目的:研究卫矛茎皮醇提取物(EAT)和卫矛翅翘醇提取物(EAW)抗四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的作用，并初步探讨其可能机制。方法:选取60只C57BL/6小鼠，按随机数字表法随机分成健康对照组、模型组、EAW低剂量组、EAW高剂量组、EAT低剂量组、EAT高剂量组，每组10只。从造模前3 d开始，EAT低、高剂量组和EAW低、高剂量组小鼠分别予EAT和EAW各2.0、8.0 g/kg(含生药量)灌胃，健康对照组和模型组小鼠均给予等体积纯净水灌胃，1次/d，直至开始造模后第30天，共灌胃33次。EAT低、高剂量组和EAW低、高剂量组，以及模型组小鼠均予5%四氯化碳橄榄油溶液8 mL/kg腹腔注射，健康对照组小鼠予等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射，每周注射2次，至开始造模后第30天，共注射9次。检测各组小鼠的肝脏指数和血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素、白细胞介素-6(IL-6)水平。采用苏木精-伊红和Masson染色法观察小鼠肝组织病理学变化并计算胶原容积分数，采用改良组织学炎症活动度(HAI)和Ishak系统评分评估小鼠肝组织的肝脏炎症反应和纤维化程度。采用免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平，蛋白质印迹法检测α-SMA、基质金属蛋白酶2(MMP2)和胞外信号调节激酶(ERK)1/2的蛋白质表达水平，荧光定量聚合酶链反应检测 MMP2、 ERK1/2的mRNA表达水平。统计学方法采用方差分析、Tukey检验、Dunn检验。 结果:EAW低、高剂量组和EAT高剂量组小鼠的肝脏指数均低于模型组(0.06±0.01、0.05±0.01、0.05±0.01比0.07±0.01)，差异均有统计学意义( q＝5.12、7.70、7.11，均 P<0.01)。EAW低、高剂量组和EAT低、高剂量组小鼠血清ALT、AST水平均低于模型组[(601.76±141.38)、(283.35±42.32)、(734.74±116.06)、(391.60±34.33) U/L比(982.45±96.04) U/L，(509.49±152.29)、(345.41±67.39)、(282.30±65.72)、(243.23±45.20) U/L比(766.01±114.49) U/L]，差异均有统计学意义( qALT ＝9.88、20.81、7.65、17.58， qAST ＝5.11、12.52、14.92、15.56；均 P<0.001)。EAW和EAT高剂量组小鼠血清总胆红素水平低于模型组[(6.81±0.49)、(7.08±1.78) μmol/L比(12.68±3.28) μmol/L]，差异均有统计学意义( q＝6.31、6.01，均 P<0.01)。EAW低、高剂量组和EAT低、高剂量组小鼠血清IL-6水平均低于模型组[(29.26±5.42)、(24.28±4.75)、(9.05±1.74)、(8.01±1.24) ng/L比(53.21±10.05) ng/L]，EAT低剂量组IL-6水平低于EAW低剂量组，EAT高剂量组IL-6水平低于EAW高剂量组，差异均有统计学意义( q＝12.20、14.73、22.48、22.11、10.28、7.96，均 P<0.001)。EAW低、高剂量组和EAT低、高剂量组胶原容积分数均低于模型组[(6.15±1.09)、(2.91±0.76)、(7.07±1.37)和(5.31±0.80)分比(12.36±1.96)分]，EAW高剂量组低于EAW低剂量组和EAT低、高剂量组，差异均有统计学意义( q＝11.68、17.78、9.94、13.25，6.10、7.84、4.53；均 P<0.05)。EAW和EAT高剂量组的HAI和Ishak系统评分均低于模型组[6.0分(5.5分，7.5分)、7.0分(6.0分，7.5分)比13.0分(12.0分，13.0分)，1.0分(1.0分，2.0分)、2.0分(1.0分，2.0分)比4.0分(3.0分，4.0分)]，差异均有统计学意义( ZHAI＝3.38、3.23， Zlshak＝3.22、3.03；均 P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示，EAW低剂量组、EAW高剂量组、EAT高剂量组、EAT低剂量组、模型组小鼠肝组织中α-SMA表达水平分别为4.76±0.36、2.75±0.29、3.72±0.34、5.20±0.79、5.98±0.52，蛋白质印迹法检测结果显示，模型组、EAW低剂量组、EAW高剂量组、EAT低剂量组、EAT高剂量组α-SMA蛋白质表达水平分别为0.96±0.11、0.67±0.07、0.22±0.01、0.78±0.08、0.68±0.07，2种检测方法均提示EAW低、高剂量组和EAT高剂量组小鼠肝组织中α-SMA表达水平均低于模型组，EAW高剂量组的α-SMA表达水平均低于EAW低剂量组和EAT低、高剂量组，差异均有统计学意义( q免疫组织化学＝6.06、15.95、11.18、9.92、12.10、4.79， q蛋白质印迹法＝7.29、18.34、6.84、11.05、13.97、11.49，均 P<0.05)。EAW低、高剂量组和EAT低、高剂量组，以及模型组小鼠肝组织中MMP2、ERK1/2的蛋白质和mRNA表达水平分别为0.18±0.04、0.16±0.04、0.28±0.02、0.21±0.02、0.84±0.02，0.80±0.02、0.57±0.08、0.83±0.03、0.69±0.02、0.91±0.04，18.74±1.90、10.73±1.24、24.99±1.84、7.19±0.48、24.68±1.18，29.44±4.47、11.96±0.53、24.75±4.04、5.30±0.36、35.76±0.85，EAW低、高剂量组和EAT低、高剂量组小鼠肝组织中MMP2蛋白质表达水平均低于模型组，EAW、EAT高剂量组小鼠肝组织中ERK1/2蛋白质表达水平均低于模型组，EAW高剂量组ERK1/2蛋白质表达水平低于EAT高剂量组，EAW、EAT高剂量组小鼠肝组织中 MMP2和 ERK1/2的mRNA表达水平均低于模型组，EAW高剂量组的 MMP2和 ERK1/2 mRNA表达水平均低于EAW低剂量组，EAT高剂量组 MMP2和 ERK1/2 mRNA表达水平均低于EAT低剂量、EAW高剂量组，差异均有统计学意义( q＝22.15、22.96、18.87、21.31，13.42、8.53，4.90，18.57、23.29、16.49、21.11，10.66、12.12，23.70、15.38、13.48、16.73，均 P<0.05)。 结论:EAT和EAW均可减轻四氯化碳诱导的小鼠肝损伤和肝纤维化，可能与抑制ERK1/2、IL-6等表达而影响Ras/ERK-MMP2信号通路有关。

目的:探讨丹参提取物调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)通路改善重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的作用机制。方法:以逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠(1 ml/kg)法建立SAP肺损伤大鼠模型，随机分为模型组、丹参提取物(1.5 g/kg)组、ML385(Nrf2/ARE通路抑制剂，剂量：20 mg/kg)组和丹参提取物(1.5 g/kg)＋ML385(20 mg/kg)组。测量腹水量，计算W/D比值(W/D＝湿重/干重)；以苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肺组织病理，并进行Holfbauer评分；以全自动血气分析检测仪检测动脉血气指标；试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平和肺组织活性氧(ROS)水平，以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2蛋白表达。结果:与对照组比较，模型组大鼠肺组织出现肺泡壁毛细血管明显扩张变厚，肺泡间隔变大，肺间质充血、水肿、炎性细胞大量浸润等病理损伤症状，腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO 2、血清MDA水平显著升高( P<0.05)，PaO 2、氧合指数(OI)、血清SOD水平显著降低( P<0.05)。与模型组比较，丹参提取物组大鼠上述病理损伤症状减轻，腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO 2、血清MDA水平降低( P<0.05)，PaO 2、OI、血清SOD水平、肺组织Nrf2蛋白表达升高( P<0.05)；与模型组比较，ML385组大鼠上述病理损伤症状加重，腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO 2、血清MDA水平升高( P<0.05)，PaO 2、OI、血清SOD水平、肺组织Nrf2蛋白表达降低( P<0.05)。与丹参提取物组比较，丹参提取物＋ML385组大鼠上述病理损伤症状加重，腹水量、肺组织ROS水平、W/D及Holfbauer评分、PaCO 2、血清MDA水平升高( P<0.05)，PaO 2、OI、血清SOD水平、肺组织Nrf2蛋白表达降低( P<0.05)。 结论:丹参提取物可通过激活Nrf2/ARE信号保护急性胰腺炎肺损伤大鼠的肺组织。

目的:探讨辣木黄酮对糖尿病脑病（DE）大鼠认知功能障碍及神经病理指标的影响。方法:将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、阳性药物组及辣木低、高剂量组，每组10只。高脂高糖饲料持续喂养1周后经腹腔注射链脲霉菌素（STZ）25 mg/kg建立糖尿病大鼠模型，72 h后尾静脉采血，以2次随机血糖均值≥16.67 mmol/L、尿糖持续阳性表明糖尿病模型制备成功；对照组给予常规饲料喂养。辣木低、高剂量组大鼠制模成功后，分别每日灌胃4.0 g/kg和8.0 g/kg辣木提取物（辣木黄酮）；阳性药物组每日灌胃0.48 g/kg吡拉西坦，模型组和对照组每日灌胃等量生理盐水，均每日1次，持续给药30 d。进行Morris水迷宫实验以评估大鼠认知功能障碍情况。于末次给药后12 h分离大鼠海马组织，采用免疫组化染色检测晚期糖基化终末产物受体（RAGE）和核转录因子- κB（NF-κB）表达情况；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙酰胆碱酯酶（AChE）、晚期糖基化终末产物（AGE）和乙酰胆碱转移酶（ChAT）含量。结果:与对照组相比，模型组大鼠逃避潜伏期、探索距离明显延长，目标象限停留时间明显缩短，脑组织AChE和AGE水平显著升高，ChAT水平显著降低。Morris水迷宫实验显示：与模型组相比，辣木低、高剂量组第3天起大鼠逃避潜伏期（s：35.07±7.21、33.14±5.35比43.09±9.83，均 P<0.05）和缩短探索距离（m：8.32±4.23、8.10±4.97比13.02±3.67）均明显缩短（均 P<0.05），目标象限停留时间明显延长（s：35.12±3.12、41.53±8.37比23.15±4.89，均 P<0.01）。ELISA结果显示，与模型组比较，辣木低、高剂量组脑组织中AChE和AGE水平显著降低〔AChE（U/L）：180.22±12.03、142.67±20.56比205.27±25.14，AGE（μg/L）：439.10±25.19、428.27±19.14比501.28±21.53，均 P<0.05〕，ChAT水平显著升高（U/L：51.95±5.27、53.13±5.04比37.91±5.10，均 P<0.01）；辣木低、高剂量组组间AChE、AGE和ChAT水平比较差异均无统计学意义。免疫组化结果显示：制模后DE大鼠海马DG区RAGE、NF-κB阳性细胞明显增多，海马组织RAGE和NF-κB平均灰度值显著降低；与模型组比较，辣木低、高剂量组RAGE、NF-κB阳性细胞明显减少，海马组织RAGE和NF-κB平均灰度值显著升高〔RAGE（灰度值）：110.46±10.04、117.76±8.64比92.19±8.76，NF-κB（灰度值）：109.40±8.93、116.59±7.26比90.74±13.27，均 P<0.05〕；但辣木低、高剂量组间RAGE和NF-κB表达水平比较差异均无统计学意义。 结论:辣木黄酮能明显改善DE大鼠认知功能障碍及记忆能力，改善海马组织病变状况，具有一定脑保护作用。

目的 基于肠道菌群和肠黏膜屏障探讨玉液汤对气阴两虚证糖尿病肾病大鼠模型的影响.方法 采用一测多评法对玉液汤冻干粉中的有效成分葛根素、芒果苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量进行检测,以控制玉液汤冻干粉的质量.将45只Wistar大鼠按照体质量随机分为正常组(NC组)、气阴两虚证糖尿病肾病组(M组)和玉液汤组(YYD组;5.03 g·kg-1).采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)25 mg·kg-1,佐以附子,青皮,枳壳灌胃8周构建气阴两虚证糖尿病肾病大鼠.期间YYD组大鼠同时干预玉液汤提取物.期间分别检测一次各组大鼠每周体质量和血糖水平,并记录大鼠的体征变化、摄食量和饮水量、游泳时间以及尿量.8周后采用全自动生化仪分析大鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清肌酐(SCr)、尿氮素(BUN)水平;苏木精-伊红染色法(HE)观察肾脏和结肠组织的病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液的尿蛋白浓度和血清中IgG、IgM、cAMP和cGMP的含量;16S rRNA对大鼠粪便菌群进行分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法对部分菌群进行验证;Western blot法检测大鼠肾脏及结肠炎症因子TNF-α和IL-6蛋白水平及结肠组织肠道屏障蛋白表达水平.结果 玉液汤水提物冻干粉得率为27.36%,其中玉液汤中有效成分葛根素的含量为0.3496 mg·g-1、芒果苷的含量为0.1851 mg·g-1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量为0.0429 mg·g-1.动物实验结果表明,玉液汤能显著改善气阴两虚证糖尿病肾病模型大鼠倦怠、乏力等证候表征,提高大鼠游泳时间,降低饮水量和进食量等症状;增加粪便中拟杆菌门和降低厚壁菌门的丰度;改善模型大鼠血脂四项、血糖、肾功指标、免疫指标IgG、IgM以及机体能量平衡因子cAMP、cGMP水平;HE染色表明玉液汤能显著改善模型大鼠肾脏及结肠黏膜屏障损伤;抑制肾脏及结肠炎症因子TNF-α、IL-6的表达,显著提高结肠动力蛋白CHRM3、5-HT3A以及黏膜屏障蛋白Occludin、ZO-1的表达水平.结论 玉液汤可能通过纠正模型大鼠肠道菌群失调,延缓肠黏膜损伤,改善肾脏和结肠炎症,发挥防治气阴两虚证糖尿病肾病的作用.

目的:研究胆木Nauclea officinalis Pierre ex Pitard树干的化学成分.方法:采用硅胶柱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶和制备型高效液相色谱对胆木树干 95%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果:从胆木树干乙酸乙酯部位中分离得到 14 个化合物,分别鉴定为:(6R,7E,9R)-9-hydroxy-4,7-megastigmadien-3-one(1)、(9S)-9-hydroxymegastigma-4,6E-dien-3-one(2)、blumenol C(3)、9-epi-blumenol C(4)、松柏醛(5)、3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛(6)、芥子醛(7)、3,4-二甲氧基苯酚(8)、3,4,5-三甲氧基苯酚(9)、2-oxopomolic acid(10)、覆盆子酸(11)、桔皮晶(12)、(E)-3,3′-二甲氧基-4,4′-二羟基二苯乙烯(13)、fraxidin(14).结论:其中,化合物 2～8、10、11、13、14 为首次从乌檀属植物中分离得到,化合物 1、9、12 为首次从胆木中分离得到.

基于质量源于设计(quality by design,QbD)理念,优化胆木提取物的醇沉工艺.在单因素试验的基础上选取试验因素水平,以醇沉体积分数、醇沉前药液浓度、醇沉时间为关键工艺参数(critical process parameters,CPPs),以异长春花苷内酰胺转移率与固体去除率的综合评分为关键质量属性(critical quality attributes,CQAs),采用Box-Behnken设计建立 CPPs 与CQAs 之间的数学模型及空间设计,获得最优操作空间并进行验证.实验结果表明最优操作空间为乙醇醇沉体积分数65%～70%,醇沉前药液质量浓度 22～27 mg·mL-1,醇沉时间 12 h.该实验基于 QbD 理念,将设计空间应用于胆木提取物的醇沉工艺中,为胆木制剂生产过程中的质量控制提供可靠的理论依据,对指导中药工艺研究及工业化生产提供较好的参考价值.

考察四妙丸中3种生物碱及其4个代谢产物在正常和2型糖尿病模型大鼠体内的排泄动力学差异.通过链脲佐菌素诱导模型大鼠,采用LC-MS/MS检测正常和糖尿病大鼠尿液、粪便和胆汁中生物碱成分,探究糖尿病对四妙丸生物碱排泄过程的影响.结果显示,大鼠口服四妙丸提取物72 h后,粪便为四妙丸中生物碱的主要排泄途径,木兰花碱、小檗碱在正常大鼠的粪便总排泄率分别为4.87％、56.54％,在糖尿病大鼠减小为2.35％、35.53％,差异具有统计学意义(P＜0.05);糖尿病大鼠尿液中黄柏碱、木兰花碱和小檗碱的总排泄率明显降低,分别为正常大鼠的53.57％、60.84％、52.78％.口服四妙丸12 h后,糖尿病大鼠胆汁中小檗碱总排泄率明显增加,为正常大鼠的253.33％.糖尿病状态下,小檗碱的代谢产物唐松草酚定在尿液和粪便的总排泄率明显减小,在胆汁中明显增大;药根碱和巴马汀的总尿排率明显增大,t1/2和Ke发生显著改变.结果表明,糖尿病影响四妙丸生物碱的体内过程,使其以原型药物的形式排泄减少,影响小檗碱的生物转化,最终使生物碱体内暴露量增加,这将有利于生物碱发挥降血糖作用.该实验为四妙丸在糖尿病的临床应用和药物开发提供参考.

糖尿病膀胱功能障碍(DBD)是糖尿病(DM)在泌尿系统常见的并发症之一,能引起排尿功能障碍等诸多下尿路症状,严重影响患者的生活质量.抗胆碱能药物、β3受体激动剂、α1受体拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂、咖啡因、肌苷等西药是DBD的首选治疗方法,对此类药物的研究和探索也是最早最多的,已在临床上进行了一定程度的推广;以缩泉丸、木樨草素、葡萄籽提取物、车前子提取物、萝卜硫素、薄荷醇等为代表的中药方面的探索也在逐渐加快步伐,这类药物把控好使用的安全剂量后,未来有望在DBD的临床治疗上得到极大的应用;低能量冲击波、神经刺激法、电针等物理疗法是近些年来研究的热点,正在一步步地被证实是除药物疗法外很重要的一类DBD治疗方法;包含人脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、人羊水间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、新生儿膀胱间充质干细胞等在内的干细胞移植疗法的相关研究才刚刚起步,其在DBD的基础实验中表现出了不错的治疗效果,是有相当大的应用前景的;还有几种比较特殊的治疗,包括肉毒梭菌毒素A、人干细胞白血病基因、七甲川吲哚类花菁染料等,还需要更多的实验验证来说明其对DBD的疗效.各类治疗方法都在不断开展的实验研究中逐渐进步和完善,但是目前这些治疗中有很多都还只是在DM动物模型身上进行研究,未来则需要在临床上有更多更深入的验证.

目的:探讨石榴花改善脂质沉积(lipid deposition,LD)的作用机制.方法:CCK-8法测定石榴花提取物(pomegranate flower extract,PFE)及棕榈酸(palmitic acid,PA)对细胞活力的影响,采用PA诱导HepG2细胞LD模型,实验分为PFE组、空白组(NC组)和模型组(PA组),油红O染色法测定细胞内脂质含量,GPO-PAP法测定细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量.UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术鉴定差异代谢物并进行代谢通路富集.采用网络药理学方法筛选关键成分与核心靶点,并进行GO和KEGG富集分析.利用Autodock软件对关键成分与核心靶点进行分子对接,采用q-PCR检测PIK3CA、AKT1、MAPK、STAT3 mRNA的表达.结果:与NC组比较,PA组细胞内脂质、TC、TG含量显著升高(P＜0.01),33种代谢物有显著差异(P＜0.05);与PA组比较,PFE组细胞内脂质、TC、TG含量显著降低(P＜0.05),10种代谢物显著回调(P＜0.05).33种差异代谢物富集到与LD关联性强的甘油磷脂代谢通路.网络药理学得到PF的关键成分为白桦脂酸、木犀草素等,核心靶点为MAPK1、PIK3CA、AKT1、STAT3等.交集靶点主要通过调控PI3K-AKT、HIF-1等信号通路发挥治疗作用.关键成分与核心靶点均有较好的结合能力.q-PCR实验表明PFE可抑制HepG2细胞中MAPK、PIK3CA、AKT1 mRNA表达,促进STAT3的mRNA表达.结论:石榴花可改善HepG2细胞LD,代谢组学和网络药理学发现其作用机制可能与调节甘油磷脂代谢、MAPK、STAT3基因表达及PI3K-AKT等信号通路有关.

目的 研究达乌里芯芭Cymbaria dahurica L.的化学成分.方法 达乌里芯芭70％乙醇提取物采用大孔树脂、Sephadex LH-20、硅胶、聚酰胺、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到33个化合物,分别鉴定为梓醇(1)、京尼平-1-O-β-D-龙胆双糖苷(2)、栀子苷(3)、龙胆苦苷(4)、桃叶珊瑚苷(5)、cis-eurostoside(6)、eurostoside(7)、玉叶金花苷酸(8)、8-表马钱子苷酸(9)、小麦黄素(10)、木犀草素(11)、金圣草素(12)、芹菜素(13)、5,7-二羟基-3',4',5'-三甲氧基黄酮(14)、槲皮素(15)、反式咖啡酸(16)、咖啡酸乙酯(17)、trans-p-hydroxycinamic acid(18)、cis-p-hydroxycinnamic acid(19)、原儿茶酸(20)、对羟基苯甲酸(21)、香草酸(22)、丁香酸(23)、没食子酸(24)、3,4,5-三甲氧基苯甲酸(25)、acteoside(26)、isocrenatoside(27)、酪氨酸(28)、N,N,N-三甲基甘氨酸内盐(29)、β-谷甾醇(30)、胡萝卜苷(31)、stigmastanol-3β-p-glyceroxydihydrocoumaroate(32)、β-谷甾醇棕榈酸酯(33).结论 化合物 6、19、27～29、32为首次从芯芭属植物中分离得到.通过2D NMR及X射线单晶衍射首次确切归属了化合物9的8、9位碳氢信号的顺序.