目的:评价含十字形结构域蛋白3(JMJD3)在顺铂致急性肾损伤小鼠肾纤维化中的作用。方法:健康C57BL/6雄性小鼠48只，8~10周龄，体重20~30 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(CON组)、对照+ JMJD3抑制剂组(CON-A组)、顺铂组(CIS组)和顺铂+ JMJD3抑制剂组(CIS-A组)。CIS组和CIS-A组分别于第1和14天时腹腔注射顺铂15 mg/kg，制备急性肾损伤小鼠肾纤维化模型；第4天时分别腹腔注射JMJD3抑制剂GSKJ4 10 mg/kg和等容量PBS，间隔3 d注射1次，共注射6次。CON组和CON-A组分别在相应时点腹腔注射等容量PBS和GSKJ4 10 mg/kg。每组取6只小鼠，于第1次注射顺铂后第3天，采集眼眶血检测血清Cr和BUN的浓度，然后处死取肾组织，行HE和PAS染色，光镜下进行观察并行肾损伤评分。第1次注射顺铂后第28天处死6只小鼠，取肾组织，行天狼星红和Masson染色，测定肾纤维化面积；采用免疫荧光法测定纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平，免疫组化法行F4/80 +细胞和CD3 +细胞计数，RT-PCR法检测IL-6、TNF-α、趋化因子CXC配体16(CXCL16)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA表达水平。 结果:与CON组比较，CIS组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分升高，肾纤维化面积增加，肾组织纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA表达上调，CD3 +细胞和F4/80 +细胞计数升高，IL-6、CXCL16、TNF-α、MCP-1的mRNA表达上调( P<0.05) ，CON-A组上述各指标比较差异无统计学意义( P>0.05)；与CON-A组比较，CIS-A组BUN、Cr浓度和肾小管评分升高，肾纤维化面积增加，肾组织纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA表达上调，CD3 +细胞和F4/80 +细胞计数升高，IL-6、CXCL16、TNF-α、MCP-1的mRNA表达上调( P<0.05) ；与CIS组比较，CIS-A组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分降低，肾纤维化面积减少，肾组织纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA表达下调，CD3 +细胞和F4/80 +细胞计数降低，IL-6、CXCL16、TNF-α、MCP-1的mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:JMJD3参与了急性肾损伤小鼠肾纤维化的过程，其机制可能与促进炎症反应有关。

目的:探讨miR-26a介导磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)信号通路对脑缺血大鼠血管生成的影响。方法:将100只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、miR-NC组和miR-26a组。miR-NC组和miR-26a组分别侧脑室注射5 μl miR-26a模拟物阴性质控品和miR-26a模拟物，假手术组和模型组注射等量生理盐水。采用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞模型，假手术组只插线不结扎。各组大鼠各取5只腹腔注射5-溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)，1次/d，连续7 d。将体外培养并转染的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)分为对照组、氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)组、miR-NC组和miR-26a组。双荧光素酶实验验证miR-26a对第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10, PTEN)的调控作用。应用Longa评分检测大鼠神经功能损伤。氯化三苯四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色法测定脑梗死体积。分别使用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)染色法、膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法和小管形成实验测定BMECs增殖、凋亡和血管生成。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测缺血脑组织及BMECs miR-26a表达。免疫荧光双标记法[BrdU/von Willebrand因子(von Willebrand factor, vWF)]检测大鼠血管内皮细胞增殖。蛋白质印迹分析检测缺血脑组织血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)、PTEN、PI3K、AKT表达。结果:生物信息学及双荧光素酶实验验证了miR-26a对PTEN的靶向调控。与假手术组比较，模型组和miR-NC组缺血脑组织miR-26a、VEGF、bFGF、Ang-2、PI3K、AKT表达和BrdU +/vWF +细胞数量增加，而PTEN表达降低( P均<0.05)；与模型组比较，miR-26a组各项指标效果更加显著( P均<0.05)。与对照组比较，OGD组和miR-NC组BMECs增殖和血管生成能力显著增强，细胞凋亡显著减少( P均<0.05)；与OGD组比较，miR-26a组各项指标效果更加显著( P均<0.05)。 结论:miR-26a能靶向抑制PTEN表达，通过激活PI3K/AKT信号通路上调血管生成相关因子(VEGF、bFGF和Ang-2)，促进脑梗死大鼠血管内皮细胞增殖和血管生成。

目的:评价组蛋白去甲基化酶(JMJD3)在小鼠药物相关性急性肾损伤(AKI)中的作用。方法:雄性C57BL/6小鼠24只，8~10周龄，体重20~30 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：对照组(C组)、AKI组、JMJD3抑制剂GSKJ4对照组(GSKJ4组)和GSKJ4-AKI组。腹腔注射叶酸250 mg/kg制备药物性相关AKI模型。GSKJ4-AKI组于AKI建模前1 h、GSKJ4组于相应时点，腹腔注射GSKJ4 20 mg/kg。AKI建模后72 h时，取血液标本，测定血清BUN和Cr浓度；随后处死小鼠，取肾组织，并采用HE与PAS染色法，检测肾组织病理学形态，进行肾小管损伤评分；采用TUNEL法检测肾组织凋亡细胞数，蛋白免疫印迹法检测JMJD3、Bax和cleaved caspase-3的表达，免疫组织化学法检测JMJD3、髓过氧化物酶(MPO)、F4/80、CD3的阳性细胞数及cleaved caspase-3、Bax表达，RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的mRNA表达。 结果:与C组比较，AKI组血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分升高，肾组织JMJD3、MPO、F4/80和CD3的阳性细胞数增多，凋亡细胞数增多，Bax、cleaved caspase-3、JMJD3、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA和MCP-1 mRNA表达上调( P<0.05)，GSKJ4组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与AKI组比较，GSKJ4-AKI组血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分降低，肾组织JMJD3、MPO、F4/80和CD3的阳性细胞数减少，凋亡细胞数减少，Bax、cleaved caspase-3、JMJD3、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA和MCP-1 mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:小鼠药物相关性AKI的发生机制可能与JMJD3表达上调，进而诱导细胞凋亡及炎症反应有关。

骨髓增生异常综合征(MDS)是一类具有临床和遗传学异质性的骨髓衰竭性疾病.表观遗传学改变是指基因表达发生克隆性的可遗传改变,但是不伴有核苷酸序列的改变,主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA调节.近年,实验室及临床研究结果均表明,表观遗传学改变在MDS的发生、发展中发挥至关重要的作用,并且对其治疗创新及进展发挥关键作用.笔者拟就DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA调节等表观遗传学改变在MDS发病及治疗中的研究进展进行综述.

目的 探讨槲皮素对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导下人脑血管内皮细胞(HBMECs)损伤的保护作用及其作用机制.方法 采用ADMA(30μmol/L,作用24 h)诱导建立HBMECs损伤模型.实验分为对照组(不加任何干预因素)、ADMA组、ADMA+槲皮素处理组(加入终浓度分别为0.1、1、10、100μmol/L的槲皮素预处理2 h后再加入终浓度为30μmol/L的ADMA作用24 h)、100μmol/L槲皮素处理组(100μmol/l的槲皮素预处理2 h后换常规培养液)、10μmol/l槲皮素处理组(10μmol/L的槲皮素预处理2 h后换常规培养液)、茴香霉素(ANISO)/P79350+ADMA+槲皮素处理组[加入终浓度为10μmol/L的槲皮素预处理2 h后再加入终浓度为30μmol/L的ADMA作用24 h,实验结束前1 h加入10μmol/L的ANISO或50μmol/L的P79350]以及ANISO/P79350处理组(常规培养液培养,实验结束前1 h加入10μmol/L的NAISO或50μmol/L的P79350),每组6个样本.不同浓度槲皮素预处理2 h后,噻唑蓝法测定细胞活性,酶联免疫吸附试验法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧、丙二醛、脑源性神经营养因子(BDNF)水平,Western blotting分析Bax、Bcl-2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p38、磷酸化p38(p-p38)表达水平,逆转录-聚合酶链式反应检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达,caspase-3活性试剂盒检测caspase-3活性,应用JNK激动剂ANISO和p38激动剂P79350观察JNK/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在槲皮素介导的细胞损伤保护中的作用.结果 与对照组比较,ADMA组HBMECs活性(52±8)明显降低,LDH水平(356±28)显著升高,BDNF浓度(51±8)明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);与ADMA组比较,ADMA+10μmol/L槲皮素处理组和ADMA+100μmol/L槲皮素处理组HBMECs细胞活性显著改善(分别为80±5、86±7),LDH水平明显下调(分别为162±20、141±17),BDNF浓度明显增加(分别为82±5、94±6),差异均有统计学意义(均P<0.05).应用10μmol/L的槲皮素处理进行后续实验,结果显示,与ADMA组比较,ADMA+槲皮素处理组Bcl-2 mRNA、eNOS mRNA和SOD水平均明显升高(分别为0.75±0.10、0.81±0.07、81±10),Bax表达水平和caspase-3活性、活性氧、丙二醛水平均明显减低(分别为1.63±0.12、1.85±0.16、169±16、159±13),差异均有统计学意义(均P<0.05).进一步机制分析表明,与对照组比较,ADMA组可显著提高HBMECs中JNK和p38的磷酸化水平(p-JNK/JNK和p-p38/p38分别为3.46±0.32、3.66±0.31);与ADMA组比较,ADMA+槲皮素处理组有效抑制了ADMA诱导下HBMECs的JNK和p38磷酸化水平(p-JNK/JNK和p-p38/p38分别为2.60±0.19、2.72±0.20),差异均有统计学意义(均P<0.05);与ADMA+槲皮素处理组比较,ANISO+ADMA+槲皮素处理组p-JNK/JNK(4.06±0.30)和P79350+ADMA+槲皮素处理组p-p38/p38(3.84±0.32)明显增高,两组细胞活性和BDNF水平明显降低,LDH水平明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 槲皮素可缓解ADMA诱导的HBMECs损伤,其机制可能与抑制JNK/p38 MAPK信号通路有关.

组蛋白甲基化修饰是当前表观遗传学研究的重要内容之一.组蛋白的甲基化由组蛋白甲基化酶和组蛋白去甲基化酶动态调节.组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A[lysine (K) demethylase 5A,KDM5A]是组蛋白去甲基化酶家族的重要成员,它可以特异性去除组蛋白H3第4位赖氨酸上的二甲基和三甲基(H3K4me2/3),从而介导基因沉默,并调节细胞功能.KDM5A可以直接或间接地保持肿瘤细胞干性,抑制细胞代谢和分化,促进肿瘤细胞增殖、转移和耐药,因此其与多种肿瘤的发生、发展及耐药密切相关,有望成为肿瘤诊断和治疗的新的潜在靶点.

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂apicidin对脑胶质瘤U87细胞的影响及对OCT-4基因表达的调控作用.方法 用不同浓度apicidin处理胶质瘤U87细胞,以二甲基亚砜代替apicidin作为阴性对照.应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测apicidin处理后U87细胞增殖能力,于共聚焦荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,应用流式细胞仪检测细胞周期变化,应用反转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测U87细胞OCT-4的mRNA和蛋白相对于GAPDH的表达量.结果 MTT结果显示,apicidin呈时间-剂量依赖性抑制胶质瘤U87细胞增殖,48 h半数抑制浓度为(1.74±0.13)μmol/L.阴性对照及0.2、0.5、1.0μmol/L apicidin作用48 h后U87细胞中S期细胞比例分别为(32.68±0.49)％、(33.73±0.76)％、(42.92±0.56)％、(56.95±0.53)％(P<0.05),而G1、G2期细胞比例减少.共聚焦荧光显微镜下观察,1.0μmol/L apicidin处理48 h后U87细胞出现核固缩等凋亡样改变.与阴性对照组相比,1.0μmol/L apicidin作用48 h后,U87细胞OCT-4 mRNA和蛋白的相对表达量均降低(mRNA:72.44±0.00比56.66±0.23,蛋白:86.59±0.19比56.04±0.15,均P<0.01).结论 apicidin可以抑制脑胶质瘤U87细胞生长,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡,其机制可能与apicidin抑制OCT-4基因的表达有关.

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂与PD98059缀合物的体内、外抗皮肤鳞状细胞癌(SCC)作用.方法 采用HDAC试剂盒测试缀合物SAHA-PD98059对HDAC活性的抑制作用;采用5-[3-(羧基甲氧基)苯基]-3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑内盐(MTS)试剂盒测试缀合物SAHA-PD98059对A431、HSC-5、Colo16和SCC-124种SCC细胞增殖的抑制作用.构建A431皮下荷瘤鼠模型,并将其随机分为SAHA-PD98059组、SAHA组、PD98059组和空白对照组,连续灌胃给药18 d,每隔2 d记录小鼠体质量,测量肿瘤体积.通过对小鼠主要器官行HE染色评价缀合物SAHA-PD98059的生物安全性.结果 缀合物SAHA-PD98059抑制HDAC活性的半抑制浓度(IC50)为(142.9±1.2)nmol/L.缀合物SAHA-PD98059在HDAC活性口袋中能够与氨基酸残基H142、G151、T312形成氢键,而母体化合物SAHA可与氨基酸残基H142、H143、T312形成氢键.与母体化合物PD98059及SAHA相比,缀合物SAHA-PD98059对皮肤鳞癌细胞A431、HSC-5、Colo16和SCC-12的抗增殖活性均更强,其中缀合物SAHA-PD98059对A431细胞增殖的抑制作用最强[IC50=(1.7±0.2)μmol/L].缀合物SAHA-PD98059对人正常皮肤细胞TE353.sk基本无毒性.体内研究表明,缀合物SAHA-PD98059的半数致死量(LD50)为647.5 mg/kg,并可显著抑制A431肿瘤的增长.HE染色发现,缀合物SAHA-PD98059对主要器官无明显毒性.结论 缀合物SAHA-PD98059用于治疗SCC安全有效,其效果强于单一使用SAHA或PD98059.

目的 探讨17β-羟基类固醇脱氢酶3(17β-HSD3)抑制剂的抗前列腺癌活性、药代动力学及其急性毒性.方法 取对数生长期人雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞,设置空白对照组(Con组)、姜黄素组(Cur组,Cur 150μmol/L)、雄激素受体(AR)抑制剂组(AR inhibitor组,AR抑制剂5μmol/L)和姜黄素类似物H7组(H7组,H7150μmol/L),分组处理后采用xCELLience RTCA DP细胞分析仪检测各组细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞中Caspase-3、AR蛋白表达.C57小鼠32只,采用随机数字表法分成4组(n=8),分别为空白对照组和姜黄素类似物H7高、中、低剂量组.用1％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶解H7(100、50、25 mg/kg),每天灌胃1次,空白对照组小鼠灌胃1％CMC-Na,观察小鼠有无死亡及异常现象,14 d后取材,苏木素-伊红(HE)染色,观察肝脏和肾脏的病理形态学变化.SD大鼠10只,用1％CMC-Na溶解H7(5 mg/kg)灌胃后,高效液相色谱仪(HPLC)检测血药浓度,分析药代动力学参数.另取SD雄性大鼠10只,H7(5 mg/kg)灌胃30 min后,HPLC检测大鼠脑、肝、脾、肺、小肠、胃、肾、心和睾丸中药物浓度,考察药物组织分布.结果 与Con组比较,Cur组、AR inhibitor组和H7组LNCaP细胞的细胞指数(CI值)显著下降,凋亡率明显升高,Caspase-3蛋白表达水平明显升高,而AR蛋白表达水平降低(P<0.05);H7组凋亡率较Cur组和AR inhibitor组明显升高(P<0.05).连续灌胃H714 d,小鼠未出现活动增加、流涎、抽搐、昏迷等异常现象.与Con组相比,小鼠肝脏和肾脏未见明显的病理形态学变化.药代动力学参数结果显示,测出血药浓度-时间曲线下面积(AUC)为(557.31±36.12)mg/(L·h);峰浓度(Cmax)为(36.92±1.29)mg/L;最高峰时间(tmax)为2 h;消除半衰期(t1/2)为(22.13±1.74)h.H7在小肠中的浓度约是脑组织中的5000倍.结论 H7作为17β-HSD3抑制剂,具有明显抗激素依赖性前列腺癌的活性和良好的药代动力学参数,无明显的急性毒性作用,以胃肠吸收为主,具有进一步研究开发前景.

目的:探讨1例少见的肺转移性副神经节瘤(PGL)的诊治过程,分析PGL的病因、临床表现、影像学表现以及治疗方案等,为临床PGL的诊治提供参考.方法:收集1例肺转移性PGL患者的临床、影像学和病理资料等,分析PGL的临床表现、影像学表现及病理特征,结合近年来PGL相关文献,总结PGL规范的诊治方案.结果:患者,女性,57岁,因"体检发现左肺结节10 d"入院,患者10 d前在外院体检胸部CT提示左肺上叶及下叶类圆形软组织密度影,后至本院进一步诊治,患者2018年曾在外院行颈静脉球体瘤手术治疗,入院后完善PET-CT检查提示左肺下叶结节恶性可能,左肺上叶结节代谢不高,不除外恶性病变,胸心外科会诊后予以全麻下行"胸腔镜下左肺上叶、左肺下叶结节楔形切除术+淋巴结采样术",术中快速病理提示富于血窦的肿瘤.术后病理免疫组织化学检查,膜糖蛋白56(CD56)(+)、嗜铬素A(CgA)(+)、Ki67(+约2％)、PanCK(-)、孕激素(PR)(-)、酸性钙结合蛋白(S-100)(散在+)、突触素(Syn)(+),甲状腺转录因子1(TTF1)(-)和细胞程序性死亡配体1[PD-L1(22C3)](约40％的肿瘤细胞胞浆弱阳性).结合临床病史及免疫组织化学检查结果符合PGL.手术标本应用高通量测序法(NGS)检测425个基因的外显子和融合相关内含子等,结果未提示有肿瘤特有突变及胚系突变,仅检测到药物代谢相关酶类多态性基因突变,包括胞苷脱氨酶基因(CDA)、二氢嘧啶脱氨酶基因(DPYD)、核苷酸切除修复交叉互补基因(ERCC2)、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)、亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)和X射线修复交叉互补基因1(XRCC1);未检测到高度微卫星不稳定(MSI-H);肿瘤突变负荷(TMB)为0个突变/100万个碱基(Mb).患者术后恢复尚可,目前考虑至外院进一步化疗.结论:PGL是少见的恶性神经内分泌肿瘤,临床表现不典型,患者常以转移病灶的表现就诊,并发肺部转移者相对少见,临床容易误诊,确诊有赖于病理检查.