牙髓坏死可导致牙齿脆性增加，易折裂，并阻碍年轻恒牙牙根持续发育。因此牙髓再生治疗具有重要的临床意义。由于牙髓组织具有复杂、多变的解剖结构且包含神经、血管等多种组织成分，牙髓再生面临诸多挑战。回顾近年来应用组织工程方法探索牙髓组织构建与移植的基础研究和临床应用研究文献，重点讨论适宜支架材料的选择与牙髓组织构建方法。文中述及用于构建牙髓组织的支架材料包括海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸，胶原蛋白、明胶、纤维蛋白、丝素蛋白、多肽和自组装多肽、聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物等，简要介绍了其功能特点以及添加生物基质提取物、生长因子等组成的功能修饰或不同功能互补性材料组成的功能改进。结合临床可操作性要求，进一步讨论了由亲水性复合材料或经亲水基团修饰材料制备可注射水凝胶支架材料的组成设计和功能特点，以期为今后牙髓再生研究探索提供一定的借鉴。

目的:制备地佐辛聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)微球并进行鉴定。方法:地佐辛PLGA微球制备：地佐辛120 mg、PLGA 0.1 g与其助溶添加剂泊洛沙姆0.1 g分散于四氢呋喃溶剂中，配置成有机相溶液；氯化钠、聚乙二醇溶解于注射用水中，形成内水相溶液和外水相溶液；机相溶液20 ml与内水相溶液20 ml混合，形成水相/油相初乳后，加入外水相溶液中，形成水相/油相/水相复乳，与冻干粉保护剂充分混合冷冻干燥，制成地佐辛PLGA微球。鉴定：清洁级健康雄性SD大鼠18只，10～12周龄，体质量220～260 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：对照组(C组)、地佐辛普通制剂组(D 1组)和地佐辛PLGA微球组(D 2组)，分别肌肉注射生理盐水、地佐辛注射液(药物剂量1 mg)及地佐辛PLGA微球注射液(药物剂量0.2 μg)0.2 ml。于给药后30 min(T 1)、1 h(T 2)、2 h(T 3)、3 h(T 4)、4 h(T 5)、5 h(T 6)、6 h(T 7)、7 h(T 8)和8 h(T 9)时测定血浆地佐辛浓度，于T 1～T 3、T 5和T 9时测定热缩足潜伏期；肌肉注射后第7天，取注射部位组织，HE染色后观察炎症反应情况。 结果:与C组比较，D 1组T 1～T 3时及D 2组T 1～T 3、T 5和T 9时热缩足潜伏期延长( P<0.05)；与D 1组比较，D 2组T 5、T 9时热缩足潜伏期延长，T 6～T 9时血浆地佐辛浓度升高( P<0.05)。与T 2时比较，D 1组T 4～T 9时血浆地佐辛浓度降低( P<0.05)，D 2组T 3～T 9时血浆地佐辛浓度差异无统计学意义( P>0.05)。肌肉注射后第7天，各组局部组织均未见炎症产生，病理学结果未见明显差异。 结论:本研究成功制备了地佐辛PLGA微球缓释剂型，对大鼠可维持平稳的血药浓度，有效延长药物作用时间，具有显著缓释作用。

通过熔融共混方法制备了以乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)为基体填充β-磷酸三钙(β-TCP)无机填料的复合材料,采用注射成型工艺制备可吸收界面螺钉.配制模拟人体的PBS缓冲液,根据相关医疗器械产品检测标准的要求对界面螺钉进行体外降解实验,对降解不同时间节点的界面螺钉进行特性黏度、平均分子量分布、质量损失、力学性能和热性能等进行测试表征,根据降解性能-时间曲线,确定界面螺钉丧失力学性能的时间节点.详细研究了PLGA和β-TCP复合材料制备的界面螺钉体外降解行为,为PLGA和β-TCP复合材料制备的可吸收产品降解行为提供参考和依据.

目的:探讨温度敏感的水凝胶与富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对大鼠前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)部分损伤的愈合是否有促进作用.方法:按照既往文献报道的方法制备PRP,将其与温度敏感的水凝胶——单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸嵌段共聚物(mPEG-PLGA)在特定条件下混合,制备成复合体.共采用110只12周龄雄性Sprague-Dawley大鼠右侧膝关节,其中10只作为完整对照组(n=10,ACL无损伤),其余100只随机分为2组:损伤对照组(n=60,ACL部分损伤后用生理盐水处理损伤部位)、实验组(n=40,ACL部分损伤后将mPEG-PLGA-PRP复合体注射于损伤部位).共观察三个时间点:手术后即刻、术后2周和术后6周.观察并比较组间与组内的组织学与生物力学变化.结果:组织学结果表明,实验组术后6周组织学观察可见ACL损伤已出现部分愈合,炎性细胞减少,出现新生纤维组织,但走行与正常ACL组织仍有差异,可见新生血管形成.韧带成熟度评分,实验组显著高于损伤对照组(20.6±4.9 vs 4.7±1.0,P＜0.01).生物力学实验结果表明,术后6周拉断强度实验组显著高于对照组(52.7±11.2 vs 30.3±8.8,P＜0.05).结论:在大鼠模型下采用mPEG-PLGA-PRP复合体治疗ACL部分损伤,术后6周在组织学与生物力学方面与对照组相比均有显著改善,但是尚未恢复到损伤前的水平.

目的 考察HepG2.2.15细胞对同时包载丁香苦苷和羟基酪醇纳米粒(nanoparticles co-loaded with syringopicroside and hydroxytyrosol,SH-NPs)的摄取机制.方法 采用沉淀法制备SH-NPs,以异硫氰酸荧光素为荧光标记物,采用流式细胞仪研究HepG2.2.15细胞对SH-NPs的摄取机制.结果 秋水仙素为抑制剂,孵育时间在0.5~24 h范围内,阳性细胞百分数由1.9%增加到56.4%;药物浓度为125、250、500 μg/mL时,阳性细胞百分数分别为4.9%、3.4%、3.9%.氯喹为抑制剂,孵育时间在0.5~24 h范围内,阳性细胞百分数由7.4%增加到55.4%;药物浓度为125、250、500 μg/mL时,阳性细胞百分数分别为19.5%、22.5%、27.6%.结论 秋水仙素与氯喹对HepG2.2.15细胞摄取有抑制作用,且HepG2.2.15细胞对SH-NPs的摄取与药物浓度、孵育时间呈正相关,推断HepG2.2.15细胞对SH-NPs细胞的摄取机制为非特异性吸附内吞.

目的 以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)嵌段共聚物为载体材料制备塞来昔布载药胶束,并考察其在大鼠体内药动学情况.方法 采用薄膜分散法制备塞来昔布载药胶束,评价载药胶束的微观形态、粒径分布、Zeta电位等理化性质;采用动态膜透析法考察塞来昔布乙醇溶液和载药胶束的体外释药情况;考察塞来昔布乙醇溶液和塞来昔布载药胶束经尾静脉注射后在大鼠体内药动学情况.结果 透射电镜显示塞来昔布载药胶束粒径均一,成球状或类球状分布,平均粒径为(35.6±15.1) nm,PdI为0.152±0.05,Zeta电位为(-24.6±2.9)mV;塞来昔布载药胶束在0.5％ SDS磷酸盐缓冲液中24 h累积释放81.5％;塞来昔布乙醇溶液和塞来昔布载药胶束在大鼠体内的t1/2分别为(4.41±0.41)h和(6.38±0.81)h,AUC分别为(86.17±4.08)和(142.21±7.82) mg·(L·h)-1.结论 塞来昔布载药胶束与塞来昔布乙醇溶液相比,延长了药物在大鼠体内的滞留时间,有望提高药物治疗效果.

研究重组戊型肝炎抗原(HEVAg)-乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)纳米颗粒抗原能否在动物体内诱导产生免疫应答.制备HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原后,通过皮下、滴鼻、口服途径接种Balb/c小鼠,每隔4周加强免疫两次,HEVAg与铝盐佐剂(铝佐剂疫苗Al2O3-Ag)为对照组,一定时间内检测抗体及细胞因子的应答水平.结果HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原在小鼠体内诱导产生有效的体液免疫、细胞免疫.滴鼻、口服途径黏膜系统中诱导产生较高滴度的IgA抗体,ELISPOT结果显示鼻腔、唾液腺中IgA ASCs数量显著增加;皮下途径诱导产生较高滴度的IgG抗体;常规铝佐剂疫苗相比于HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导较强的IgG抗体水平,未诱导产生黏膜免疫应答;HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导产生较强细胞免疫应答,皮下接种途径IFN-γ、IL-4生成细胞数量显著高于其它免疫组.与铝佐剂疫苗相比,HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原能有效诱导产生系统免疫及黏膜免疫应答,显示HEVAg-PLGA有潜力成为备选HEV黏膜疫苗抗原,同时展示PLGA颗粒作为黏膜系统抗原递送载体及黏膜佐剂的优越性.

背景:血管内皮生长因子具有成血管作用,目前国内构建血管内皮生长因子缓释微粒缝线预防血管吻合术后并发症方面的报道较少.目的:合成含血管内皮生长因子的缓释微粒缝线,评估其对大鼠小血管吻合后血管再生的作用.方法:采用乳化分散法制备包裹血管内皮生长因子的可生物降解高分子聚乳酸/乙醇酸共聚物微粒,将其负载于显微缝线中,制备含血管内皮生长因子缓释微粒显微缝线.取90只SD大鼠,制作尾动脉血管吻合模型,随机分2组,实验组采用含血管内皮生长因子缓释微粒显微缝线进行吻合,对照组采用普通显微缝线进行吻合,吻合后2h、12h、1d、3d、7d,观察两组并发症发生情况、外周血血管内皮生长因子水平及血管吻合处苏木精-伊红染色结果.结果与结论:①并发症情况:实验组术后皮肤坏死发生率明显小于对照组(P＜0.05);②血管内皮生长因子水平:实验组术后不同时间点的外周血血管内皮生长因子水平均高于对照组(P＜0.05);③苏木精-伊红染色:实验组血管吻合后1d,吻合口缝线附近可见增生的内皮细胞;吻合后3d,小血管吻合口两端缝线附近可见大量增生的内皮细胞和内皮下组织,完成覆盖缝线;吻合后1周,内皮细胞及内弹性膜修复完全,平滑肌细胞进一步增生,外膜恢复正常.对照组血管吻合后1d,吻合口缝线附近表现为创伤后细胞变性坏死,仅外膜层细胞浸润并呈创伤性增生反应;吻合后3d,内皮细胞脱落区出现新生内皮细胞,并出现生长移行,吻合口开始有少量内皮细胞覆盖;吻合后5-7 d,新生的内皮细胞爬过吻合口裂隙并覆盖缝线;④结果表明:含血管内皮生长因子缓释微粒显微缝线可促进大鼠小血管吻合内皮的再生.

目的:制备并表征聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)-克班宁纳米粒(PLGA-Cre-NPs),考察其体外释放特性,为克班宁的体内作用时间延长、毒性降低提供参考.方法:以PLGA为载体,采用乳化溶剂扩散法制备PLGA-Cre-NPs.以包封率、粒径、多分散指数(PDI)为评价指标,通过星点设计-效应面法优选PLGA-Cre-NPs的制备工艺.利用膜透析法考察PLGA-Cre-NPs的体外释药规律.结果:PLGA-Cre-NPs的最佳制备工艺为有机相与水相体积比(3:10),丙酮-无水乙醇(8:2),PLGA投入量90 mg.PLGA-Cre-NPs的包封率(84.69±2.54)％,粒径(155.3±14.2) nm,PDI =0.095±0.018,扫描电镜显示其呈规则球形结构.PLGA-Cre-NPs体外释放包括速释和缓释2个阶段,0～24 h符合Weibull方程,24～ 168 h符合Higuchi方程;半衰期18.06 h,168 h时累计释放率达78.77％.结论:优选的工艺条件稳定可行.制得的PLGA-Cre-NPs包封率较高、粒径均匀,有望制备成缓释制剂.

目的 探索以骨髓间充质干细胞(BMMSCs)诱导分化的心肌样细胞为种子细胞、以聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)作为支架材料,在大鼠体内构建工程化心肌组织的可实施性.方法 分离培养大鼠BMMSCs,取第3代细胞用5-氮胞苷和血管紧张素Ⅱ联合诱导24h继续培养3周,将诱导分化的心肌样细胞种植到PLGA支架上形成移植物,在孵箱里孵育3d,然后将其移植到预先制备好的大鼠腹膜腔囊袋之中.4周以后,取出移植物并采用HE染色观察心肌样细胞的形态特征、用免疫组织化学染色法检测工程化心肌细胞肌钙蛋白(cTn)Ⅰ的表达、透射电镜下观察心肌样细胞的形态和结构.结果 HE染色结果显示,在PLGA支架上可见到梭形的细胞核,且心肌样细胞分布均一;免疫组织化学染色结果显示PLGA-心肌样细胞组绝大多数移植细胞表达心肌特异性蛋白cTnⅠ;透射电镜观察显示,在体内构建的工程化心肌组织中,可以看到肌丝沿细胞的长轴平行排列,胞浆中富含大量的线粒体和内质网,以及桥粒结构、缝隙连接和Z线样物质.结论 成功的建立了在大鼠体内构建工程化心肌组织的方法.这种体内微环境有助于移植组织或细胞的存活,在大鼠体内构建的工程化心肌组织具有与天然心肌组织相似的结构.