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α1A-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建
编辑人员丨5天前
目的 建立α1A-肾上腺素能受体(α1A-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞.方法 ① 将pcDNA3.1-α1A-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L-1 压力筛选后加入α1A-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10 μmol·L-1)孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2 核转位,筛选得到稳定表达α1A-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞.②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α1A-AR mRNA和蛋白的表达水平.③将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10-8~10-5 mol·L-1)或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10-8.8~10-5 mol·L-1)孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2 核转位.④将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1 μmol·L-1)组、NE(1 μmol·L-1)组、萘派地尔+NE(各1 μmol·L-1共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1 μmol·L-1)组、DMED(0.1 μmol·L-1)组、阿替美唑+DMED(各0.1 μmol·L-1 共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1 μmol·L-1 与 DMED 0.1 μmol·L-1共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α1A-AR功能的特异性.结果 ①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞,NE 10 μmol·L-1孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞.②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞可明显表达α1A-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α1A-AR蛋白表达.RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5~20代内α1A-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500~800倍.③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10-7和6.15×10-8 mol·L-1.④与溶剂对照组和萘派地尔组比较,NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01).与溶剂对照组和阿替美唑组比较,DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别,而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01).结论 成功构建稳定共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞,可用于靶向α1A-AR化合物筛选和受体分子机制研究.
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编辑人员丨5天前
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右美托咪定对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织ERK/Na +-K +-ATPase信号通路的影响
编辑人员丨5天前
目的:评价右美托咪定对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠细胞外信号调节激酶(ERK)/钠钾ATP酶(Na +-K +-ATPase)信号通路的影响。 方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只,体重270~320 g,4~5月龄,采用随机数字表法分为4组( n=12):对照组(C组)、VILI组(V组) 、右美托咪定组(D组)和右美托咪定+育亨宾(α 2肾上腺素能受体阻断剂)组(DY组) 。C组不行机械通气,自主呼吸空气4 h;V组机械通气(通气频率40次/min,V T 40 ml/kg,I∶E 1∶1,PEEP 0,FiO 2 21%)4 h;D组机械通气前20 min静脉输注右美托咪定5.0 μg/kg,机械通气期间以5.0 μg·kg -1· h -1的速率静脉输注,DY组给予右美托咪定前10 min时静脉注射育亨宾0.1 mg/kg,其余处理同D组。机械通气4 h时,取血标本和肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值与肺通透指数(LPI),观察肺组织病理学结果,测定肺泡内液体清除率(AFC)。采用Western blot法检测肺组织ERK、磷酸化ERK(p-ERK)、Na +-K +-ATPase的表达水平。 结果:与C组比较,V组与DY组肺组织LPI和W/D比值升高,AFC降低,p-ERK表达上调,Na +-K +-ATPase表达下调( P<0.05) ,D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05);与V组比较,D组肺组织LPI和W/D比值降低,AFC升高,p-ERK表达下调,Na +-K +-ATPase表达上调( P<0.05),肺组织病理学损伤减轻,DY组上述指标差异无统计学意义( P>0.05);与D组比较,DY组肺组织LPI和W/D比值升高,AFC降低,p-ERK表达上调,Na +-K +-ATPase表达下调( P<0.05),肺组织病理学损伤加重。 结论:右美托咪定减轻大鼠VILI的机制可能与激动α 2肾上腺素能受体,抑制ERK/Na +-K +-ATPase信号通路有关。
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编辑人员丨5天前
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右美托咪定在焦虑、抑郁、睡眠障碍中的研究进展
编辑人员丨5天前
右美托咪定(Dex)是一种高度选择性的α 2肾上腺素能受体(α 2-AR)激动剂,具有独特的镇静、镇痛、抗交感作用,被广泛用于临床麻醉和重症监护治疗病房。近年来的研究发现Dex还具有调节负面情绪、改善睡眠障碍、保护神经系统等作用,且成瘾性较弱,有望成为治疗精神障碍的潜在药物。文章将重点讨论Dex在焦虑、抑郁、睡眠障碍中的应用,探讨其在精神病学领域中的潜在价值,为临床精神障碍的治疗提供新的思路。
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编辑人员丨5天前
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儿童抽动障碍药物治疗研究进展
编辑人员丨5天前
近年来由于儿童抽动障碍(TD)发病年龄更小、治愈率降低及难治性病例增多,儿童TD的治疗愈发引起人们的关注。现就TD的药物治疗进展,包括α2肾上腺素能激动剂、多巴胺D受体阻滞剂、典型和非典型抗精神病类药物、抗癫痫发作药物、肉毒杆菌毒素A,以及持续至成年期的儿童TD的治疗进行重点介绍,旨在强调儿童TD的正规治疗、足疗程治疗以及个体化治疗的理念。
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编辑人员丨5天前
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α2肾上腺受体激动剂对体外循环致大鼠脑损伤及炎性因子表达的影响
编辑人员丨5天前
目的:观察α2肾上腺受体激动剂对大鼠体外循环(CPB)致脑损伤、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白及炎性因子表达的影响。方法:成年清洁级健康雄性SD大鼠32只,按照随机数字表法分为4组:S组进行麻醉诱导及穿刺置管操作,机械通气60 min,不行CPB;C组建立CPB并持续60 min;A组CPB前30 min腹腔注入α2-AR激动剂右美托咪定25 μg/kg,建立CPB并持续60min;B组体外循环前30 min腹腔注入右美托咪定25 μg/kg+乙酰胆碱能受体拮抗剂甲基牛扁碱6 mg/kg,建立CPB持续60 min。CPB后2 h断头取右侧脑海马组织观察病理学结果。取左侧的海马组织免疫印迹法检测NF-κB/p65蛋白的表达。采血液标本ELISA法检测血清S100β、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。结果:S组海马锥体细胞形态正常完整,C组锥体细胞受损情况较重,核固缩,间隙增宽,A组受损较轻,仅见少量锥体细胞死亡,B组受损较A组重;C组、A组和B组S100β、IL-6和TNF-α水平均升高( P<0.05)。与C组比较,A组S100β、IL-6和TNF-α水平降低( P<0.05)。C组、A组和B组NF-κB/p65的表达升高( P<0.05),与C组比较,A组NF-κB/p65表达降低( P<0.05),B组NF-κB/p65表达高于C组、A组( P<0.05)。 结论:α2-AR激动剂能够调低CPB时NF-κB信号表达,减少炎性因子的释放,可能是α2-AR激动剂实现该保护作用的机制之一。
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编辑人员丨5天前
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非阿片类镇痛药治疗慢性疼痛病中国指南
编辑人员丨5天前
非阿片类镇痛药物是慢性疼痛病重要的临床治疗药物之一,主要包括非甾体抗炎镇痛药、离子通道药物、抗抑郁药、糖皮质激素、神经营养药、肌肉松驰药、α 2肾上腺素能受体激动剂、调节骨代谢药物、N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂和中成药等。基于《国际疾病分类(第11版)》(ICD-11)中慢性疼痛病非阿片类镇痛药物治疗的指南尚未见报道。本指南由中国国家卫生健康委能力建设和继续教育中心疼痛病诊疗专项能力提升项目专家组(以下简称专家组)牵头制订。专家组系统检索和评价了ICD-11七大类慢性疼痛病的非阿片类镇痛药物治疗的适应证、禁忌证、注意事项等问题涉及的有效性证据,并针对特殊的慢性疼痛病患者如老年、妇女和儿童以及肝肾功能受损患者等提出了非阿片类镇痛药物治疗指南的推荐意见,旨在为临床合理应用非阿片类镇痛药治疗慢性疼痛病提供参考。
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编辑人员丨5天前
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右美托咪定在功能神经外科的围手术期应用进展
编辑人员丨5天前
右美托咪定(dexmedetomidine, Dex)是一种α 2肾上腺素能受体激动剂,其镇静过程接近于自然睡眠,易于唤醒,同时具有镇痛、抑制交感神经活性、无明显呼吸抑制等特性。功能神经外科手术中进行的电生理功能监测对于定位手术区域和决定手术能否成功至关重要。目前证据表明低剂量Dex不干扰电生理监测,适用于神经外科唤醒麻醉手术区域定位,以及脑深部电刺激(deep brain stimulation, DBS)术中进行微电极记录(microelectrode recording, MER)等。文章总结了功能神经外科和麻醉管理要点、Dex的作用机制、Dex应用于功能神经外科的优势及其相关临床研究进展,以期合理应用Dex,优化麻醉管理和改善患者预后。
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编辑人员丨5天前
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α1肾上腺素受体阻滞剂降低大鼠门静脉高压的实验研究
编辑人员丨5天前
目的:观察α1肾上腺素受体(α1AR)阻滞剂能否降低和拮抗α1AR激活导致的大鼠门静脉高压,为临床治疗门静脉高压提供新思路。方法:α1AR激动剂选用去氧肾上腺素,α1AR阻滞剂选用阿呋唑嗪,采用门静脉穿刺注射给药并测量门静脉压力。将32只雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为4组。所有大鼠均在给药前测量基础门静脉压力;对照组大鼠按体重经门静脉注射0.9%氯化钠溶液(1 L/g),门静脉高压模型组大鼠经门静脉注射去氧肾上腺素(1.5 μg/g),以上两组在给药5和10 min后分别测量门静脉压力;阿呋唑嗪治疗组大鼠经门静脉予去氧肾上腺素(1.5 μg/g)5 min后测压,再予阿呋唑嗪(0.9 μg/g),在5 min后再次测压;阿呋唑嗪预防组大鼠经门静脉给予阿呋唑嗪(0.9 μg/g)预处理1 min后测压,再予去氧肾上腺素(1.5 μg/g),在1、5和10 min后测压。采用单因素方差分析、Dunnett- t检验进行统计学分析。 结果:对照组、门静脉高压模型组、阿呋唑嗪治疗组和阿呋唑嗪预防组分别有4、6、8、5只大鼠门静脉穿刺成功。门静脉高压模型组大鼠给药5和10 min后门静脉压力分别为(18.045±7.636)、(15.515±5.440) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa) ,均高于给药前[(8.452±2.830) mmHg],差异均有统计学意义( t=2.89、2.82,均 P<0.05)。阿呋唑嗪治疗组大鼠在注射阿呋唑嗪5 min后,门静脉压力为(10.088±3.743) mmHg,低于本组注射去氧肾上腺素5 min后[(16.146±4.324) mmHg ]和门静脉高压模型组注射去氧肾上腺素10 min后,差异均有统计学意义( t=3.00、2.22,均 P<0.05)。阿呋唑嗪预防组大鼠给药前,注射阿呋唑嗪后,注射去氧肾上腺素后各时间点的门静脉压力比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:α1AR是参与门静脉压力调节的重要因素,其阻滞剂能降低和拮抗α1AR激活导致的门静脉高压,对防治肝硬化门静脉高压进展具有重要意义。
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编辑人员丨5天前
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右美托咪定用于睡眠障碍诊疗的研究进展
编辑人员丨5天前
右美托咪定是一种高选择性α 2肾上腺素能受体激动剂,具有镇静、催眠、镇痛、抗交感等作用,广泛用于临床麻醉和监护室镇静 [1]。由于右美托咪定具有诱导近似生理睡眠,呼吸抑制小,神经保护作用强等特点,加上近年来麻醉治疗学和睡眠医学的发展,右美托咪定被越来越多地应用于睡眠障碍的诊断和治疗。本综述就右美托咪定用于睡眠障碍诊疗的研究进展进行阐述。
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编辑人员丨5天前
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右美托咪定的合理使用
编辑人员丨5天前
右美托咪定(DEX)为α 2肾上腺素能受体(α 2-AR)激动剂,除了在围术期应用外,还应用于门诊检查或治疗中。DEX镇静催眠作用的特点和优势在于,患者可进入类似自然睡眠状态,不仅有利于提高镇静效果,且易于唤醒;很少发生下颌松弛,无明显呼吸抑制。DEX的其他优势还在于其抗应激反应和潜在脏器保护作用,以及对认知功能影响小的特点。DEX主要的不良反应为暂时性高血压、低血压、心动过缓等。DEX的另一特点是药效消失相对较慢,术后患者可能发生嗜睡和体位性低血压。必须注意的是,DEX不能独立作为麻醉药在全麻术中担当主要的镇痛药和镇静药,只能发挥辅助作用,其作用有赖于合理的用法和用量,且作用并非是"全"或"无"的,使用过程中须严密监测患者的生命体征。
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编辑人员丨5天前
