目的:探讨腹腔镜胰十二指肠切除术（LPD）中妥善处理胰十二指肠下动脉（IPDA）的临床效果。方法:本研究为回顾性病例系列研究。回顾性收集2022年1—12月广州中医药大学第二临床医学院胰腺中心连续收治的70例因胰头占位、壶腹部肿瘤或胆总管下段占位而接受LPD的患者的临床和病理学资料。男性47例（67.1%），女性23例（32.9%），年龄（59.9±12.8）岁（范围：13~87岁）。IPDA的解剖和处理方法：结肠上区采取中间入路，于肠系膜上动脉（SMA）和肠系膜上静脉（SMV）之间，鞘外解剖、显露SMA右侧，显露SMA右侧分支，暂不离断；结肠下区沿空肠动脉由足侧向头侧解剖追踪、显露SMA主干，判断IPDA与空肠动脉的关系，识别并离断IPDA，处理IPDA根部。采用门诊或电话方式进行随访，术后每1~3个月门诊随访1次。结果:本组患者的LPD完成率为98.6%（69/70），所有患者获得根治性切除。术中联合血管切除重建9例（12.9%），其中1例（1.4%）经上腹部小切口完成血管重建和消化道重建。手术时间（432.7±115.4）min（范围：282~727 min），术中出血量（140.0±125.7）ml（范围：20~800 ml）。2例（2.9%）输注新鲜冰冻血浆。91.4%（64/70）的病例术中实现IPDA可靠结扎、根部安全处理，8.6%（6/70）合并IPDA损伤出血，无中转开腹病例。术后病理学检查结果显示，肿瘤最大径（3.3±1.6）cm（范围：1~7 cm），清扫淋巴结（17.0±7.3）枚（范围：0~46枚），合并淋巴结转移13例（18.6%）。术后发生B级胰瘘5例（13.2%），无C级胰瘘，胆瘘1例（1.4%），胃排空延迟2例（2.9%），淋巴漏2例（2.9%），腹腔感染9例（12.9%），切口脂肪液化1例（1.4%）。术后腹腔出血2例（2.9%，1例为胃小弯侧系膜血管出血，1例为肝固有动脉鞘滋养血管渗血），均为非IPDA相关性出血。术后住院时间（15.2±4.6）d（范围：9~28 d）。结论:LPD术中采取妥善方法处理IPDA，可减少术中、术后IPDA相关性出血，提升LPD的安全性。

目的:探讨自噬对Sprague-Dawley(SD)大鼠梗阻性黄疸肝损伤的影响及其机制。方法:健康雄性SD大鼠35只，SPF级，6~8周龄，200~300 g，分为5组：假手术组(单纯游离胆总管，不结扎，腹腔内注射生理盐水)、胆总管结扎(OJ)组(游离胆总管，并双重丝线结扎，腹腔内注射生理盐水)、OJ+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、OJ+雷帕霉素(Rapamycin)组和OJ+3-MA+VX-765组，每组7只。HE染色观察肝脏组织学变化。免疫组化染色检测自噬相关蛋白Atg5表达水平。全自动生化仪检测肝功能。酶联免疫吸附试剂盒检测血清白细胞介素(IL)-18水平。蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白水平及内质网应激相关凋亡通路。结果:通过免疫组化染色，OJ组自噬相关蛋白Atg5相对表达量较假手术组增加[(5.0±1.0)比(2.8±1.3)]，差异有统计学意义( t＝-3.00， P<0.05)。与假手术组比较，OJ组自噬活性增加，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1/p-65及炎症因子IL-18水平升高，同时内质网发生应激并诱导其相关性凋亡。应用自噬抑制剂3-MA后，与OJ组比较，OJ+3-MA组中Caspase-1/p-65蛋白水平及炎症因子IL-18水平增加，同时肝损伤加重；而应用自噬激动剂Rapamycin后，与OJ组比较，OJ+Rapamycin组中Caspase-1/p-65蛋白水平及炎症因子IL-18水平下降，同时肝损伤减轻。应用Caspase-1特异性阻断剂VX-765后，与OJ+3-MA组比较，OJ+3-MA+VX-765组中Caspase-1/p-65蛋白水平及炎症因子IL-18水平下降，同时肝损伤减轻。 结论:胆总管结扎后，诱导内质网应激相关性凋亡及激活自噬。活化的自噬减轻SD大鼠梗阻性黄疸肝损伤，可能与抑制Caspase-1/p-65炎症通路相关。

目的:探讨应用直线切割闭合器行腹腔镜原位脾切除术治疗儿童血液病所致脾功能亢进的优势、可行性与安全性。方法:选取2016年1月至2021年4月在深圳市儿童医院因血液病所致脾功能亢进行腹腔镜脾切除术的患儿作为研究对象，共32例，其中男13例，女19例，年龄5~16岁；包括地中海贫血28例，遗传性球形红细胞增多症4例。18例行传统腹腔镜下分束结扎脾蒂脾切除术(传统组)，14例应用直线切割闭合器行腹腔镜下原位脾切除术(原位切闭器组)。比较两组患儿围手术期及术后并发症情况。结果:32例患儿中，2例遗传性球形红细胞增多症患儿合并胆总管急性梗阻，行禁食、胃肠减压及抑酸抑酶好转，1个月后行脾切除手术治疗；其余30例患儿均顺利完成手术，无一例中转开腹患儿。围手术期，腹腔镜原位脾切除术组术后住院时间[(5.2±1.5)d]较传统组[(7.1±1.3)d]明显缩短( P<0.05)，而两组术后肛门排气排便时间[(2.3±0.1)d比(2.1±0.8)d]、术后进食时间[(2.7±0.9)d比(2.2±0.2)d]、术后使用抗生素时间[(2.1±0.4)d比(2.4±0.3)d]差异均无统计学意义( P>0.05)。腹腔镜原位脾切除术组较传统组手术时间[(89±13)min比(192±26)min]、术中出血量[(18±2.6)mL比(51±2.8)mL]明显减少，差异有统计学意义( P<0.05)。术后随访发现：腹腔镜原位脾切除术组血红蛋白术前(76.21±5.5)g/L，术后1周(86.88±3.2)g/L，术后1个月(89.12±5.6)g/L，术后6个月(97.27±4.27)g/L，术后1年(118.25±13.36)g/L；传统组血红蛋白术前(76.21±5.5)g/L，术后1周(86.88±3.2)g/L，术后1个月(89.12±5.6)g/L，术后6个月(97.27±4.27)g/L，术后1年(118.25±13.36)g/L；两组差异无统计学意义( P>0.05)。腹腔镜原位脾切除术组血小板术前(435.12±44.86)×10 9/L，术后1周(764.27±33.42)×10 9/L，术后1个月(531.75±31.48)×10 9/L，术后6个月(528.42±21.63)×10 9/L；传统组血小板术前(431.28±32.33)×10 9/L，术后1周(745.88±25.38)×10 9/L，术后1个月(532.89±21.12)×10 9/L，术后6个月(512.46±22.67)×10 9/L；两组差异无统计学意义( P>0.05)。传统组中2例曾于术中输注0.5 U的红细胞悬液。两组术后均无一例发生严重爆发性感染。传统组有1例形成门静脉血栓，经溶栓治疗后缓解。 结论:应用直线切割闭合器行腹腔镜原位脾切除术治疗儿童血液系统疾病所致脾功能亢进手术时间短，损伤小，出血少，术后康复快，术后并发症少，住院时间短，较传统腹腔镜手术有一定的应用优势。

目的:探讨成体肝脏 Numb基因过表达是否可有效干预胆汁淤积性肝纤维化（CLF）的进展。 方法:SD大鼠24只，随机分为假手术组（Sham， n=6）、胆总管结扎组（BDL， n=6）、空载体质粒组（Numb-EV， n=6）和 Numb基因过表达组（Numb-OE， n=6）。胆总管结扎制备CLF模型，并于造模的同时将载有克隆 Numb基因的腺相关病毒（AAV）经脾脏注射至大鼠体内，4周末取材。检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、白蛋白（Alb）、血清总胆红素（TBil）、血清胆汁酸（TBA）、肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量、肝组织中平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与细胞角蛋白（CK）7、CK19的表达情况及肝组织病理情况。多组均数比较采用方差分析。 结果:与Sham组比较，BDL组大鼠肝组织 Numb mRNA水平显著降低（0.872±0.237与0.452±0.147， P=0.003）；与Numb-EV组比较，Numb-OE组肝组织 Numb mRNA水平显著升高（0.487±0.122与1.094±0.345， P<0.01）。与Sham组比较，BDL组肝组织Hyp含量（μg/L）（288.46±49.49与901.98±271.85， P<0.01）及α-SMA mRNA水平（0.858±0.234与8.976±1.398， P<0.01）均显著升高；与Numb-EV组比较，Numb-OE组Hyp含量（μg/L）（864.32±113.54与580.44±171.77， P=0.039）及α-SMA mRNA水平（6.138±1.443与1.322±0.859， P<0.01）以及蛋白水平显著降低。与Sham组比较，BDL组血清ALT、AST、TBil、TBA水平均显著升高（ P值均<0.01），Alb含量显著降低（ P<0.01）；与Numb-EV组比较，Numb-OE组AST、TBil水平均显著降低（ P值均<0.01），ALT、TBA水平也明显降低（ P值均<0.05），Alb含量显著升高（ P值均<0.01），差异有统计学意义。与Sham组比较，BDL组CK7、CK19的mRNA表达水平均显著升高（1.40±0.42与43.78±7.56、1.11±0.51与363.81±134.84， P值均<0.01）；与Numb-EV组比较，Numb-OE组CK7、CK19的mRNA表达水平显著降低（343.19±81.22与3.22±2.34、40.53±14.02与15.68±9.36， P值均<0.01）。 结论:成体肝脏 Numb基因过表达可抑制CLF进展，这可能成为CLF治疗的新靶点。

目的:构建并评估肝纤维化骨质疏松大鼠模型。方法:2016年9月至2018年9月，将40只雄性SD大鼠(南京医科大学实验动物中心提供)，采用随机数字表法分为假手术4周(4W)、假手术6W、胆总管结扎(BDL)4W、BDL6W组。实验动物分别行假手术及胆总管结扎术后4周及6周后检测血清肝纤维化指标，获取肝脏及股骨标本并行肝脏组织马松(Masson)染色分析肝纤维化、股骨微计算机断层扫描技术(Micro CT)分析骨质疏松。组间比较采用单因素方差分析结合Bonferroni’s多重比较检验。结果:血清肝纤维化指标检测结果显示除血清透明质酸酶外[(1 368.48±1 093.82) U/L比(108.785±17.69) U/L， t＝3.277， P<0.05]，谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)、血清Ⅳ型胶原蛋白在BDL4W和假手术4W之间差异均无统计学意义[(317.73±98.69) U/L比(212.13±58.51) U/L，(81.03±21.82) U/L比(41.1±21.19) U/L，(19.81±0.42) μg/L比(19.35±0.34) μg/L， t＝1.586、1.007、0.938， P值均>0.05)；而BDL6W组各血清学指标均显著高于假手术6W组( t＝5.845、3.442、4.928、3.754， P值均<0.05)。肝脏Masson染色结果显示BDL4W大鼠出现肝纤维化改变，BDL6W大鼠更为明显。与假手术组大鼠比较，BDL6W大鼠Micro CT结果显示具有明显骨质疏松改变。 结论:大鼠胆总管结扎术可构建肝脏纤维化及相应骨质疏松动物模型。

目的:探讨Rab11抑制剂细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73(CDKI-73)在肝纤维化中的治疗作用及潜在分子机制。方法:将人LX2细胞分成4组：阴性对照组、转化生长因子-β(TGF-β)组、CDKI-73组和TGF-β+CDKI-73组。取15只5周龄雌性C57小鼠，体重(18.04±0.62)g，分成3组，每组5只：对照组(腹腔注射橄榄油+CDKI-73空载体灌胃)、四氯化碳(CCl 4)组(腹腔注射CCl 4+CDKI-73空载体灌胃)和CCl 4+CDKI-73组(腹腔注射CCl 4+CDKI-73灌胃)。另取15只5周龄雌性C57小鼠，体重(18.06±0.34)g，分成3组，每组5只：假手术(Sham)组、胆管结扎组(打开腹腔寻找到胆总管并结扎+ CDKI-73空载体灌胃)和胆管结扎+CDKI-73组(打开腹腔寻找到胆总管结扎+CDKI-73灌胃)。蛋白质印迹法检测CDKI-73对LX2细胞以及小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)或纤维粘连蛋白(FN)的表达差异；Masson及天狼星红检测CDKI-73处理组及对照组小鼠肝纤维化的不同程度；免疫组化检测不同处理组小鼠肝脏α-SMA的表达差异。 结果:CCl 4组小鼠天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于对照组均增加( q＝38.47、24.99、36.79)，而CCl 4+CDKI-73组天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于CCl 4组的各指标均下降( q＝24.72、14.87、27.50)，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。胆管结扎组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于Sham组均增加( q＝28.23、41.01、44.16)，而胆管结扎+CDKI-73组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于胆管结扎组的各指标均下降( q＝22.88、34.31和33.97)，差异有统计学意义(均 P<0.001)。TGF-β组α-SMA和FN蛋白相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组(α-SMA：3.71±0.34比1.28±0.31；FN：3.21±0.39比0.83±0.06)，差异具有统计学意义(均 P<0.001)。TGF-β组α-SMA和FN mRNA相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组的各对应值，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。CDKI-73组TGF-β受体Ⅱ蛋白相对表达量高于阴性对照组(4.68±0.63比1.00±0.22)，差异有统计学意义( P＝0.004)。TGF-β+CDKI-73组磷酸化SMAD2的相对表达量低于TGF-β组(1.67±0.24比3.99±0.44)，差异有统计学意义( P<0.001)。Transwell实验结果表明，0.5 μmol/L CDKI-73即可抑制LX2细胞的迁移能力，且随着CDKI-73浓度的增加，抑制能力也越强。 结论:CDKI-73在体内和体外均可通过抑制依赖Rab11的TGF-β信号通路，从而抑制肝星状细胞的活化以及肝纤维化的形成。

目的:探讨核因子-κB (NF-κB)信号通路在胆汁淤积性肝损伤中的作用机制。方法:构建小鼠胆总管结扎模型，将小鼠随机分为Sham组、BDL14D组与BDL14D＋BAY 11-7085组，每组10只，术后14d取小鼠血清检测转氨酶、胆汁酸及胆红素水平，取肝组织行苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏损伤，行蛋白印迹实验检测NF-κB信号通路分子及炎症因子的变化。体外培养L-O2细胞，用胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDCA)刺激，并用NF-κB信号通路特异性抑制剂BAY 11-7085进行干预，观察NF-κB信号通路及炎症因子的变化。结果:胆总管结扎14 d后，BDL14D组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)水平、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)(1 104.022±253.524、622.896±79.863、73.602±17.233、393.522±95.625、199.940±85.811)均明显高于Sham组(84.313±37.254、39.778±21.463、19.342±16.112、4.136±1.728、2.104±1.022)；HE染色示BDL14D组小鼠肝组织坏死灶形成；蛋白印迹分析显示BDL14D组小鼠肝组织磷酸化NF-κB抑制因子(p-IκB)、磷酸化NF-κB转录因子p65(p-p65)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的蛋白水平明显升高。使用抑制剂BAY 11-7085干预的BDL14D＋BAY 11-7085组小鼠血清中AST和ALT(837.304±197.912、399.160±68.821)明显低于BDL14D组，p-IκB、p-p65、IL-1β和IL-6的蛋白水平也显著减低，肝组织坏死灶面积也明显减少，结果提示用BAY 11-7085通过阻断NF-κB信号通路能有效减轻炎症反应和肝组织坏死，显著改善肝功能状态。体外细胞实验亦证实，给予BAY 11-7085预处理可有效阻断GCDCA诱导的NF-κB信号通路激活，明显抑制肝细胞炎症因子的蛋白表达。结论:肝脏胆汁淤积通过激活NF-κB信号通路引起炎症反应，从而造成肝组织坏死和肝功能损伤。

目的:探讨胆总管囊肿(CC)合并肝外胆管变异术前磁共振胆胰管造影(MRCP)的诊断价值及腹腔镜手术处理策略。方法:收集2010年1月至2018年9月在广州市妇女儿童医疗中心连续330例腹腔镜下CC根治术患者临床资料，对其中合并肝外胆管变异的23例患者资料进行回顾性研究，其中男性4例，女性19例，平均年龄3.2岁，年龄范围0.3～9.0岁。根据肝外胆管变异情况是否经术前MRCP诊断，将患者分为术前MRCP诊断组和术前MRCP未诊断组。评估MRCP诊断对变异胆管损伤、手术操作时间以及住院时间等指标的影响。同时分析肝外胆管变异的类型及腹腔镜处理结局。结果:23例CC合并肝外胆管变异患者均经手术证实，发生率为6.97%(23/330)，其中Ⅱ型副肝管(AHD)11例，Ⅲ型AHD 7例，Ⅳ型AHD 1例，交通管(CABD)4例。术前MRCP诊断组纳入14例，MRCP未诊断组纳入9例(含2例未行MRCP患者)，MRCP对肝外胆管变异的术前诊断率为66.7%(14/21)。与术前MRCP诊断组相比，术前MRCP未诊断组变异胆管损伤机会更大[7.1%(1/14)比55.6%(5/9)]，手术操作时间更长[(232.6±10.0)min比(278.9±22.5)min]，差异均具有统计学意义( P<0.05)。23例CC合并肝外胆管变异患者，除1例Ⅱ型AHD中转开腹外，其余22例均在腹腔镜下顺利完成手术。其中11例Ⅱ型AHD及1例Ⅳ型AHD患者行变异胆管重建，7例Ⅲ型AHD患者术中注意保护变异胆管，4例CABD患者单纯结扎CABD。术后1例Ⅱ型AHD患者出现乳糜腹，经保守治疗痊愈，其余均恢复顺利。中位随访2(1～5)年，随访期内所有患者均无肝内胆管扩张及肝萎缩等并发症发生。 结论:MRCP检查是术前诊断CC合并肝外胆管变异的有效方法，能够避免术中变异胆管损伤，可对部分肝外变异胆管进行分型，制定相应的手术策略。绝大数患者可在腹腔镜下完成手术，术后效果良好。

目的:观察胆总管结扎诱导的梗阻性黄疸大鼠成纤维细胞活化的影响。方法:雄性无特定病原体(SPF)级大鼠(第二军医大学实验动物中心提供)24只随机分为假手术组与实验组，每组大鼠各12只。所有大鼠均进行胆总管结扎。实验组大鼠用3-0丝线双重结扎且于结间切断胆总管。两组大鼠分别于术后2 d和7 d取材。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测人转化生长因子-β1(TGF-β1)含量；采用免疫组织化学法检测TGF-β1蛋白表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测TGF-β1 mRNA表达；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测TGF-β1蛋白表达。应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料采用 t检验。 结果:假手术组大鼠肝小叶结构清晰，肝索排列整齐；实验组大鼠肝小叶结构紊乱不清，并且肝索解离。实验组血清TGF-β1水平术后2 d[(689.42±58.13) ng/L]和术后7 d[(867.53±45.62) ng/L]高于假手术组[(519.92±32.41) ng/L和(536.52±41.29) ng/L， t＝8.822、18.635， P<0.05]，差异有统计学意义。实验组肝组织中TGF-β1蛋白表达术后2 d[(6.53±1.29)%]和术后7 d[(8.97±1.85)%]高于假手术组[(1.17±0.24)%和(1.54±0.39)%， t＝14.151、13.613， P<0.05]，差异有统计学意义。实验组肝组织中TGF-β1 mRNA表达术后2 d[(0.89±0.14)%]和术后7 d[(0.95±0.19)%]高于假手术组[(0.52±1.32)%和(0.31±1.76)%， t＝14.693、18.316， P<0.05]，差异有统计学意义。实验组肝组织中TGF-β1蛋白表达灰度值术后2 d(0.62±0.13)和术后7 d(0.78±0.10)高于假手术组(0.21±0.05和0.23±0.06， t＝10.197、16.337， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:胆总管结扎诱导的梗阻性黄疸大鼠TGF-β1表达明显上调，胆管上皮细胞增殖诱导成纤维细胞活化。

目的:观察胆总管结扎诱导胆汁淤积性肝病对小鼠肠道菌群的影响。方法:体重18~22 g雄性C57BL/6J小鼠16只，采用简单随机分组方法，随机分为假手术组( n＝8)和胆汁淤积性肝病组(CLD组， n＝8)。术后两周取材，通过血清肝功能酶和肝脏组织染色评价肝脏功能。采用16S rRNA基因测序检测小鼠肠道菌群。样本数据采用未配对 t检验。 结果:与假手术组比较，胆汁淤积性肝病组小鼠血清肝功能酶高于假手术组[ALT：(889.9±485.1) U/L比(42.4±15.3) U/L， t＝4.885， P<0.01；AST：(1 044.0±588.0) U/L比(117.4±17.1) U/L， t＝4.406， P<0.01；ALP：(1 228.0±540.8) U/L比(171.2±24.8) U/L， t＝5.464， P<0.01；TBIL：(59.17±12.28) μmol/L比(14.51±4.60) μmol/L， t＝9.892， P<0.01]，且肝脏出现显著病理改变；小鼠肠道菌群ɑ多样性高于假手术组(Chao1指数：1 819.0±172.6比1 498.0±170.8， t＝4.388， P<0.01)，肠道菌群组成发生明显改变，厚壁菌门/拟杆菌门比率高于假手术组(0.542±0.321比0.093±0.057， t＝5.866， P<0.01)，差异主要包括毛螺杆菌科(0.198±0.099比0.056±0.039， t＝4.574， P<0.01)，瘤胃球菌科(0.076±0.057比0.018±0.011， t＝4.102， P<0.05)，乳酸杆菌科(0.041±0.023比0.003±0.003， t＝4.574， P<0.01)，理研菌科(0.027±0.014比0.004±0.004， t＝4.597， P<0.01)的富集。 结论:胆汁淤积性肝病导致肠道菌群出现特征性变化。