为探讨疫苗候选抗原—结核分枝杆菌肝素结合血凝素（HBHA）通过黏膜接种诱导的保护性免疫效应。动物实验均使用6~8周龄雌性C57BL/6小鼠。30只小鼠接受不同的免疫接种策略，采用随机数字表法分为对照组、早期分泌抗原靶蛋白-6（ESAT-6）滴鼻组、HBHA滴鼻组、BCG初免PBS对照组、BCG初免HBHA加强组，每组6只。通过检测免疫后小鼠血浆白细胞介素17A（IL-17A）等细胞因子水平；肺IL-17A mRNA相对表达量（RQ）；肺三级淋巴结构的形成，及与其形成相关的趋化因子的检测；脾Th1、Th17细胞比例比较，从而分析免疫效应。BCG初免PBS对照组和BCG初免HBHA加强组（每组各30只小鼠），用BCG滴鼻模拟感染。在感染后预设的时间点做肺组织菌落计数，以评估细菌清除效率。多组间比较采用单因素方差分析，事后分析采用 LSD检验；两组间比较采用独立样本 t检验。结果显示，免疫后的小鼠血浆细胞因子IL-17A水平和肺IL-17A mRNA相对表达量，在BCG初免HBHA加强组［（14.76±4.73）pg/mL，RQ 为（12.27±6.71）］中最高，比对照组［（5.57±2.95）pg/mL，RQ为（1.30±0.97）］明显升高（ t=4.213， P<0.001； t=5.984， P<0.001），也显著高于BCG初免PBS对照组［（6.81±2.18）pg/mL，RQ 为（1.44±1.16）］（ t=3.646 P=0.001； t=6.185 P<0.001）。脾脏Th17细胞比例，与BCG初免PBS对照组（0.38±0.38）%比较，BCG初免HBHA加强组（1.02±0.34）%显著增高（ t=-0.280， P=0.048），该组在肺部诱导形成了三级淋巴结构，并在感染的早期降低了肺细菌负荷。综上，HBHA通过黏膜递送可有效增强BCG接种后的免疫保护效应，可能是一种有潜力的候选疫苗组分。

背景:体外淋巴细胞增殖实验常用于检测医疗器械潜在的免疫原性,但在相关标准中均未给出详尽的浸提条件及作用剂量.目的:考察供试品不同浸提条件及作用剂量对体外人淋巴细胞增殖的影响,思考在选择体外淋巴细胞增殖实验条件时需考虑的因素.方法:实验检测同种骨修复材料与肝素修饰人工晶状体两种供试品,均分为以下12组:①实验组1:供试品24 h完全培养基(含体积分数10%胎牛血清的RPMI改良培养基)浸提液200 μL+淋巴细胞悬液50 μL;②阴性对照组1:24 h完全培养基200 μL+淋巴细胞悬液50 μL;③实验组2:供试品24 h完全培养基浸提液100 μL+淋巴细胞悬液100 μL;④阴性对照组2:24 h完全培养基100 μL+淋巴细胞悬液100 μL;⑤实验组3:供试品72 h RPMI改良培养基浸提液(实验前加体积分数10%胎牛血清)200 μL+淋巴细胞悬液50 μL;⑥阴性对照组3:72 h RPMI改良培养基(实验前加体积分数10%胎牛血清)200 μL+淋巴细胞悬液50 μL;⑦实验组4:供试品72 h RPMI改良培养基浸提液(实验前加体积分数10%胎牛血清)100 μL+淋巴细胞悬液100 μL;⑧阴性对照组4:72 h RPMI改良培养基(实验前加体积分数10%胎牛血清)100 μL+淋巴细胞悬液100 μL;⑨阳性对照组1:含10 μg/mL植物血凝素M的完全培养基200 μL+淋巴细胞悬液50 μL;⑩阳性对照组2:含10 μg/mL植物血凝素M的完全培养基100 μL+淋巴细胞悬液100 μL;?空白对照组1:250 μL完全培养基;?空白对照组2:200 μL完全培养基.培养3 d后,采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖.结果与结论:①不同实验条件下,同种骨修复材料浸提液均可增强人淋巴细胞的活性,以RPMI改良培养基浸提72 h、浸提液与淋巴细胞悬液的体积比为4∶1的实验条件最为显著;肝素修饰人工晶状体在该条件下对淋巴细胞活性有明显的抑制作用,可能与浸提液中的肝素有关,但在完全培养基浸提24 h、浸提液与淋巴细胞悬液的体积比为4∶1的实验条件下对淋巴细胞活性有轻微的增强作用;②供试品不同浸提条件及作用剂量下,人体外淋巴细胞增殖实验结果可能会有较大差异,实验条件的选择需结合产品临床应用情况,也需考虑产品的固有特性.

目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素(HBHA)对小鼠骨髓来源巨噬细胞和小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞极化的影响.方法 在应用免疫荧光法确认HBHA进入巨噬细胞的基础上,对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)和 Raw264.7细胞分别施加 LPS(100 ng/ml)+IFN-γ(2.5 ng/ml)、IL-4(20 ng/ml)、不同浓度的 HBHA(1 μg/ml,3 μg/ml, 6 μg/ml,10 μg/ml)和 ESAT-6(5 μg/ml).以ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α.通过RT-PCR方法检测M1型极化分子标志诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和TNF-α等,以及M2型极化分子标志精氨酸酶1 (Arg-1)和CD206.最后Western blot检测细胞iNOS和Arg-1蛋白表达水平.结果 结核分枝杆菌HBHA处理BMDM细胞后,培养上清中IL-6、IL-12、TNF-α细胞因子分泌明显增加,iNOS和TNF-α基因表达升高;处理后的Raw264.7细胞中,IL-6分泌量增多,TNF-α表达上调,与ESAT-6对小鼠巨噬细胞的作用结果一致.HBHA和ESAT-6处理小鼠骨髓来源巨噬细胞不能增加M2极化分子标志Arg-1的蛋白表达,但都能诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞和Raw264.7细胞iNOS生成增加.结论 结核分枝杆菌HBHA可诱导小鼠巨噬细胞向M1极化.

目的 观察低分子肝素联合硫酸镁治疗早发型重度子痫前期合并胎儿生长受限的效果.方法 将2017年1月-2018年6月义乌市中心医院收治的110例早发型重度子痫前期合并胎儿生长受限的孕妇随机分为对照组和观察组各55例,对照组给予硫酸镁结合基础治疗,观察组在对照组治疗方案基础上联合低分子肝素治疗,比较观察两组治疗前、后胎儿生长指标(双顶径、股骨长度、头围、腰围)、凝血四项指标[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(Fib)]、脐血流指标[阻力指数(RI)、血流速度峰谷比(S/D)和脉动指数(PI)]及母婴结局.结果 观察组治疗后胎儿双顶径、股骨长度、头围、腹围增长均大于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组治疗后PT、Fib较治疗前升高,且高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),两组APTT、TT治疗前、后差异无统计学意义(P＞0.05).观察组治疗后RI、S/D、PI较治疗前降低,且低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组孕妇分娩时胎龄及新生儿体质量均大于对照组,两组新生儿重度窒息发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低分子肝素联合硫酸镁治疗早发型重度子痫前期合并胎儿生长受限能够改善母体血凝状态,改善胎盘微血流,有效延长妊娠期,促进胎儿生长,提高疗效.

患者女,16岁,因"腹痛伴发热4 d"入院,下腹部疼痛较明显,呈持续性,疼痛不向肩背部放射,与进食、体位无关,伴有发热寒战,体温最高38.5℃,伴腹胀,偶有恶心呕吐,没有排便排气异常,没有胸闷胸痛,无尿急、尿频、尿痛.患者就诊于当地医院,行消化系统超声检查发现脾大伴脾扭转,未治疗,后就诊于我院门诊,行全腹CT检查发现脾扭转伴周围肠系膜扭转;腹腔盆腔积液(图1).遂以"脾扭转"收入院,入院检验示:白细胞18.4×109/L,中性粒细胞12.65×109/L,D-二聚体2440 ng/mL,体格检查示:T 38.4℃,P 100次/min,R 20次/min,BP 105/62 mmHg,心肺(-).腹部平坦,对称,无腹壁静脉曲张,无胃肠型、蠕动波,腹部柔软,下腹压痛明显,无明显反跳痛,下腹可触及包块,大小约12 cm × 10 cm.肝、脾肋下未触及, Murphy征阴性.肝、肾区无叩击痛,无移动性浊音.患者既往碘过敏史,无法行增强CT扫描,遂行全腹增强MRI检查,考虑游走脾扭转并脾梗塞可能性大(图2).结合临床表现及实验室检查考虑患者已出现腹腔感染.完善相关检查并排除手术禁忌后急诊行腹腔镜全脾切除术.术中探查发现:腹腔及盆腔少量清亮腹水,脾位于下腹部,呈淤血改变,大小约20 cm×15 cm,与结肠及大网膜轻度粘连;脾蒂细长,与周围部分大网膜呈360°～480°扭转(图3);小肠、结肠色泽正常,未见缺血、坏死改变,考虑脾脏已坏死,确保胰尾部无损伤后行腹腔镜下全脾切除术,手术顺利(图4).术后常规予以抗感染、抑酸、补液等治疗,复查血常规及血凝示:血小板378×109/L,D-二聚体3970 ng/mL,予以低分子肝素抗凝及阿司匹林抗血小板治疗.出院前复查门静脉系统超声未发现明显门静脉血栓形成.术后病理示:脾组织淤血伴出血,脾门局灶区域出血组织内见慢性化脓性炎.患者恢复顺利,术后1周出院.出院1个月门诊复查,恢复良好,无明显不适.

目的 观察疏血通注射液联合Fogarty导管取栓等治疗外科术后急性下肢深静脉血栓形成(DVT)的临床疗效.方法 将50例外科术后急性下肢DVT患者按照随机数字表法分为2组.2组均行下腔静脉滤器植入,对照组25例予低分子肝素钙抗凝+ Fogarty导管顺向及逆向取栓治疗,治疗组25例在对照组基础上加用疏血通注射液经足背静脉滴注治疗.比较2组治疗前后双下肢周径差值、血凝指标[D-二聚体(D-D)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、活化部分凝血酶原时间(APTT)],并统计疗效.结果 2组手术成功率100％.治疗组总有效率96％,对照组总有效率80％,治疗组疗效优于对照组(P＜0.05).2组治疗后大腿、小腿周径差值均减小(P＜0.05),且治疗组治疗后大腿、小腿周径差值均小于对照组(P＜0.05).2组治疗后D-D、FIB均降低(P＜0.05),PT、APTT均延长(P＜0.05);治疗组治疗后D-D、FIB均低于对照组(P＜0.05),PT、APTT均高于对照组(P＜0.05).结论 疏血通注射液联合Fogarty导管取栓等治疗外科术后急性下肢DVT是一种创伤小且安全有效的方法,尤其对于存在溶栓禁忌者更为适用.

目的 将自体血小板分离结合自体血回收技术应用于Stanford A型主动脉夹层全弓置换术患者,探讨其对凝血功能和炎性因子的影响.方法 选择2017年7月至2018年12月收治的Stanford A型主动脉夹层行全弓置换术患者40例,男27例,女13例,年龄23～64岁,BMI 20～39 kg/m2,ASAⅢ或Ⅳ级.随机分为自体血小板分离结合自体血回收组(APP组,n=25)和单纯自体血回收组(C组,n=15).记录APP组自体血小板分离量、两组洗涤红细胞回输量、两组术中和术后24 h异体血使用量.记录麻醉诱导后(T0)、肝素化前(T1)、离室前(T2)、术后24 h(T3)红细胞压积(Hct)、血小板计数(Plt),记录反应时间(R)、凝集时间(K)、血凝块形成速率(α角)、血栓最大振幅(MA)、MA后30 min血凝块溶解百分率(ly30)等血栓弹力图(TEG)指标,记录凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)等凝血功能指标和白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)等血清炎性指标.结果 APP组术中出血量,洗涤红细胞回输量,异体红细胞、血浆和血小板输入量均明显少于C组(P<0.05).T2—T3时APP组Plt明显高于C组(P<0.05).T3时APP组R、K明显短于C组,α角、MA和ly30明显大于C组(P<0.05).T2—T3时APP组PT、APTT明显短于C组,FIB明显高于C组(P<0.05).T1—T3时APP组IL-2、IL-6、PGE2明显低于C组(P<0.05).结论 全弓置换术患者术前行自体血小板分离能改善凝血功能,减少围术期出血量和异体血输入量,提升血液保护效果;同时降低血清炎性因子水平,改善患者术后炎症反应.

本文报导了一种去除人血清中风疹血凝NSI的DW H-M法，能相当满意地获得HI结果。在肝素与β-脂蛋白的结合中，要求一定量的Mn ++存在，此外NaCl的含量十分重要，只有在无NaCl的情况下，NSI的主要成份LDL才可能与肝素形成不可逆的复合物被完全除去。被检血清如事先56℃30分钟灭活，将改变β-脂蛋白的结构，从而不利于与肝素结合。本文同时用HI及SRH二种试验共比较了465份1～6岁儿童血清的风疹抗体，符合率达98.7%。并对其中5份HI阳性，SRH阴性的问题进行了讨论。

结核病是由分枝杆菌感染引起的世界范围内流行的人畜共患病.肝素结合血凝素(heparin-binding adhesin,HBHA)是分枝杆菌表达的一种蛋白质,致病性分枝杆菌的HBHA蛋白具有黏附上皮细胞、扩散感染范围等功能.其发挥黏附功能的C端结构域能够刺激机体产生有效的Th1细胞免疫反应;HBHA特异的黏膜免疫反应能够提供一定的保护效果.这提示HBHA具有制作为疫苗的潜力.而且,HBHA蛋白在活动性结核病患者和潜伏感染者中引发的免疫反应存在差异,这使其可以成为新的诊断抗原.此外,在细胞水平上,HBHA可以利用补体系统进入巨噬细胞,促使巨噬细胞向M1极化,同时能够逃避自噬并诱发线粒体损伤和内质网应激介导功能,这为结核病的致病机制提供了更多的解释.HBHA与宿主之间相互作用认识的积累,可以为HBHA的应用性研究提供依据.

目的 探讨血浆D-二聚体(DD)、肝素结合蛋白(HBP)表达与高血压脑出血(HICH)术后颅内感染及预后的关系.方法 选取2016年5月—2020年5月于我院治疗的HICH术后颅内感染病人(感染组)82例与未发生颅内感染病人(非感染组)120例作为研究对象.根据感染组病人预后是否发生死亡分为不良预后组(20例)与非不良预后组(62例).采用全自动血凝分析仪检测血浆DD水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆HBP水平;采用Logistic回归分析影响HICH术后颅内感染病人不良预后的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆DD、HBP对HICH颅内感染病人不良预后的预测价值.结果 感染组血浆DD、HBP水平均明显高于非感染组(P<0.05);不良预后组血浆DD、HBP水平均明显高于非不良预后组(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,血浆DD、HBP高表达均是影响HICH术后颅内感染病人不良预后的独立危险因素(P<0.05).ROC曲线分析结果显示,血浆DD评估HICH术后颅内感染病人不良预后的曲线下面积为0.660[95％CI(0.525,0.796),P<0.001],截断值为93.146 ng/mL,灵敏度为60.0％,特异度为67.7％;血浆HBP水平预测HICH术后颅内感染病人不良预后的曲线下面积为0.775[95％CI(0.662,0.888),P<0.001],截断值为15.242 ng/mL,灵敏度为85.0％,特异度为61.3％;血浆DD、HBP联合评估HICH术后颅内感染病人不良预后的曲线下面积为0.790[95％CI(0.682,0.897),P<0.001],灵敏度为65.0％,特异度为82.3％.结论 HICH术后颅内感染病人血浆DD、HBP水平升高,且两者均对HICH术后颅内感染病人的不良预后有一定预测价值,且二者联合检测预测价值更高.