该研究选定紫丁香结香部位乙醇提取物,通过硅胶柱色谱、薄层板制备以及制备液相色谱等进行系统分离与纯化,并结合紫外分析(UV)、红外分析(IR)、核磁共振(NMR)、高分辨质谱(HR-ESI-MS)、X射线衍射等波谱技术及文献理化数据比较等方法进行结构鉴定,共鉴定出 10 个化合物,分别为紫丁香倍半萜D(1)、(-)-T-muurolol(2)、紫丁香倍半萜E～G(3～5)、14-noreudesma-3-hydroxy-3-en-2,9-dione(6)、1-isopropyl-2,7-dimethylnaphthalene(7)、异水菖蒲二醇(8)、α-二去氢菖蒲烯(9)、cadin-4-en-1-β-ol(10).其中化合物 1 为未见报道的倍半萜类新化合物,其余 9 个化合物均为首次从紫丁香中分离得到.化合物 1 对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7 细胞炎性损伤模型具有显著的保护作用.

沉香Aquilariae Lignum Resinatum是沉香属植物含树脂的木材,广泛应用于传统医学、香料、宗教等领域.沉香的形成与沉香属植物应对伤害防御诱导反应有关,其中内生真菌在沉香形成过程中发挥着重要的作用.综述了沉香属植物内生真菌的多样性,概括了内生真菌在促进沉香属植物次生代谢物积累、提高抗生物胁迫能力等功能,并提出沉香内生真菌研究与开发存在的问题和对策,为沉香增产技术开发提供参考.

目的:利用冰冻组织切片和荧光成像技术对接菌法沉香不同显微特征进行比较,分析挥发油分布的规律,了解白木香结香过程中显微组织的变化.方法:显微观察接菌法沉香层、内含层及白木层(未结香)结构特征,测量不同结香部位内涵韧皮部和木射线的显微参数,检测不同结香部位的荧光平均光密度,并进行统计学分析.结果:接菌法沉香的沉香层、内含层与白木层相比,在晶体、树脂及挥发油分布存在明显差异,不同部位显微参数差异显著.沉香层和内含层的木间韧皮部、射线细胞及部分导管中存在黄棕色油状物,相同部位在荧光显微镜下存在绿色自发荧光.结论:冰冻切片结合荧光成像可准确显示沉香挥发油定位,不同结香部位显微结构及其显微参数存在差异,为深入研究白木香结香的生理过程及机制夯实了重要的实验基础.

以12年生土沉香人工林为研究对象,通过设置钻孔、火烧孔和黄绿墨耳菌(Melanotus flavolivens)溶液诱导土沉香结香试验,比较分析各处理的土沉香结香木质部变色范围,淀粉和可溶性糖含量、醇溶性提取物、沉香四醇、挥发性香气成分方面的差异,探讨不同结香方法对土沉香木质部芳香物质形成的影响,为创新和优化土沉香结香技术提供理论参考.结果表明,(1)黄绿墨耳菌溶液处理的土沉香木质部(沉香材部分)变色范围最大,纵向变色距离最长达120.02 cm,横向变色距离最宽达3.84 cm;钻孔和火烧孔处理,纵向变色距离均超过110 cm,但横向变色距离最宽仅为0.58 cm和1.06 cm.(2)3种结香处理的土沉香木质部淀粉含量均显著低于CK(P＜0.05),降幅范围在24.82％～55.25％;黄绿墨耳菌溶液和火烧孔处理的土沉香木质部可溶性糖含量均显著高于CK(P＜0.05),钻孔与CK差异不显著(P＞0.05).(3)钻孔、火烧孔和黄绿墨耳菌溶液处理土沉香的醇溶性提取物含量分别达到11.84％、13.26％和21.08％,均显著高于CK(P＜0.05);沉香四醇含量分别达到0.18％、0.26％和0.42％,对照处理未检测出沉香四醇.(4)钻孔、火烧孔和黄绿墨耳菌溶液处理的土沉香芳香物质中分别鉴定出29种、33种和36种,主要成分包括2-(2-苯乙基)色酮及其衍生物、沉香螺醇、愈创木醇、香树烯、苄基丙酮、二氢卡拉酮、枯苏醇、α-檀香醇和壬醛.说明黄绿墨耳菌溶液处理土沉香木质部变色范围最大,淀粉含量消耗和可溶性糖增幅最大,醇溶性提取物、沉香四醇含量及其芳香物质积累的效果最优.

目的:考察不同来源的44批次沉香药材含松香酸类物质情况,为沉香药材正确使用提供依据.方法:建立超高效液相色谱法,并结合乙酸铜化学显色反应和薄层色谱法对沉香药材中松香酸类物质进行鉴别分析.结果:44批次不同来源的沉香样品中,药材市场所售10批次沉香药材中松香酸类物质检出率达40％;其余34批次沉香药材(包括19批次通体结香技术产沉香,5批次火烙法产沉香和10批次野生沉香)均未检出松香酸类物质.结论:采用通体结香技术等方法产的沉香药材和野生沉香不含松香酸类物质,但药材市场所售沉香药材有掺入松香酸类物质的现象.

目的:考察KM小鼠灌胃给药接受过量通体结香技术产沉香的提取物后可能出现的急性毒性反应.方法:采用“最大给药量法”进行试验灌胃给予小鼠通体结香技术产沉香的提取物,观察记录小鼠的中毒症状及死亡情况,并于14 d后剖检小鼠观察其主要脏器.结果:以40 g ·kg-1剂量给药后,小鼠均未产生明显的毒性症状,其体重与阴性对照组小鼠体重比较无显著差异(P＞0.05),且大体剖检生命脏器未见异常.结论:通体结香技术产沉香的提取物对KM小鼠无明显毒性.可认为成人以临床常用剂量服用通体结香技术产沉香药材安全可行.

对通体结香技术诱导白木香形成的沉香化学成分及其抗炎活性进行研究.采用液相和色谱技术进行分离纯化,从沉香中得到10个2-(2-苯乙基)色酮类化合物,通过理化常数和波谱分析分别鉴定为:2-(2-phenylethyl) chromone(1)、6-methoxy-2-(2-phenylethyl)chromone(2)、5-hydroxy-6-methoxy-2-(2-phenylethyl) chromone(3)、6,7-dimethoxy-2-[2-(4'-methoxyphenyl) ethyl] chromone(4)、7-Hydroxy-6-methoxy-2-[2-(4'-methoxyphenyl)ethyl] chromone (5)、2-[2-(4'-methoxyphenyl)ethyl] chromone(6)、6,7-dimethoxy-2-[2-(3'-hydroxy-4'-methoxyphenyl) ethyl] chromone(7)、6,7-dimethoxy-2-(2-phenyl ethyl)chromone (8)、6,8-dihydroxy-2-[2-(3'-hydroxy-4'-methoxyphenyl) ethyl] chromone(9)、6-hydroxy-2-[2-(4'-methoxyphenyl)ethyl] chromone(10).结合脂多糖介导RAW264.7细胞模型评价其抗炎活性.其中,化合物2～4和10具有显著的抗炎活性,IC50值分别为5.31±0.75,5.57 ±0.62,0.57 ±0.02,3.78±0.64βμM.化合物5为首次从白木香产沉香中分离得到,所有化合物均为首次从通体结香技术所产沉香中所得,为其品质评价提供了基础依据.

S-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosylmethionine synthetase,SAMS)是植物代谢过程中的一个关键酶,在植物响应生物与非生物胁迫中发挥着重要作用.本研究根据白木香转录组高通量测序结果结合RACE、RT-PCR技术从白木香愈伤组织中首次克隆得到1个SAMS基因,命名为AsSAMS1,并对其进行生物学信息分析、原核表达与纯化、组织特异性分析及非生物胁迫和激素诱导表达分析.白木香AsSAMS1基因的开放阅读框(ORF)长1183 bp,编码393个氨基酸,其蛋白分子质量是43.13 kDa.生物学信息分析表明AsSAMS1蛋白含有3个SAMS的特征序列,系统进化树显示AsSAMS1蛋白与野大豆(Glycine soja) SAMS蛋白具有较高的同源性.构建原核表达载体pET28a-AsSAMS1并在大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中成功表达AsSAMS1重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱纯化得到可溶性AsSAMS1重组蛋白.实时荧光定量PCR检测结果表明AsSAMS1基因在茎中表达最高,叶和茎尖次之,在根中表达最低.盐、干旱、低温以及重金属胁迫均能够提高AsSAMS1的表达量和其产物S-腺苷甲硫氨酸的含量;茉莉酸甲酯、水杨酸、脱落酸、赤霉素也能够诱导白木香愈伤组织中AsSAMS1基因表达.本研究可以为进一步研究S-腺苷甲硫氨酸合成酶在白木香结香机制和植物防御反应中的作用奠定基础.

目的 为研究评价通体结香技术产沉香(通体香)的慢性毒性.方法 本研究参考《中国药典》沉香用法用量,对SD大鼠连续90 d分别饲喂药用剂量组(1 262.4、631.2和157.8 mg·kg-1)和食用剂量组(150、105和45 mg· kg-1)的通体香提取物,并连续记录大鼠的体重增加量和食物利用率,90 d后,处死大鼠,采集大鼠血液和尿液,检测血液指标、血清生化指标和尿液指标,并对大鼠重要内脏器官进行解剖称重和病理学组织检查.结果 以通体香提取物连续饲喂SD大鼠90 d,大鼠体重增重、食物利用率、血液学指标、血清生化指标、尿液指标和内脏器官重量与对照组相比无显著性差异(P＞0.05),组织学检查结果表明,雄、雌大鼠实验组与对照组均有部分病变,但药用剂量组和食用剂量组高剂量组的病变例数与对照组相比均无显著性差异,说明病变的发生与通体香提取物无关.结论 通体结香技术所产沉香对实验动物安全无慢期毒性,即作为药用和食用均无慢性毒性.

目的 考察通体结香技术产沉香(通体香)提取物用于保健食品研发剂量下(生药量0.60 g·d-1),对SD大鼠怀孕期间的致畸和致突变毒性.方法 试验通过对妊娠6～15 d的大鼠进行45、105、150 mg·kg-1通体香提取物灌胃,观察并记录孕鼠活动情况,测量并记录孕鼠体重,妊娠20 d后处死大鼠,解剖并记录观察胎仔存活率、吸收数等,并对胎仔进行解剖观察,记录胎仔畸形类型和数量.结果 通体香提取物45、105、150 mg·kg-1·bw-13个剂量组喂养孕鼠,对孕鼠体重无影响,对胎仔黄体数、着床数、活胎数、吸收胎数和死胎数等于对照组相比均无显著性差异(P＞0.05),对胎仔的畸变类型和数量均无影响,与对照相比无显著性差异(P＞0.05).结论 通体香提取物在实验剂量下对孕期大鼠及胎仔无致畸和致突变毒性.