHS-48发酵提取物中的化学成分及其对肝癌HepG2细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 通过反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据并结合参考文献鉴定化合物DD-38的结构;用不同浓度DD-38处理HepG2细胞,采用MTT比色法检测其对HepG2细胞增殖的抑制作用;平板克隆形成实验检测HepG2细胞克隆形成能力;细胞划痕实验观察HepG2细胞细胞的体外迁移能力;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测β-catenin的表达水平.结果 通过1H NMR、13CNMR及MS等波谱学方法,结合相关文献数据,鉴定化合物结构为:dicerandrol A(DD-38);MTT实验显示,DD-38对HepG2细胞的增殖具有明显抑制作用,存在时间和剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01);根据细胞增殖率得出24 h时HepG2细胞的IC50为(4.8273±0.2216)pmol/L;平板克隆形成实验显示,DD-38明显降低了HepG2细胞的克隆形成能力,具有剂量依赖性(P＜0.01);细胞划痕实验表明DD-38可以显著降低HepG2细胞的迁移能力(P＜0.01),加药24h后,细胞迁移率从77.09％±2.16％降低到12.14％±5.32％;流式细胞术检测实验显示,DD-38可促进HepG2细胞凋亡,凋亡率存在剂量依赖性;Western blot实验显示,DD-38可抑制β-catenin蛋白在细胞质和细胞核中的表达(P＜0.05和P＜0.01).结论 DD-38可抑制HepG2细胞的增殖、迁移和克隆形成,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关.