目的:明确本地区碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药特点和分子流行病学特征，为临床抗感染治疗提供依据。方法:收集宁波大学附属第一医院和宁波市第二医院碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌92株。用VITEK2 Compact全自动微生物分析仪进行药敏试验；全基因组测序技术确定其荚膜血清型、多位点序列分型(MLST)与耐药基因等分子特征；使用PlasmidFinder确定菌株的质粒复制子类型；Parsnp进行细菌核心基因组系统发育分析。结果:CRKP主要分离自病情较为危重的老年患者，标本以痰液居多(51.09%，47/92)，其次是尿液(13.04%，12/92)和血液(8.70%，8/92)，感染高发科室为重症监护病房(33.70%，31/92)。所有菌株对常用抗菌药物耐药率高，但对多黏菌素B耐药率较低(6.52%，6/92)。耐药基因以 blaKPC-2为主(78.26%，72/92)，荚膜血清型以KL64为主(48.91%，45/92)，MLST分型以ST11为主(54.35%，50/92)。ST11-KL64是优势克隆型，检出率高达46.74%(43/92)，且携带多个质粒，以IncR和IncFⅡ型为主。 结论:本地区CRKP对临床常用抗菌药物高度耐药，主要携带 blaKPC-2耐药基因，克隆型ST11-KL64在本地区广泛克隆传播，两家医院流行的菌株存在相似性，应加强监控。

目的:筛查住院患者肠道定植耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales，CRE)的检出率，并分析CRE菌株分子的流行病学特征。方法:本研究为前瞻性研究。采集2019年3月至12月安徽医科大学第二附属医院外科重症监护病房、内科重症监护病房和血液内科(移植病房)213例住院患者的粪便、直肠拭子或肛周拭子标本，应用含碳青霉烯类药物的麦康凯平板法筛查CRE菌株，并进行细菌鉴定、药物敏感试验，选取重点菌株进行全基因组测序，并分析其多位点序列分型、荚膜血清型、耐药基因、毒力基因和质粒携带特征。以菌株KPN FJ723042序列作为参考，对所有菌株序列进行单核苷酸多态性分析。结果:共检出CRE菌株23株，检出率为10.8%(23/213)；其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP)15株(65.2%)，大肠埃希菌和阴沟肠杆菌各3株(13.0%)，弗氏柠檬酸杆菌2株(8.7%)。单核苷酸多态性聚类分析表明，15株CRKP有2组主要克隆型，均在外科重症监护病房内流行。15株CRKP均属于ST11-K64型，均携带β-内酰胺类耐药基因肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶2型(β-lactamase Klebsiella pneumoniae carbapenemase 2， blaKPC-2 )基因；12株CRKP携带毒力基因黏液表型调控基因2型(regulator of mucoid phenotype gene A2, rmpA2)、 iucABCD。 结论:住院患者中肠道定植CRE的检出率较高，以ST11-K64型CRKP为主，CRKP菌株兼具多重耐药性和毒力特征，有医院传播风险。

目的:了解乌鲁木齐儿童医院分离的肺炎链球菌分离株的血清型分布和耐药状况，评估使用13价肺炎链球菌结合疫苗(PCV13)预防感染和控制耐药流行的潜在价值。方法:复苏2018年1－12月乌鲁木齐儿童医院检验科分离的肺炎链球菌。采用荚膜肿胀试验检测血清型，评估PCV13覆盖率。采用E-test法检测分离株对青霉素、阿莫西林、头孢噻肟、头孢曲松的最低抑菌浓度(MIC)，并采用梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统检测美罗培南等其他9种抗菌药物的敏感性。结果:共成功复苏225株肺炎链球菌。常见血清型为19F(32.9%)、23F(12.0%)、19A(10.7%)、6B(10.2%)和6A型(8.0%)。PCV13覆盖率为80.4%。<2岁和≥2岁患儿分离株之间，以及汉族和少数民族患儿分离株，血清型分布未见明显不同，PCV13覆盖率也相似。分离株对口服青霉素的中介率和耐药率分别为57.8%和31.7%。以脑膜炎界值判断，胃肠外青霉素耐药率高达89.4%，对头孢曲松和头孢噻肟不敏感率达47.5%和64.6%，以中介为主。菌株对红霉素、复方磺胺甲 唑、四环素耐药率高，分别达98.1%、67.6%和89.6%，对阿莫西林、美罗培南、左氧氟沙星和莫西沙星敏感率均超过90%。PCV13型菌株对青霉素的耐药性较非PCV13型菌株更强。 结论:乌鲁木齐地区儿科肺炎链球菌分离株以19F、23F、19A、6B和6A型常见，PCV13型覆盖率约80%，汉族和少数民族儿童分离株血清型分布未见明显差异。菌株对红霉素普遍耐药，临床考虑肺炎链球菌脑膜炎时，应注意菌株对青霉素等耐药率高。推广使用PCV13可有效预防儿童肺炎链球菌感染和耐药菌株的播散。

目的:观察间歇低氧对肠道细菌移位及肠系膜淋巴结（MLN）结构的影响，探索其机制。方法:将成年雄性Wister大鼠24只按照随机数字表法分为实验组及对照组各12只，实验期间两组以相同条件饲养，实验组模拟睡眠呼吸暂停给予间歇低氧处理。实验开始后第2、4周的最后1天，使用20%乌拉坦按照0.7 ml/100 g剂量麻醉大鼠，剖腹后无菌方式取MLN及距回盲瓣2 cm以上的小肠组织，HE染色观察组织微观结构，MLN无菌研磨液进行病原学培养，以ELISA法检测研磨液超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化物（MDA）及活性氧（ROS），评估氧化应激反应程度；采集中心静脉血液检测血清二胺氧化酶（DAO），评估肠道黏膜损伤程度。结果:实验组大鼠MLN及其对应小肠肠管均有损伤，随着间歇低氧时间的延长，光镜下可见：MLN生发中心数目显著减少，体积减小，皮质髓质融合加重，面积比下降，肠管组织表现出肠上皮受损严重，通透性增高，黏膜水肿，肠绒毛高度、厚度、面积及隐窝深度明显下降等。第4周实验组大鼠MLN厌氧状态下培养出产气荚膜梭菌，证实出现肠道细菌移位。第2周对照组大鼠MLN组织的ROS、SOD及MDA含量分别为（177±9）U/ml、（5.20±0.43）U/ml及（0.95±0.22）nmol/ml，第4周对照组为（176±9）U/ml、（5.19±0.43）U/ml及（0.93±0.16）nmol/ml，组间比较差异无统计学意义（ P>0.05）；第4周实验组大鼠MLN组织ROS［（284±13）U/ml］、MDA［（2.30±0.34）nmol/ml］明显高于第2周［（217±21）U/ml、（1.17±0.24）nmol/ml］，差异有统计学意义（ P<0.05），但SOD变化情况不明显［（5.98±0.43）、（5.99±0.43）U/ml， P>0.05］；与对照组相比，实验组大鼠MLN组织ROS、SOD及MDA含量均较同周期对照组大鼠有明显升高（ P<0.05）。实验组大鼠在第2、4周血清DAO水平均高于对照组（ P<0.05）。提示实验组大鼠肠道黏膜损伤程度较对照组严重。 结论:低氧暴露可加重大鼠机体氧化应激反应的程度，随着间歇低氧时间逐渐延长，大鼠肠道黏膜出现严重损伤，肠道菌群移位加重对肠系膜淋巴结结构损伤，氧化应激进一步加重，进而影响肠道自身免疫功能的完整。

目的:构建高毒力肺炎克雷伯菌NTHU-K2044菌株 hfq基因缺失株(△ hfq)，并通过表型试验分析 hfq基因对高毒力肺炎克雷伯菌生长特性、环境适应能力和毒力等生物学特性的影响。 方法:利用同源重组技术对NTUH-K2044菌株进行 hfq基因敲除；通过表型试验，比较高毒力肺炎克雷伯菌野生株和△ hfq突变株在细菌生长速度、抗环境胁迫能力、生物膜形成、荚膜形成中性粒细胞杀菌活性和大蜡螟幼虫感染致死率等方面的差异性。 结果:成功构建高毒力肺炎克雷伯菌NTUH-K2044 △ hfq缺失株，表型试验表明△ hfq缺失株的生长速度显著减慢，菌落变小和超黏性下降；在pH9、pH5.5、0.7 mmol/L SDS、5% NaCl、0.1%H 2O 2环境和50℃高温等环境胁迫条件下，△ hfq缺失株生长受到显著抑制；在毒力方面，△ hfq缺失株生物膜形成能力下降，荚膜形成能力下降且荚膜合成基因 magA和 rmpA表达量明显下降，中性粒细胞杀菌试验存活率下降，大蜡螟幼虫致死能力显著降低。 结论:Hfq蛋白作为RNA伴侣分子能够参与转录后调控进而对高毒力肺炎克雷伯菌生理、环境适应性及毒力致病性具有重要的调控作用。这为寻找治疗和控制高毒力高耐药肺炎克雷伯菌新靶标提供了基础。

报告1例因进行局部肌内注射导致腰背部及臀部气性坏疽的临床病例。男，43岁，因腰痛在当地私人诊所就诊，给予腰背部及臀部局部肌内注射封闭治疗，肌内注射5~6 h后腰痛加重，疼痛视觉模拟评分（visual analogue scale，VAS）为5分，伴发热；1天后，腰痛VAS评分8分，出现酱油色尿，伴发热。根据实验室检查以及临床表现出现多器官功能衰竭，影像学（CT）提示腰背部棘突旁及右侧臀部软组织出现大面积气体，伴椎旁及臀部肌肉坏死征象，初步诊断：腰背部及臀部感染，高度怀疑气性坏疽。根据病情进展，入院后急诊行腰背部及右臀部扩创术，术中细菌快速涂片报告革兰氏阳性粗大杆菌，厌氧菌培养提示产气荚膜梭菌，需氧菌培养结果未见任何细菌生长。根据病史、影像资料、术中判断、术后培养结果，临床诊断：气性坏疽。气性坏疽是临床特殊感染疾病，其发病率低，早期诊断困难，疾病进展快，死亡率高。肌内注射导致该疾病的发生，需要强调规范化无菌操作的重要性。

目的:探讨肺炎克雷伯菌 wza基因缺失对细菌荚膜形成能力及对噬菌体敏感性的影响。 方法:以野生型肺炎克雷伯菌株W14为背景，利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建Δ wza基因缺失菌株。在溶菌肉汤（LB）培养基固体平板观察菌落形态并在液体LB培养基中测定细菌的生长曲线。通过透射电镜，糖醛酸含量测定的方法检测 wza基因缺失对肺炎克雷伯菌株荚膜形成的影响。并通过观察噬菌斑明确 wza基因缺失是否影响菌株W14对噬菌体phiW14的敏感性。使用 t检验比较菌株W14与Δ wza 缺失菌株荚膜多糖的糖醛酸含量差异情况。 结果:通过PCR技术明确Δ wza基因缺失菌株构建成功。LB固体平板上观察到Δ wza基因缺失菌株的菌落较小，而生长曲线未观察到 wza基因缺失对菌株生长速度的影响。透射电镜结果显示， wza基因缺失后菌株荚膜多糖缺失。糖醛酸含量检测表明Δ wza基因缺失菌株的糖醛酸含量为（45.963±2.795）μg/ml，远低于野生型菌株W14的（138.800±5.201）μg/ml， t=27.233， P<0.001。通过观察噬菌斑发现 wza基因缺失后，菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。 结论:基因 wza的缺失损害了细菌的荚膜形成能力并使得菌株失去了对噬菌体phiW14的敏感性。

目的:明确临床常规检测为肺炎链球菌，但荚膜肿胀试验阴性的分离菌株中是否存在其他草绿色链球菌，分析其抗生素敏感性，为临床选药提供参考。方法:以105株临床分离但荚膜肿胀试验阴性的肺炎链球菌为研究对象，采用草绿色链球菌的多位点序列分析(MLSA)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行菌种鉴定；采用微量肉汤稀释法检测14种抗菌药物的敏感性。结果:105株细菌经MLSA确认24株为假肺炎链球菌，其余81株为肺炎链球菌。MALDI-TOF-MS将6株假肺炎链球菌鉴定为肺炎链球菌，3株鉴定为缓症/口腔链球菌；6株肺炎链球菌被鉴定为假肺炎链球菌。全部菌株均对万古霉素、左氧氟沙星和莫西沙星敏感，肺炎链球菌与假肺炎链球菌对头孢呋辛(28.4%和58.4%)、氯霉素(39.5%和4.2%)、红霉素(77.8%和95.8%)和阿奇霉素(75.3%和95.8%)等抗生素不敏感率有明显不同。结论:临床常规检测可能将部分假肺炎链球菌鉴定为肺炎链球菌，质谱分析也不能确保正确鉴定；荚膜肿胀试验阴性的肺炎链球菌分离株耐药性情况存在差异，鉴定失误可能影响病原菌及其耐药性的评估。

患者男，38岁，因头痛、发热1周，加重3 d就诊。患者起病前1周着凉后出现头痛、头晕，无恶心呕吐，自觉发热（当时未测体温），当地医院治疗3 d，症状稍好转。3 d前头痛加重，呈搏动性；外院脑脊液涂片隐球菌阳性，HIV抗体待查转我院。入院后第7天，患者右前臂伸侧、右手掌、右胸背逐渐出现红斑、簇状小水疱，伴阵发性、烧灼样痛，无痒感。既往身体健康，否认水痘病史。否认皮损部位外伤史及鸽粪接触史。2014年有静脉吸毒史，曾与他人共用注射器；曾发生无保护措施的男男性行为。否认药物、食物过敏史。家族史无特殊。体检：一般状况可，慢性病容，神清，检查配合。肺部和神经系统未见明显异常。余体格检查未发现阳性体征。皮肤科检查：右前臂伸侧、右手掌、右胸背部可见红斑、斑丘疹、丘疱疹，簇状小水疱，疱液多混浊，部分皮损中间干涸、结痂（图1）。初诊为带状疱疹，予伐昔洛韦、膦甲酸钠等治疗2周，皮损仍增加，疼痛无改善。实验室及辅助检查：中性粒细胞比例0.889（参考值：0.5 ~ 0.7，下同）；CD4 + T细胞计数4个/μl（500 ~ 1 600个/μl），辅助性与抑制性T细胞比值0.02（1.4 ~ 2.0），HIV抗体阳性，HIV核酸定量1.38 × 10 2/ml；乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、人巨细胞病毒阴性；血隐球菌荚膜抗原阳性；血、脑脊液、肺泡灌洗液真菌培养发现新型隐球菌。脑脊液检查：白细胞计数64 × 10 6/L，脑脊液墨汁染色：隐球菌阳性。肺泡灌洗液人巨细胞病毒检测：阳性；骨髓细菌、真菌培养：阴性。肺部CT示双肺上叶感染；头颅CT未见明显异常。右前臂伸侧皮损组织病理检查：表皮轻度角化过度及角化不全，鳞状上皮局部增生，少许淋巴细胞、浆细胞和中性粒细胞浸润（图2）。皮肤浅表过碘酸希夫染色及六胺银染色均见散在隐球菌菌体。

1例70岁女性患者因终末期肾病、肾性贫血、导管相关性感染，给予低分子肝素钙、左卡尼汀、重组人促红素、头孢他啶。因疑似导管局部细菌荚膜形成、长期留置导管堵塞，同时应用头孢他啶+尿激酶+低分子肝素钙泵入导管解除堵塞。用药第4天，患者出现全身轻度瘙痒，第5天左上肢及下腹部皮肤出现张力性血疱，暗红色，直径0.01~2 cm，形状近似半球状或不规则状，血疱边界清楚，触摸有轻微疼痛感；Nikolsky征阴性。诊断为大疱性出血性皮肤病（BHD），考虑由尿激酶与低分子肝素钙联用引起。当天停用2药，予无肝素血液透析。皮肤症状逐渐缓解，停药9 d后，血疱均干涸、结痂。2周后随访，全部血痂均已自行脱落。