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羟基红花黄色素A对人肾小管上皮细胞冷缺氧/复氧凋亡的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)预处理组对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)冷缺氧/复氧(冷H/R)损伤导致的细胞凋亡的影响。方法:HK2细胞株消化传代后采用计算机随机方法分为sham组(对照组)、冷缺氧/复氧组(冷H/R组,细胞冷缺氧4 h,复氧4 h)、HSYA预处理组(HSYA各亚组,缺氧前0.5 h给予不同剂量的HSYA,余同冷H/R组)。采用CCK-8法测细胞存活率;采用细胞爬片免疫组化法和免疫印迹法检测各组HK-2细胞的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达情况。结果:(1)与冷H/R组相比,HSYA不同剂量可不同程度提高细胞存活率,但仅HSYA25 μmol/L组效果最显著(74.000±5.500与59.000±3.800, P<0.05)。(2)免疫细胞化学半定量评分:与冷H/R组相比,HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Caspase-3的表达明显降低[0(0,1)与8(6,8), Z=2.041, P<0.05和3.400±0.548与7.800±1.095, t=11.000, P<0.01];Bcl-2蛋白的表达明显升高(6.800±1.095与1.400±0.548, t=10.590、 P<0.01);Bcl-2/Bax比值明显升高。(3)免疫印迹法检测蛋白:与冷H/R组相比,HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Cleaved-Caspase-3和Pro-Caspase-3蛋白水平明显减少(0.707± 0.012与0.968±0.117,0.480±0.009与0.735±0.005,0.992±0.008与1.197±0.005, P均<0.01);Bcl-2蛋白表达水平显著增加,Bcl-2/Bax比值明显增高(0.410±0.009与0.273±0.008,0.582±0.016与0.282±0.080, P均<0.01)。实验结果与免疫细胞化学结果相一致。 结论:HSYA可有效减少冷缺氧/复氧后HK2细胞的损伤。
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编辑人员丨1天前
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毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响:与NF-κB/NLRP3信号通路的关系
编辑人员丨1天前
目的:评价毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响及其与NF-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的关系。方法:动物实验:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠18只,6~8周龄,体质量24~28 g,采用随机数字表法分为3组( n=6):对照组(C组)、心脏移植冷缺血再灌注组(I/R组)和心脏移植冷缺血再灌注+毛蕊花苷组(I/R+VB组)。采用cuff套管法颈部异位心脏移植的方法制备小鼠心脏移植冷缺血再灌注损伤模型,C组供体心脏取下后立即移植至受体,I/R组供体心脏于4 ℃保存液保存8 h后移植至受体,I/R+VB组供体与受体小鼠分别于术前3 d时腹腔注射毛蕊花苷20 mg/kg。于再灌注24 h时进行移植物跳动评分后取移植心脏心肌组织,采用ELISA法检测MDA含量和SOD活性;取部分供体心肌组织,观察病理学结果;采用Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1的表达;RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA的表达。细胞实验:建立大鼠心肌细胞H9c2冷缺氧复氧模型,采用随机数字表法将细胞分为3组( n=24):对照组(C组)、冷缺氧复氧组(H/R组)、冷缺氧复氧+毛蕊花苷组(H/R+VB组)。采用10 ℃缺氧18 h,37 ℃复氧24 h的方法建立冷缺氧复氧模型,检测细胞活力和LDH活性;Western blot法检测NF-κB和NLRP3的表达;免疫荧光染色法检测p-NF-κB的表达。 结果:动物实验:与C组比较,I/R组MDA含量升高,移植物跳动评分和SOD活性降低,p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1表达、IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA表达上调( P<0.05),心肌组织病理学损伤加重;与I/R组比较,I/R+VB组MDA含量降低,移植物跳动评分和SOD活性升高,p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1表达、IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA表达下调( P<0.05),心肌组织病理学损伤减轻。细胞实验:与C组比较,H/R组细胞活力降低,LDH活性升高,p-NF-κB、NLRP3、ACS、caspase-1和p-NF-κB表达上调( P<0.05);与H/R组比较,H/R+VB组细胞活力升高,LDH活性降低,p-NF-κB、NLRP3、ACS、caspase-1和p-NF-κB表达下调( P<0.05)。 结论:毛蕊花苷可减轻小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路激活有关。
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编辑人员丨1天前
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心搏骤停后良好预后的多模态预测
编辑人员丨1天前
心搏骤停后缺氧缺血性脑损伤与高发病率和病死率相关,停止生命维持治疗(WLST)是其常见的死亡原因。因此,准确预测心搏骤停预后至关重要。欧洲重症监护医学会的指南提出了一种结合临床检查、电生理学、脑成像和血清生物标志物的多模态预测方法,主要侧重于预测不良结果。目前仍需要准确识别具有良好康复机会的患者,以减少不确定性,安抚患者家属,并有效分配资源。已经确定的心搏骤停后缺氧缺血性脑损伤预后良好的几个指标,包括连续反应性脑电图(EEG)无癫痫样特征、脑核磁共振成像(MRI)无弥散加权变化、格拉斯哥昏迷评分运动反应≥3分和正常水平的血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)。然而,这些指标往往是单独描述的,它们在预测有利结果方面的敏感度有限。预测良好预后相关指标需要高敏感度,以确保不会遗漏具有良好康复潜力的患者。现有的心搏骤停预后指南主要集中在预测不良结果,较少关注预测良好预后。最近有瑞士学者进行了一项队列研究,分析了成人心搏骤停后昏迷患者的治疗数据,旨在确定心搏骤停后良好预后的预测因子,并结合这些预测因子开发一个多模态模型。研究纳入患者均接受36 ℃的目标温度管理(TTM)24 h,并使用外部冷却设备和特定的药物干预。在TTM期间和常温条件下进行EEG记录,评估脑电背景、连续性、反应性癫痫样活动;收集神经系统检查、体感诱发电位(SSEP)、血清NSE水平和瞳孔测量数据。研究人员还收集了与心搏骤停相关的各种变量,包括自主循环的初始节律和恢复时间。分析每个变量对有利结果的预测性能,使用多变量有序逻辑回归、受试者工作特征曲线和交叉验证,创建一个多模态预后评分。评分包括6种模式,每种模式1分:早期EEG(12~36 h)非高度恶性;早期EEG背景反应性;晚期EEG(36~72 h)背景反应性和连续性;48 h内血清NSE峰值≤41 μg/L;72 h内全面反应性量表(FOUR评分)得分≥5分。评分≥4分(满分6分)的敏感度为97.5%,特异度为77.5%。评分的结果与外部队列验证结果一致。该研究提出了一种多模态评分,该评分结合了心搏骤停后72 h内可用的临床、EEG和生物标志物。评分显示在识别早期昏迷心搏骤停幸存者方面的高性能,这些幸存者将在3个月内达到功能独立。该评分的表现得到了外部验证,支持其在心搏骤停患者早期良好预后预测中的有效性。
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编辑人员丨1天前
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钙卫蛋白在新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠组织中的表达及意义
编辑人员丨1天前
目的:探讨钙卫蛋白与新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)的相关性。方法:24只新生SD大鼠(SPF级)随机分为对照组(6只)及NEC组(18只)。对照组与母鼠同笼,自由摄食,NEC组采用人工喂养+缺氧复氧+冷刺激+脂多糖灌胃连续3 d建立NEC模型。NEC组新生儿大鼠分别在造模后24、48、72 h各取6只空腹处死,取回盲部肠管进行组织病理学评分,并应用酶联免疫吸附法检测新生大鼠肠组织钙卫蛋白表达水平,实时定量聚合酶链反应法检测肠组织钙卫蛋白mRNA水平。结果:NEC组新生大鼠体重增长缓慢,造模后24、48、72 h肠组织病理学评分分别为2(2,3)、3(2,3)、4(3,4)分,均≥2分,NEC造模成功。NEC组造模后24、48、72 h新生大鼠肠组织钙卫蛋白表达水平分别为2.97(2.92,3.02)、3.64(3.36,3.93)、3.13(2.90,3.37)pg/ml,均高于对照组的1.89(1.85,1.92)pg/ml,并于造模后48 h达高峰,差异有统计学意义( P<0.05)。NEC组造模后24、48、72 h新生大鼠肠组织钙卫蛋白mRNA水平分别为2.57(2.52,2.68)、3.23(3.18,3.36)、2.37(2.30,2.40),均高于对照组的1.00(0.99,1.02),并于造模后48 h达高峰,差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:钙卫蛋白在新生大鼠NEC模型中表达明显升高,并且随着病程进展表现为先升高后下降的趋势。检测钙卫蛋白可能有助于新生儿NEC的诊断及病程判断。
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编辑人员丨1天前
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热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜组织缺氧诱导因子1α和糖酵解活性的影响
编辑人员丨2024/7/13
目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜炎性反应及滑膜组织、血清中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、糖酵解活性的影响,探讨热补针法治疗RA的机制.方法:选取32只新西兰兔随机分为正常组、模型组、抑制剂组、热补针法组,每组8只.采用卵蛋白联合弗氏完全佐剂诱导及低温冷冻法复制RA寒证模型.抑制剂组给予2-甲氧基雌二醇腹腔注射,热补针法组给予热补针法针刺"足三里",留针30 min.各组干预均1次/d,连续14 d.观察家兔膝关节周径及痛阈变化;采用ELISA法检测家兔血清中还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、己糖激酶(HK2)、6-磷酸果糖激酶2/2,6-二磷酸果糖激酶3(PFKFB3)含量;HE染色法观察家兔膝关节滑膜组织形态变化;免疫组织化学法检测家兔膝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-17的阳性表达;分光光度法检测家兔膝关节滑膜组织中乳酸含量;Western blot法检测膝关节滑膜组织中HIF-1α、乳酸脱氢酶(LDHA)、丙酮酸激酶 2(PKM2)蛋白表达水平.结果:干预后,与正常组比较,模型组家兔膝关节周径增大(P<0.05),痛阈值降低(P<0.05),可见滑膜细胞中度增生及炎性浸润,滑膜组织病理评分升高(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17阳性表达及乳酸含量均升高(P<0.05),血清NADPH、HK2、PFKFB3含量及滑膜组织中HIF-1α、LDHA、PKM2蛋白表达水平均升高(P<0.05).与模型组比较,抑制剂组及热补针法组家兔膝关节周径缩小(P<0.05),痛阈值升高(P<0.05),滑膜增生、炎性细胞浸润均改善,滑膜组织病理评分降低(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17阳性表达及乳酸含量均下降(P<0.05),血清NADPH、HK2、PFKFB3含量及滑膜组织中HIF-1α、LDHA、PKM2蛋白表达水平均下降(P<0.05).与抑制剂组比较,热补针法组家兔滑膜组织病理评分升高(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17阳性表达及乳酸含量均升高(P<0.05),血清NADPH、HK2、PFKFB3含量及滑膜组织中HIF-1α、LDHA、PKM2蛋白表达水平均升高(P<0.05).结论:热补针法干预RA寒证家兔可提高痛阈,减小膝关节周径,抑制炎性反应,其作用机制与下调HIF-1α及糖酵解活性相关.
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编辑人员丨2024/7/13
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ALCAM沉默对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的保护作用研究
编辑人员丨2024/2/3
目的 研究活化白细胞黏附分子(ALCAM)沉默对坏死性小肠结肠炎(NEC)的影响及作用机制.方法 24只雄性SD新生大鼠按随机数字表法分为对照组、NEC组、沉默阴性对照组、ALCAM沉默组,每组6只.NEC组、沉默阴性对照组和ALCAM沉默组分别尾静脉注射0.9%氯化钠注射液、阴性对照腺相关病毒载体和ALCAM腺相关病毒载体;除对照组外,各组大鼠采用人工饲养与缺氧复氧和冷刺激诱导以建立NEC模型.采用ELISA法测定各组大鼠血清IL-1β、IL-6水平,采用HE染色法、Tunel染色法评价肠组织病理改变和细胞凋亡情况,采用免疫组化染色法测定CD166表达率,采用qRT-PCR法检测肠组织ALCAM的mRNA相对表达量,采用Western blot法检测肠组织ALCAM、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)相对表达量.结果 与对照组比较,NEC组大鼠血清IL-1β、IL-6水平升高,肠组织病理改变明显,细胞凋亡率增加,CD166表达率升高,肠组织ALCAM的mRNA及蛋白、β-catenin蛋白相对表达量升高,E-cadherin蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(均P<0.01).与沉默阴性对照组比较,ALCAM沉默组新生大鼠血清IL-1β、IL-6水平降低,肠组织病理改变减轻,细胞凋亡减少,CD166表达率降低,肠组织ALCAM的mRNA及E-cadherin蛋白相对表达量升高,ALCAM蛋白、β-catenin蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 沉默ALCAM表达对NEC新生大鼠的肠道损伤具有保护作用,其作用与炎性细胞因子水平下降、E-cadherin/β-catenin通路蛋白表达改变有关.
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编辑人员丨2024/2/3
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白芍苷对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠道菌群及屏障功能的影响
编辑人员丨2024/1/13
目的 基于肠道菌群变化研究白芍苷治疗坏死性小肠结肠炎新生大鼠效果.方法 60只新生雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只:空白对照组,模型组,阳性药组,白芍苷低剂量组,白芍苷中剂量组,白芍苷高剂量组.除空白对照组外,其余组均采用人工喂养+缺氧、复氧、冷刺激+脂多糖灌胃构建坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型.空白对照组和模型组每天灌胃生理盐水0.1 mL;阳性药组每天灌胃利福昔明50 mg/kg;白芍苷低剂量组每天灌胃3 mg/kg;白芍苷中剂量组每天灌胃6mg/kg;白芍苷高剂量组每天灌胃9 mg/kg.每组连续灌胃两周.Elisa检测血清Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α,免疫组织化学检测结肠组织ZO-1、Occludin表达,RT-PCR检测结肠组织ZO-1、Occludin mRNA,应用16S r DNA技术研究各组大鼠肠道菌群丰度和多样性的变化情况,以及观察在白芍苷干预后肠道菌群的恢复情况.结果 与空白对照组相比,模型组ZO-1、Occludin mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05),血清中Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α水平显著增加(P<0.05).与模型组相比,阳性药组、白芍苷低、中、高剂量组ZO-1、Occludin mRNA和蛋白水平显著上升(P<0.05),血清中Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α 水平显著下降(P<0.05),与空白对照组比,模型组 Lactobacillus、Alistipes、Bacteroides、Oscillibacter 丰度降低,Desulfovibrio、Akkermansia、Escherichia、Enterococcus 丰度升高;与模型组 比较,白芍苷组 Lactobacillus、Alistipes、Bacteroides 丰度升高,Desulfovibrio、Akkermansia、Parasutterella、Enterococcus 丰度相对降低.结论 白芍苷能够上调肠道菌群 Lactobacillus、Alistipes、Bacteroides丰度,下调Desulfovibrio、Akkermansia、Parasutterella、Enterococcus丰度,进而上调坏死性小肠结肠炎模型大鼠结肠组织ZO-1、Occludin表达、下调Zonulin释放量、IL-1β、TGF-β、TNF-α,从而达到治疗坏死性小肠结肠炎的效果.
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编辑人员丨2024/1/13
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腹腔镜下肾部分切除术联合改良肾动脉灌注技术治疗复杂性肾肿瘤的疗效分析
编辑人员丨2023/10/21
目的 探讨改良肾动脉低温灌注技术辅助腹腔镜肾部分切除术(LPN)治疗复杂性肾肿瘤的安全性、可行性及近期疗效.方法 选取蚌埠医学院第一附属医院泌尿外科于2021 年10月—2022年10月期间行LPN 治疗的50例复杂性肾肿瘤患者,其中行LPN联合改良肾动脉低温灌注作为研究组(20 例),未联合改良肾动脉低温灌注作为对照组(30例).比较2组手术相关指标、肾功能指标及并发症发生情况.对肿瘤旁肾脏正常组织切片进行HE染色,观察镜下组织缺血缺氧变化.结果 与对照组比较,研究组肾功能指标术后总GFR下降值、患侧GFR下降值低于对照组[(8.81±2.50)mL/min vs.(14.48±2.90)mL/min,(9.37±2.50)mL/min vs.(14.38± 1.80)mL/min,均P<0.05];研究组术中肾脏温度、术中出血量明显低于对照组[(21.18±2.34)℃vs.(32.48± 1.13)℃、(105.00±30.17)mL vs.(141.30±57.00)mL,均P<0.05];镜下组织HE 染色评分研究组低于对照组[(2.98±0.66)分vs.(4.07±0.66)分,P<0.05].2组冷灌注/肾动脉阻断时间、体温、手术时间、术后住院时间等比较差异无统计学意义(均P>0.05).结论 LPN 联合改良肾动脉灌注在治疗复杂性肾肿瘤中可以降低出血量,减轻炎症反应,保护肾功能.
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编辑人员丨2023/10/21
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布拉氏酵母菌对NEC新生鼠肠组织IL-10、TNF-α和iNOS表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨布拉氏酵母菌(SB)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生鼠肠组织炎症因子IL-10、TNF-a、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 64只新生鼠随机分为4组,每组16只,正常对照组(母鼠喂养并不给予任何干预)、人工喂养组(仅给予人工喂养)、NEC组(人工喂养+缺氧复氧冷刺激+脂多糖灌胃)、NEC+SB组(在NEC模型组基础上加SB干预,剂量为800mg·kg-1·d-1,灌胃1次/d,连用3d).HE染色、病理评分评估回盲部肠组织损伤程度;Western blot、RT-PCR法检测结肠组织IL-10、TNF-a、iNOS蛋白和mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,人工喂养组新生鼠回盲部肠组织病理评分略有升高,NEC组病理评分明显升高,而NEC+SB组病理评分较NEC组降低;人工喂养组和NEC组新生鼠结肠组织IL-10、TNF-α、iNOS蛋白和mRNA表达水平均升高,NEC+SB组IL-10、TNF-α、iNOS蛋白和mRNA表达水平较人工喂养组和NEC模型组均降低(均P<0.05).结论 SB或通过降低NEC新生鼠肠组织炎症因子IL-10、TNF-α和iNOS的表达水平,减轻肠组织损伤.
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编辑人员丨2023/8/6
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布拉氏酵母菌对NEC新生鼠肠组织中NOD1、RIP2和NF-κB表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨布拉氏酵母菌(SB)对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生小鼠肠组织中的NOD1、受体相互作用蛋白2(RIP2)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响及意义.方法 40只新生小鼠随机分为4组,每组10只,分为正常对照组(母乳喂养不予其他干预)、人工喂养组(仅予人工喂养)、NEC组(人工喂养+缺氧复氧冷刺激+脂多糖灌胃)及NEC+SB组在NEC组基础上加SB干预,800mg/kg·d,灌胃1次/d,连用3d.HE染色和病理评分来评估回盲部肠组织的损伤程度;Western blot和RT-qPCR技术分别检测结肠组织NOD1、RIP2和NF-κB的蛋白和mRNA表达水平.结果 人工喂养组新生鼠回盲部肠组织病理评分较正常对照组略微升高,NEC组病理评分较正常组显著升高,而NEC+SB组病理评分较NEC组显著下降;人工喂养组和NEC组新生鼠结肠组织中NOD1、RIP2和NF-κB的蛋白和mRNA水平较正常对照组均升高,NEC+SB组NOD1、RIP2和NF-κB蛋白和mRNA表达水平较人工喂养组和NEC组均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);使用Ad-NOD1(携带NOD1基因的腺病毒)过表达NOD1后,病理评分增加,NOD1、RIP2和NF-κB蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.01).结论 SB可能通过抑制NEC新生鼠肠组织中NOD1炎症信号通路相关因子(NOD1、RIP2和NF-κB)的表达水平,从而减轻NEC导致的肠组织损伤.
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编辑人员丨2023/8/6
