目的:制备地佐辛聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)微球并进行鉴定。方法:地佐辛PLGA微球制备：地佐辛120 mg、PLGA 0.1 g与其助溶添加剂泊洛沙姆0.1 g分散于四氢呋喃溶剂中，配置成有机相溶液；氯化钠、聚乙二醇溶解于注射用水中，形成内水相溶液和外水相溶液；机相溶液20 ml与内水相溶液20 ml混合，形成水相/油相初乳后，加入外水相溶液中，形成水相/油相/水相复乳，与冻干粉保护剂充分混合冷冻干燥，制成地佐辛PLGA微球。鉴定：清洁级健康雄性SD大鼠18只，10～12周龄，体质量220～260 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：对照组(C组)、地佐辛普通制剂组(D 1组)和地佐辛PLGA微球组(D 2组)，分别肌肉注射生理盐水、地佐辛注射液(药物剂量1 mg)及地佐辛PLGA微球注射液(药物剂量0.2 μg)0.2 ml。于给药后30 min(T 1)、1 h(T 2)、2 h(T 3)、3 h(T 4)、4 h(T 5)、5 h(T 6)、6 h(T 7)、7 h(T 8)和8 h(T 9)时测定血浆地佐辛浓度，于T 1～T 3、T 5和T 9时测定热缩足潜伏期；肌肉注射后第7天，取注射部位组织，HE染色后观察炎症反应情况。 结果:与C组比较，D 1组T 1～T 3时及D 2组T 1～T 3、T 5和T 9时热缩足潜伏期延长( P<0.05)；与D 1组比较，D 2组T 5、T 9时热缩足潜伏期延长，T 6～T 9时血浆地佐辛浓度升高( P<0.05)。与T 2时比较，D 1组T 4～T 9时血浆地佐辛浓度降低( P<0.05)，D 2组T 3～T 9时血浆地佐辛浓度差异无统计学意义( P>0.05)。肌肉注射后第7天，各组局部组织均未见炎症产生，病理学结果未见明显差异。 结论:本研究成功制备了地佐辛PLGA微球缓释剂型，对大鼠可维持平稳的血药浓度，有效延长药物作用时间，具有显著缓释作用。

目的:聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸水凝胶(PLGA-PEG-PLGA)装载血管内皮生长因子(VEGF)促进大鼠缺血下肢血管新生。方法:配制20%wt(wt)的PLGA-PEG-PLGA水凝胶溶液装载VEGF，酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测其体外的药物释放曲线。Wistar大鼠[雄性，上海斯莱克公司，5周龄，体重(200±20) g]左下肢股总、股浅动脉及隐动脉结扎并离断切除其动脉分支。建模成功的20只Wistar大鼠通过完全随机化分组分为Gel/VEGF组、Gel组、VEGF组、生理盐水的Control组，每组5只。术后第1天在缺血下肢腓肠肌分别肌注200 μl的Gel/VEGF、Gel、VEGF、生理盐水。用Moor LTD激光多普勒血流仪分别记录各分组0、1、3、7、10、14 d的大鼠双下肢血流灌注情况。实验结束后处死Wistar大鼠并取双侧下肢腓肠肌标本，进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫荧光分析。采用单因素方差分析。结果:载有VEGF的PLGA-PEG-PLGA水凝胶在体外释放VEGF达9 d左右。激光多普勒血流仪分析Gel/VEGF、Gel、VEGF、Control组在14 d后的血流灌注比为(87.61±4.30)%、(64.70±2.10)%、(66.92±2.70)%、(60.41±3.10)%，组间比较差异有统计学意义( F＝176.372， P<0.01)。 结论:PLGA-PEG-PLGA作为缓释材料装载VEGF对大鼠缺血下肢血流恢复有一定的促进作用。

目的 制备叶酸修饰的克班宁聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(folic acid modified crebanine polyethylene glycol-polylactic acid hydroxyacetic acid copolymer nanoparticles,FA-Cre@PEG-PLGA NPs),并考察其体外释放及抗肿瘤活性.方法 以克班宁为模型药,用PEG-PLGA共聚物、叶酸等为材料,通过超声乳化-溶剂挥发法制备FA-Cre@PEG-PLGA NPs,采用激光粒度仪、透射电子显微镜和荧光显微镜对FA-Cre@PEG-PLGA NPs的粒径、ξ电位及形态进行表征,紫外光谱法测定并计算克班宁的包封率和载药量,比较FA-Cre@PEG-PLGA NPs和克班宁原料药72 h的体外释放规律,通过溶血实验考察二者生物学特性,CCK-8实验考察两者对正常肝L02细胞存活率的影响及对肝癌Bel-7402细胞体外增殖抑制作用.细胞划痕法考察纳米粒和原料药对肝癌Bel-7402细胞迁移能力的影响.荧光显微镜观察纳米粒在不同时间点对肝癌Bel-7402细胞的摄取情况.结果 FA-Cre@PEG-PLGA NPs 的平均粒径为(247.67+2.49)nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)为0.139±0.027,ξ电位为(-9.40±0.54)mV,透射电子显微镜下呈圆球状核壳结构,荧光显微镜下观察纳米粒,其气化后明场呈蓝色光点、暗场呈红色光点.FA-Cre@PEG-PLGA NPs中克班宁的包封率为83.78％,载药量为67.78％.FA-Cre@PEG-PLGA NPs与克班宁原料药体外释放均符合Ritger-Peppas模型;安全性评价结果显示,FA-Cre@PEG-PLGA NPs相比于克班宁原料药在50～300 μg/mL内具有良好的生物相容性.FA-Cre@PEG-PLGA NPs对人正常肝L02细胞毒性较低,相比于克班宁原料药有一定的安全性.体外增殖抑制结果显示,两者对Bel-7402肿瘤细胞的增殖抑制率均呈现出剂量依赖性和时间依赖性,且FA-Cre@PEG-PLGA NPs联合超声辐照后对Bel-7402肝癌细胞具有更强的杀伤作用.细胞划痕实验表明,克班宁原料药、FA-Cre@PEG-PLGA NPs对Bel-7402肿瘤细胞迁移均有抑制作用,呈剂量依赖性,且纳米粒联合超声抑制细胞迁移效果更显著.细胞摄取实验表明,相同时间下超声联合纳米粒能有效增强肿瘤细胞的摄取.结论 成功制得FA-Cre@PEG-PLGA NPs,而且体外具有良好的缓释效果和抑瘤作用,为FA-Cre@PEG-PLGA NPs应用于肝癌的治疗研究提供实验依据.

目的:探讨转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)纳米载药系统靶向治疗急性白血病的效果及其潜在的抗肿瘤机制.方法:合成纳米载药粒TfR mAb-聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)-聚L-赖氨酸(PLL)-聚乙二醇(PEG)-柔红霉素(DNR).急性髓性白血病细胞株HL60细胞经药物干预后,倒置荧光显微镜下观察细胞内DNR的累积;流式细胞技术(FCM)检测HL60细胞内DNR浓度及细胞凋 亡率;Western blot测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3的表达量.结果:单药DNR组和TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组HL60细胞内可见DNR自发荧光累积,且TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组细胞内DNR浓度高于单药DNR组(P＜0.05);FCM 检测结果显示,TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组细胞凋亡率高于单药DNR组(P＜0.05);Western blot检测结果证实,TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3表达量明显高于单药DNR组(P＜0.05).结论:TfR mAb-PLGA-PLL-PEG纳米载药系统将化疗药物靶向作用于肿瘤细胞HL60,可通过凋亡途径增加药物的抗肿瘤能力.

目的:探讨治疗甲状腺相关眼病(TAO)药物曲安奈德(TA)和霉酚酸酯(MMF)聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸(PEG-PLGA)纳米粒子的最佳制备工艺及体外释放性能,评价其经眶周注射治疗TAO的安全性.方法:以PEG-PLGA共聚物为原料,采用乳化法分别制备TA纳米粒子(TA NPs组)和MMF纳米粒子(MMF NPs组),以包封率为评价指标进行工艺优化.采用透射电子显微镜观察纳米粒子形态表现,采用Zetasizer粒径电位分析仪检测各组纳米粒子的粒径和电位.在体外眶周组织模拟液中,采用紫外分光光度法检测各组纳米粒子的释放性质,计算药物释放率,结合临床用药规则对药物的整体释放性质进行分析.人视网膜色素上皮hRPE-19细胞分为空白对照组、不同浓度TA组、不同浓度MMF组、不同浓度TA NPs组和不同浓度MMF NPs组,采用MTT法检测各组细胞活性,评价制剂的安全性.结果:制备载有TA和MMF的纳米粒子(TA NPs和MMF NPs),包封率分别为47.66%和16.52%,平均粒径约为600 nm,其电位均符合眶周注射的基本要求.透射电子显微镜下观察,TA NPs和MMF NPs表观圆整,均一化程度较高.体外释放体系检测TA NPs和MMF NPs的释放特性均符合临床上TAO治疗药物的给药特性,均可持续释放3周以上,其初始释放率不高,体外释放曲线较为平稳.MTT 法检测,不同浓度 TA 组、MMF组、TA NPs组和MMF NPs组在较低浓度下无明显的细胞抑制;较高浓度下,与相同浓度TA组比较,40、80和160 nmol·L-1 TA NPs组细胞活性明显升高(P<0.01);与相同浓度 MMF组比较,50、100和200 nmol·L-1 MMF NPs组细胞活性明显升高(P<0.01).结论:TA NPs和MMF NPs的物化表征参数符合眶周注射制剂的基本要求,且制备工艺简单,安全性良好,具有优良的载药和缓释效果,与TAO的临床用药治疗需求一致.

目的 制备羟基喜树碱长循环纳米粒并采用星点设计-效应面法筛选制备工艺.方法 以单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸聚合物(mPEG2000-PLGA)作为包封材料,采用改良的乳化-溶剂挥发法制备长循环纳米粒,以包封率与载药量作为评价指标,采用Design-Expert V8.0.6软件进行星点设计,考察羟基喜树碱的浓度、mPEG2000-PLGA的浓度、 水相与有机相的体积比因素对评价指标的影响,并应用效应面法得到最佳制备工艺.结果羟基喜树碱长循环纳米粒的最佳工艺为:羟基喜树碱浓度为1.41 mg·mL-1,mPEG2000-PLGA浓度为3.86 mg·mL-1,水相与有机相的体积比为9.90:1.制备的长循环纳米粒包封率为35.14％,载药量为2.10％,平均粒径为154.10 nm,电位为-38.61 mV.结论所优化的工艺方法简便、稳定可行,适用于羟基喜树碱长循环纳米粒的制备.

目的:制备共载双硫仑(DSF)与阿霉素(DOX)纳米胶束,评价其体外理化性质以及逆转乳腺癌细胞对DOX耐药的效果.方法:以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸共聚羟基乙酸-聚谷氨酸(mPEG-PLGA-PGA)为材料,以透析法制备双载药纳米胶束(DSFDOX-NPs),以动态光散射激光粒度测定仪(DLS)、透射电镜(TEM)对其理化性质进行表征,HPLC测量载药量和包封率,动态透析法测定药物体外释放行为,MTT以及激光共聚焦显微镜评价其逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞对DOX耐药的效果.结果:DLS测定DSFDOX-NPs平均粒径为(107.5± 0.2)nm,Zeta电位为(-13.7±0.1)mV;TEM显示为球形颗粒,粒径大小为95 nm;HPLC测定DSF载药量为1.91%,包封率为80.30%,DOX载药量为2.28%,包封率为96.2%;体外释放表明DSFDOX-NPs对2种药物均有明显的缓释作用,呈现DSF先快释放、DOX后慢释放的"级联式"释放模式;体外细胞实验表明DSFDOX-NPs能显著地增加DOX在耐药细胞中的浓度,相比DOX溶液剂具有更高的细胞毒性.结论:DSFDOX-NPs有效地装载了2种药物,其粒径小于100 nm,分布均匀,体外缓慢释放药物,并且逆转了DOX耐药肿瘤细胞的耐药效果.

目的 采用正交实验法筛选制备槲皮素乳酸羟基乙酸共聚物-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(PLGA-TPGS)纳米粒(QPTN)的最佳处方和制备工艺,并对QPTN进行体外稳定性考察.方法 采用单一因素方法分别考察主药槲皮素与载体比例、乳化剂TPGS溶液浓度、超声功率、超声时间对QPTN粒径、载药量、包封率的影响.在单一因素实验基础上通过正交实验筛选制备QPTN的最佳处方和工艺,并制备6批QPTN.通过影响因素、加速、长期实验考察其中3批QPTN的体外稳定性.结果 制备QPTN的最佳处方及工艺是槲皮素与载体比例为3:10,TPGS溶液的浓度为0.05%,超声功率为200 W时超声6 min.在该条件下制备6批QPTN的平均粒径、载药量和包封率分别为(155.4±2.7) nm、(21.6± 1.5)%和(93.7±2.9)%.体外稳定性实验中,QPTN在影响因素、加速、长期实验条件下稳定性良好.结论 确定了制备QPTN的最佳处方和工艺,自制QPTN粒径较小,载药量和包封率较高,体外显示具有良好的稳定性.

目的 研究不同疏水结构的两亲性聚合物单甲醚聚己二醇-聚己内酯聚合物(mPEG-PCL)、单甲醚聚乙二醇-聚D,L-乳酸聚合物(mPEG-PDLLA)、单甲醚聚乙二醇-聚(乳酸-羟基乙酸)聚合物(mPEG-PLGA)对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能的影响.方法 采用薄膜分散法制备聚合物胶束,动态光散射仪测定胶束粒径,芘荧光探针法测定临界胶束浓度(CMC);以P-gp特异性底物罗丹明123(Rhodamine 123,R123)为荧光探针,采用摄取和外排实验评价聚合物及其形成的胶束对MDCK-MDR1细胞P-gp功能的影响.结果 mPEG-PCL、mPEG-PDLLA、mPEG-PLGA的粒径分别为(55.9±0.2)、(53.7±1.1)和(61.6±0.6) nm;CMC值分别为2.08、5.42和26.4 μg·mL-1;摄取实验结果显示,当mPEG-PCL质量浓度在250μg·mL-1、mPEG-PDLLA在1～ 25μg·mL-1、mPEG-PLGA在1～25 μg· mL-1时,可显著增加细胞内R123累积量,表明三者对P-gp外排功能均有抑制作用;外排实验中mPEG-PCL、mPEG-PDLLA、mPEG-PLGA分别在CMC以上、CMC附近及以下、CMC以下时会显著降低R123外排率,与摄取实验结果相对应.结论 mPEG-PCL、mPEG-PDLLA、mPEG-PLGA聚合物对P-gp外排活性均有一定的抑制作用,其作用程度与疏水段结构、聚合物浓度及存在状态有关.

目的:制备并表征包载荧光染料1,1′-二十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基吲哚三碳花青碘(DiR)的聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(DiR-PEG-PLGA)纳米囊,评价其体外生物相容性.方法:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚乙二醇(PEG)-PLGA共混物为载体,采用改良的超声乳化法制备DiR-PEG-PLGA纳米囊样品.对样品的粒径、Zeta电位、形貌、稳定性、体外荧光特性等进行检测;采用MTT试验评价样品对人源性HL7702肝细胞的体外细胞毒性,采用体外溶血试验考察其对健康Wistar大鼠血细胞的溶血作用.结果:所制备的DiR-PEG-PLGA纳米囊呈圆球形,具有明显核壳结构,平均粒径为(507.53±7.87)nm,粒径的多分散系数为0.3061±0.0015,Zeta电位为(-35.20±0.92)mV;4℃条件下保存6个月,稳定性较好;体外荧光信号强度(y)随DiR质量浓度(x)呈线性增加,线性方程为y=0.3452x+0.4334(R2=0.9973).所制纳米囊对HL7702细胞的毒性为0~1级(即无细胞毒性),对大鼠血细胞无体外溶血作用.结论:本研究成功制备了具有荧光特性的DiR-PEG-PLGA纳米囊;所制纳米囊体外生物相容性较好,有望成为一种安全的药物光学示踪载体.