产免疫分枝杆菌是一种罕见的非结核分枝杆菌，属于快生长型分枝杆菌，可引起皮肤感染、角膜炎、导管相关感染、慢性肺炎和脓毒症等，其感染多发生在美洲，国内诊治经验很少。本文报道1例由产免疫分枝杆菌引起的全身多发皮肤软组织感染病例，经培养、质谱鉴定和宏基因组二代测序检测明确病原体，最终参考抗菌药物敏感性试验结果，通过联合抗分枝杆菌治疗取得了良好疗效。面对罕见感染病例，临床微生物实验室采用全面的诊断方法和应用新技术对于精准诊治具有重要价值。

目的:从敏感和多重耐药的肺炎克雷伯菌中筛选出hvKP表型株，对比探讨其临床感染特征的分布和同源性。方法:回顾性收集2014至2018年中山大学附属第三医院临床感染标本所分离的敏感和多重耐药的肺炎克雷伯菌共158株，通过黏液拉丝试验（string test，ST）初筛hvKP感染情况，共筛选到65例患者，男性51例，女性14例，平均年龄56岁。构成比分析其临床感染相关信息，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）对筛选出的hvKP进行种属鉴定及建立新数据库，利用分析软件对所有符合实验条件的菌株进行生物树聚类分析和主成分分析，获得蛋白水平的同源性。结果:根据ST试验，158株肺炎克雷伯菌株中，65例患者共筛选到hvKP 65株，其中62株为全敏感菌株，3株为多重耐药菌株，感染者入院主要疾病诊断集中在肝胆疾病、脑病及肝脓肿；人群基础病主要为糖尿病与高血压。聚类分析将hvKP在距离水平线550处分为3群；主成分分析发现部分菌株具有较近亲缘关系，其中占比最大的Kc群主要与肝胆管疾病有关。Ka群主要与手术后感染有关。结论:hvKP具有高侵袭力，临床感染表现多样，感染病患多为免疫力低下老年患者。MALDI-TOF MS质谱快速同源性分析对hvKP感染快速筛查具有重要临床意义。

目的:对2018-2020年昆明地区腹泻患者中艰难梭菌感染特征进行分析，为后续监测和防治提供数据支持。方法:收集2018-2020年云南省4家哨点医院腹泻患者粪便标本共388份，使用实时荧光定量PCR方法进行艰难梭菌粪便毒素基因检测，对结果阳性的粪便标本进行菌株的分离，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定菌株。提取分离菌株的基因组DNA进行多位点序列分型（MLST）。分析毒素阳性和菌株分离阳性与患者的临床特征以及艰难梭菌阳性与其他病原共感染的情况。结果:388份粪便标本中，艰难梭菌内参 tpi基因阳性标本47份，总阳性率为12.11%。其中，非产毒艰难梭菌4份（8.51%），产毒艰难梭菌43份（91.49%）。47份阳性标本分离得到18株艰难梭菌，阳性标本的分离率为38.30%。其中 tcdA、 tcdB、 tcdC、 tcdR和 tcdE基因均为阳性的菌株14株。18株艰难梭菌的二元毒素均为阴性。所有分离菌株的MLST结果共形成10种序列型（ST），其中ST37型5株（27.78%）；ST129、ST3、ST54和ST2型各2株；ST35、ST532、ST48、ST27和ST39型各1株。粪便毒素基因阳性（ tcdB+）结果与患者年龄、就诊前发热差异有统计学意义；菌株分离阳性仅与患者年龄差异有统计学意义。同时，部分腹泻患者存在艰难梭菌与其他腹泻病毒共感染的情况。 结论:昆明地区腹泻患者中艰难梭菌的感染多为产毒株，MLST结果具有高度的离散特征，应加强开展艰难梭菌的监测和预防。

目的:分析产气克雷伯菌引起新生儿感染的临床分布特征及质谱同源性，为防控新生儿感染提供依据。方法:回顾性收集2021年4月至2023年4月苏州市立医院新生儿科收集的58株非重复的产气克雷伯菌分离物。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)技术进行蛋白水平的同源性分析建库。使用MALDI Biotyper 3.1生成主成分分析(principal component analysis，PCA)和主谱图(main spectrum profile，MSP)树状图，以获得蛋白水平的同源性。结果:51例感染患儿中以重症监护室、早产患儿及低体重感染患儿为主，分别占84.31%(43/51)、86.27%(44/51)和84.31%(43/51)。重症监护室内早产患儿气管插管患儿42例，占97.67%，低出生体重患儿气管插管患儿32例，占74.44%。51例产气克雷伯菌感染患儿绝大多数住院时间较长，住院时长> 60 d的占25.49%。58株产气克雷伯菌临床标本主要从血、导管头、痰液、胃液、眼分泌物和尿液中分离出。6例患儿在不同样本类型中同时检出产气克雷伯菌。MSP聚类分析显示，58株产气克雷伯菌分为3个群，其中KA群14株，KB群6株，KC 38株。KC群主要与重症监护室有关，多伴有气管插管和血流感染。KB群主要与早产低体重患儿相关，而KA群主要与普通病房患儿相关。结论:产气克雷伯菌具有高侵袭力，MALDI-TOF MS质谱快速同源性分析对产气克雷伯菌感染快速筛查具有一定的临床意义。

目的:建立念珠菌血症小鼠模型，寻找辅助诊断念珠菌血症的差异多肽峰。方法:SPF级ICR雄性小鼠170只，体质量27~30 g，根据随机数字表法将小鼠完全随机分为白色念珠菌感染组（ n=80）、近平滑念珠菌感染组（ n=80）和对照组（ n=10），通过尾静脉注射的方法建立念珠菌血症小鼠模型。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测模型小鼠血清多肽谱，选择差异较为明显的多肽峰建立诊断模型。 结果:比较白色念珠菌感染组和对照组共得到65个差异多肽峰，组合质荷比（m/z）为1 100.4、1 581.0、3 808.0这3个差异多肽峰建立诊断模型，敏感度为95.24%（40/42），特异度为90.63%（29/32），准确率为93.24%（69/74），ROC曲线下面积为0.972（95 %CI：0.941~1.000）；比较近平滑念珠菌感染组和对照组共得到73个差异多肽峰，组合质荷比（m/z）为1 433.2、1 148.5、4 093.5、4 522.2、8 140.9、8 234.6这6个差异多肽峰建立诊断模型，敏感度为95%（38/40），特异度为81.25%（26/32），准确率为88.89%（64/72），ROC曲线下面积为0.953（95 %CI：0.903~1.000）。比较白色念珠菌感染组和近平滑念珠菌感染组，共得到78个差异多肽峰，组合质荷比（m/z）为2 736.9、8 091.5、8 153.7这3个差异多肽峰建立诊断模型，区分白色念珠菌感染和近平滑念珠菌感染的准确率为98.78%（81/82）。 结论:通过念珠菌血症小鼠模型筛选的差异多肽峰有利于寻找辅助念珠菌血症诊断的血清标志物，为临床早期诊断及合理用药提供了依据。

目的:明确临床常规检测为肺炎链球菌，但荚膜肿胀试验阴性的分离菌株中是否存在其他草绿色链球菌，分析其抗生素敏感性，为临床选药提供参考。方法:以105株临床分离但荚膜肿胀试验阴性的肺炎链球菌为研究对象，采用草绿色链球菌的多位点序列分析(MLSA)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行菌种鉴定；采用微量肉汤稀释法检测14种抗菌药物的敏感性。结果:105株细菌经MLSA确认24株为假肺炎链球菌，其余81株为肺炎链球菌。MALDI-TOF-MS将6株假肺炎链球菌鉴定为肺炎链球菌，3株鉴定为缓症/口腔链球菌；6株肺炎链球菌被鉴定为假肺炎链球菌。全部菌株均对万古霉素、左氧氟沙星和莫西沙星敏感，肺炎链球菌与假肺炎链球菌对头孢呋辛(28.4%和58.4%)、氯霉素(39.5%和4.2%)、红霉素(77.8%和95.8%)和阿奇霉素(75.3%和95.8%)等抗生素不敏感率有明显不同。结论:临床常规检测可能将部分假肺炎链球菌鉴定为肺炎链球菌，质谱分析也不能确保正确鉴定；荚膜肿胀试验阴性的肺炎链球菌分离株耐药性情况存在差异，鉴定失误可能影响病原菌及其耐药性的评估。

目的:研究2016与2019年成人致泻性大肠埃希菌（DEC）食源性腹泻临床特征与耐药性，了解北京市强化食品卫生安全措施前后DEC流行病学变迁。方法:分别收集2016和2019年就诊于北京同仁医院肠道门诊食源性成人腹泻患者1 926例和1 482例，共计3 408例。患者信息录入“肠道预警系统”，便标本分离培养，菌落行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）鉴定。大肠埃希菌采用多重荧光定量PCR对5种致病型进行分型。药物敏感性试验根据2019美国临床与实验室标准化协会标准判读。分类资料采用χ2检验或者Fisher精确检验进行统计分析。结果:3 408份标本共检出DEC 581株，肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）占53.36%（310/581），未检出肠出血性大肠埃希菌（EHEC）。2016年DEC检出率为14.54%（280/1 926），肠聚集性大肠埃希菌（EAEC）占DEC检出率的18.21%（51/280），ETEC占71.79%（173/280）。2019年DEC检出率为20.31%（301/1 482），EAEC占DEC检出率的41.23%（116/301），ETEC占48.93%（137/301）。与2016年比较，2019年EAEC检出率增高（χ2=29.26， P<0.001），其次为肠致病性大肠埃希菌（χ2=9.37， P=0.002），而ETEC检出率下降（χ2=15.43， P<0.001）。与其他致病型相比，EAEC易引起恶心（χ2=32.72， P<0.001），感染肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）的患者便标本易观察到红细胞（χ2=16.44， P=0.001）和白细胞（χ2=26.82， P<0.001）。EIEC对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦及庆大霉素耐药率分别为80.95%（17/21）、66.67%（14/21）和57.14%（12/21）。2019年出现3株耐碳青霉烯类抗菌药物的EAEC，其中2株厄他培南及亚胺培南均耐药，1株仅厄他培南耐药。全基因测序显示存在多种耐药机制，以耐药结节性细胞分化家族外排泵、青霉素结合位点突变及产新德里金属β内酰胺酶5（NDM-5）为主。 结论:成人食源性腹泻患者DEC检出率高，以ETEC为主。与2016年相比，2019年ETEC下降，EAEC检出率显著升高，并于2019年分离到耐碳青霉烯类抗菌药物的致泻性大肠埃希菌菌株，其生物学特征及流行病学变迁应引起临床重视。

目的:研究多重耐药霍氏肠杆菌霍夫曼亚种临床分离株C37携带 blaNDM-1基因质粒的遗传特征，并对目前可公开获得的66个霍氏肠杆菌霍夫曼亚种的核心基因组进行系统发育分析，以研究霍氏肠杆菌霍夫曼亚种的全球流行情况。 方法:收集2014年8月至2021年8月中山大学附属第一医院分离的耐碳青霉烯阴沟肠杆菌复合物（CRECC）。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）和16S rRNA Sanger测序对C37进行菌种鉴定。使用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性试验。采用聚合酶链反应（PCR）检测C37菌株携带的β内酰胺酶耐药基因和质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）基因。使用接合试验确认C37菌株抗性基因的接合转移性。对C37菌株进行全基因组测序，提取霍氏肠杆菌霍夫曼亚种的核心基因组，对目前可公开获得的66个霍氏肠杆菌霍夫曼亚种进行系统发育分析。结果:霍氏肠杆菌霍夫曼亚种C37菌株对三代头孢、碳青霉烯类、氨基糖苷类及喹诺酮类抗菌药物耐药，携带 blaACT-5、 blaNDM-1、 qnrA1、 aac（ 6′） -Ib-cr、 oqxAB、 fosA、 dfrA15等多种抗性基因及IncX3、IncX4、IncFIB和IncFII质粒。多位点序列分型（MLST）分析显示其属于阴沟肠杆菌复合体（ECC）ST78型。系统发育分析显示ST78型霍氏肠杆菌霍夫曼亚种与碳青霉烯耐药基因传播密切相关。 结论:ST78型霍氏肠杆菌霍夫曼亚种与碳青霉烯耐药基因传播密切相关，是传播碳青霉烯耐药基因的高风险克隆，需密切监测其流行情况。

目的:探讨引起血流感染铜绿假单胞菌（ Pseudomonas aeruginosa， P. aeruginosa）的耐药性、毒力基因携带情况以及多位点序列分型（MLST）的型别。 方法:回顾性收集2014年11月至2021年12月山东第一医科大学第一附属医院引起血流感染的铜绿假单胞菌94株。使用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱仪对铜绿假单胞菌进行菌种鉴定，使用Vitek 2 Compact 全自动细菌药敏分析系统对铜绿假单胞菌进行抗菌药物敏感性实验。应用聚合酶链式反应（PCR）方法对18种常见毒力基因的携带情况进行检测。应用MLST对分离菌株进行分型。采用卡方检验对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌（carbapenem resistant pseudomonas aeruginosa，CRPA）和碳青霉烯类抗生素敏感的铜绿假单胞菌（carbapenem susceptible pseudomonas aeruginosa，CSPA）菌株的耐药及毒力基因的携带情况进行比较。 结果:在94株铜绿假单胞菌中，有19株（20.2%）为多重耐药（MDR）菌株，其中有17株为碳青霉烯类抗菌药物耐药株，2株为碳青霉烯类抗菌药物敏感株。所有菌株均包含10种以上的毒力基因，除 exoU基因外，其余基因的检出率均在83%以上。本研究共发现66个ST型，包括59个已知ST型和7个新ST型。其中ST244（11株，11.7%）和ST270（7株，7.4%）为优势型别，两种型别的菌株具有相同的毒力基因分布，但对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率有所差异，其中ST244型别的菌株中有54.5%（6株）的为CRPA，但7株ST270型别的菌株则均为CSPA。 结论:引起血流感染铜绿假单胞菌的耐药性处于较低水平，但存在一定数量的碳青霉烯类抗菌药物耐药菌株和多重耐药菌株。这些菌株具有较高毒力基因携带率和分子多态性特征，在临床上应予以关注。

目的:验证基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术的B组链球菌（Group B streptococcus，GBS）在线血清型预测模型的分型效能，为临床GBS菌血清型快速分型提供参考。 方法:选取2015至2018年全国多中心新生儿侵袭感染分离GBS菌237株，均已经应用血清凝集试验结合PCR法确认血清型和多重PCR法多位点序列分型（MLST），包括Ⅰa型18株、Ⅰb型70株、Ⅲ型140株、Ⅴ型8株、Ⅵ型1株。运用乙醇灭活-甲酸（乙腈）提取法提取蛋白，用微生物质谱仪采集蛋白指纹图谱，将图谱以m/z和峰强度数据格式输入GBSTyper，以传统血清凝集法血清型为金标准，采用召回率、精确率、 F值（精确率和召回率的调和平均值）来评价GBSTyper分型效果。 结果:GBSTyper对120株（50.63%）GBS菌血清型分型正确，各血清型召回率从高到低依次为Ⅲ型（71.43%）、Ⅴ型（37.50%）、Ⅰb型（21.43%）、Ⅰa型（11.11%），Ⅲ型精确率最高（86.96%），血清型分型精确率仅为3.57%~46.88%，Ⅲ型 F值最高（78.43%），Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ型等 F值仅为6.52%~29.41%。 结论:GBSTyper血清型快速分型模型对Ⅲ型血清型菌株分型有效性较高，而对Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ型分型有效性很低。该模型能快速识别高危Ⅲ型GBS，对于围产期新生儿GBS感染预防及患儿的临床管理有重要指导意义。