目的:观察人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）对2型糖尿病（T2DM）小鼠胰岛功能的影响及其对NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性体和自噬过程的调节作用。方法:实验研究。选取20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，分为正常对照组（ n=5）和高脂喂养建模组（ n=15）；T2DM建模成功的小鼠进一步分为糖尿病组（ n=7）和UC-MSCs治疗组（ n=7）。UC-MSCs治疗组每周给予1次UC-MSCs（1×10 6/0.2 ml磷酸盐缓冲液）尾静脉输注治疗，共治疗4周；糖尿病组注射等量生理盐水，正常对照组不予处理。治疗结束后1周各组小鼠行腹腔糖耐量和胰岛素耐量试验检测糖耐量和胰岛素敏感性变化；采用免疫荧光染色法观察胰岛结构改变并检测胰岛中白细胞介素1β（IL-1β）和胰十二指肠同源框因子1（PDX-1）的表达。体外用脂多糖和三磷酸腺苷对小鼠骨髓诱导的原代巨噬细胞进行刺激（处理组）后，与UC-MSCs进行Transwell共培养实验24 h（治疗组），采用酶联免疫吸附法检测各组上清液中IL-1β的分泌水平，采用免疫荧光染色检测NLRP3炎性体和自噬相关蛋白的表达。统计学分析采用单因素方差分析及重复测量方差分析。 结果:体内实验表明，与糖尿病组相比，UC-MSCs治疗组小鼠胰岛结构部分修复，糖耐量和胰岛素敏感性均改善（均 P<0.05），共聚焦显微镜下观察胰岛中PDX-1表达增高，IL-1β的表达水平降低。体外实验表明，相较于处理组，治疗组中巨噬细胞分泌的IL-1β水平降低［（85.9±74.6）比（883.4±446.2）pg/ml， P=0.001］，共聚焦显微镜下观察NLRP3炎性体的表达降低，自噬底物蛋白P62表达降低，微管相关蛋白轻链β3（LC3B）、自噬效应蛋白Beclin-1表达增高。 结论:UC-MSCs可降低T2DM小鼠胰岛炎症水平，保护胰岛功能，可能与UC-MSCs抑制巨噬细胞NLRP3炎性体的活性，增强自噬水平有关。

目的:研究长链非编码RNA GAS5(long non-coding RNA GAS5，GAS5)靶向调控miR-29、miR-96和miR-208促进胰岛β细胞分泌胰岛素的作用及其机制。方法:采用Q-PCR法检测122名健康人血清和88例2型糖尿病(T2DM)患者血清以及大鼠胰岛细胞瘤株INS-1832/13中，长链非编码RNA GAS5与miR-29、miR-96和miR-208的表达水平及其相关性。通过慢病毒载体构建，沉默和过表达GAS5观察对胰岛β细胞分泌胰岛素功能的影响。采用生物信息学预测GAS5与miR-29、miR-96和miR-208有互补结合位点，用荧光素酶报告系统验证其靶向关系。在胰岛β细胞中共转染GAS5 shRNA,用上述方法检测其对胰岛素受体(insulin receptor, INSR)、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate-1, IRS-1)和磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase, PI3K)水平的影响，从而揭示GAS5刺激胰岛β细胞分泌胰岛素的作用机制。结果:与健康人血清相比，2型糖尿病患者血清中GAS5的表达低于健康对照组( t＝4.632, P<0.01)，miR-29、miR-96和miR-208高于健康对照组( t分别为7.832、9.164、12.359，均 P<0.01)，而且GAS5水平与miR-29、miR-96和miR-208呈负相关( r分别为-0.50、-0.47、-0.70)。慢病毒过表达GAS5导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加，胰岛素含量增加。相反，GAS5的下调导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛素含量显著降低。利用生物信息学工具，筛选了miR-29、miR-96和miR-208作为GAS5的靶点，并通过双荧光素酶报告基因实验验证GAS5可以通过靶向抑制miR-96、miR-29和miR-208的表达发挥作用。shGAS5显著降低INSR、IRS-1和PI3K的表达( P分别为0.022、0.038、0.009)，而过表达GAS5在mRNA和蛋白水平上均显著上调INSR、IRS-1和PI3K的表达( P分别为0.024、0.045、0.016)。 结论:GAS5可能通过靶向调控miR-29、miR-96和miR-208的表达，进而对这些miRNA可能存在的负调控因子INSR、IRS-1和PI3K等的表达进行正向调控，刺激胰岛β细胞分泌胰岛素。

近年来，对胰岛素样生长因子(IGF)系统研究的越来越深入。除了其经典的调节细胞增生和分化、增强代谢活性、抗细胞凋亡、促细胞生存的作用外，IGF系统在肿瘤生长、细胞自噬、长寿与衰老、氧化应激方面的作用更成为当今研究的热点。针对IGF信号通路中相应靶点的药物也逐渐进入试验阶段。本文简要概括了IGFs及其主要信号通路在生长发育和疾病发生中的重要作用，对该系统成分与角膜疾病关系及应用现状进行综述，探讨其存在的问题和前景。

目的:探讨长链非编码RNA 钾电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录物1（Kcnq1ot1）通过调节miR-92a-1-5p影响胰岛β细胞胰岛素分泌的作用机制。方法:自2020年6至12月在中山大学附属第三医院招募初诊2型糖尿病（T2DM）患者25例，同时招募年龄匹配且无糖尿病的受试者21例作为对照组。收集受试者的年龄、体重指数（BMI），检测空腹血糖（FPG）和糖化血红蛋白（HbA 1c），采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测血清中Kcnq1ot1表达量，并分析其与FPG和HbA 1c的相关性。12只5周龄雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为高脂饮食（HFD）组（ n=6）和正常饮食（CD）组（ n=6），喂养20周后，提取原代胰岛细胞RNA。将体外培养的Min6细胞分为牛血清白蛋白（BSA）组和棕榈酸（PA，400 μmol/L）组；按照是否转染Kcnq1ot1 siRNA分为si-NC组和si-Kcnq1ot1组；按照是否转染miR-92a-1-5p的模拟物或抑制剂分为：模拟物对照组、模拟物组、抑制剂对照组和抑制剂组；按照转染Kcnq1ot1/NC siRNA后是否加入抑制剂分为si-NC+抑制剂对照组、si-Kcnq1ot1+抑制剂对照组、si-NC+抑制剂组和si-Kcnq1ot1+抑制剂组。采用qRT-PCR检测Kcnq1ot1、miR-92a-1-5p和胰岛素转录本1（ Ins1）、胰岛素转录本2（ Ins2）、胰岛素受体（ Insr）、NK6同源盒蛋白1（ Nkx6.1）、胰岛素受体底物1（ Irs1）和神经生成素3（ Ngn3）mRNA水平；Western blotting检测胰岛素和Insr蛋白表达水平；葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛素分泌水平；双荧光素酶报告基因实验验证Kcnq1ot1与miR-92a-1-5p之间的直接作用关系。各组间指标的差异比较采用独立样本 t检验、方差分析，采用Pearson相关分析法分析受试者Kcnq1ot1表达量与FPG和HbA 1c的相关性。 结果:T2DM患者血清中Kcnq1ot1的表达量较对照组显著下调（ P<0.01），且Kcnq1ot1的表达量与FPG和HbA 1c呈负相关关系（ r=-0.52、-0.49，均 P<0.05）。与CD组相比，HFD组小鼠胰岛中Kcnq1ot1表达量下调（ P<0.001）。在Min6细胞中，与BSA组相比，PA组细胞中Kcnq1ot1表达量下调（ P<0.01）；与si-NC组相比，si-Kcnq1ot1组葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低（ P<0.05），且 Ins1、 Ins2、 Insr、 Nkx6.1、 Irs1和 Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均降低（ P<0.05）；与模拟物对照组相比，模拟物组葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低（ P<0.05），且 Ins1、 Ins2、 Insr、 Nkx6.1、 Irs1和 Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均降低（ P<0.05）；与抑制剂对照组相比，抑制剂组葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平升高（ P<0.05），且 Ins1、 Ins2、 Insr、 Nkx6.1、 Irs1和 Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均升高（ P<0.05）。双荧光素酶报告实验显示，模拟物和Kcnq1ot1-WT质粒共转染细胞后，Kcnq1ot1-WT荧光素酶活性降低（ P<0.05）；抑制剂和Kcnq1ot1-WT质粒共转染细胞后，Kcnq1ot1-WT的荧光素酶活性显著升高（ P<0.05）。与si-NC组相比，si-Kcnq1ot1组miR-92a-1-5p表达升高（ P<0.05）；与si-Kcnq1ot1+抑制剂对照组相比，si-Kcnq1ot1+抑制剂组Min6细胞中的 Ins1、 Ins2、 Insr、 Irs1和 Ngn3转录水平及胰岛素和Insr的蛋白水平升高（ P<0.05）。 结论:长链非编码RNA Kcnq1ot1可能通过靶向调控miR-92a-1-5p影响胰岛β细胞功能。

目的:分析肥胖症内脏脂肪组织中环状RNA(circRNA)表达水平。方法:留取北京朝阳医院2020年1月至9月收治患者的内脏脂肪组织，根据体重指数，分肥胖(>32.5 kg/m 2)和正常组(<20.0 kg/m 2)，选取10份(肥胖组6份，正常组4份)行全转录组测序，比较circRNA表达水平并利用生物信息学方法分析其功能。以Log2(Fold change>1)且 P<0.05筛选差异化表达的circRNA，以 P<0.05为条件筛选富集的通路和分子功能。 结果:与正常组比较，肥胖组有52个差异表达的circRNA[Log2 (Fold change)>1，且 P<0.05]，其宿主基因主要富集在"胰岛素抵抗"、"肿瘤坏死因子通路"和"细胞因子-因子受体通路"等通路( P<0.05)，筛选出上述通路中的关键基因，如趋化因子(CX3CL1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、白细胞介素6(IL-6)、胰岛素受体底物2(ISR2)等，这些基因与慢性炎性反应密切相关。 结论:circRNAs可能通过调控慢性炎性反应在肥胖症发生发展中发挥作用。

目的:探讨miR-96-5p在麦芽酚铝致PC12细胞凋亡中的影响及其作用机制。方法:于2021年1月，取对数生长期的PC12细胞，分为空白对照组和低、中、高剂量组，分别采用0、100、200、400 μmol/L的麦芽酚铝处理24 h，收集各组细胞，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，qRT-PCR检测miR-96-5p和胰岛素受体底物1（IRS1）mRNA表达水平，Western blotting检测半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）、活化型半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved-caspase3）、IRS1、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、磷酸化葡萄糖合成激酶3β（p-GSK3β）蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p和IRS1的靶向结合关系。采用miR-96-5p inhibitor转染PC12细胞24 h构建miR-96-5p抑制细胞和阴性对照细胞，将细胞分为空白对照组、阴性对照组、铝染毒组、铝染毒+阴性对照组、铝染毒+miR-96-5p抑制组、miR-96-5p抑制组，采用miR-96-5p inhibitor和IRS1 siRNA转染PC12细胞24 h后将细胞分为铝染毒+miR-96-5p抑制+阴性对照组和铝染毒+miR-96-5p抑制+IRS1抑制组，对照组细胞用完全培养基培养，染毒组细胞采用200 μmol/L麦芽酚铝处理24 h，收集各组细胞，检测细胞凋亡率、miR-96-5p和IRS1 mRNA表达水平以及Caspase3、Cleaved-caspase3、IRS1、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达水平。结果:染毒24 h后，与空白对照组和低剂量组比较，中、高剂量组PC12细胞的凋亡率、Caspase3和Cleaved-caspase3蛋白相对表达量，以及miR-96-5p相对表达量均明显升高，IRS1 mRNA相对表达量明显下降，IRS1、p-AKT和p-GSK3β蛋白相对表达量明显下降（ P<0.05）。Targetscan预测和双荧光素酶报告实验均证明IRS1是miR-96-5p的直接靶基因。在转染实验中，与铝染毒组比较，铝染毒+miR-96-5p抑制组PC12细胞凋亡率以及Caspase3和Cleaved-caspase3蛋白相对表达量均下降，miR-96-5p的相对表达量明显下降，IRS1 mRNA和IRS1、p-AKT、p-GSK3β蛋白的相对表达量均升高（ P<0.05）。在IRS1低表达实验中，与铝染毒+miR-96-5p抑制+阴性对照组比较，铝染毒+miR-96-5p抑制+IRS1抑制组中PC12细胞凋亡率、Caspase3和Cleaved-caspase3蛋白相对表达量明显增加，IRS1 mRNA相对表达量以及IRS1、p-AKT和p-GSK3β蛋白相对表达量明显下降（ P<0.05）。 结论:miR-96-5p表达增加从而靶向抑制IRS1可能是麦芽酚铝染毒导致PC12细胞凋亡的机制之一。

目的:观察痰瘀同治法对糖尿病模型大鼠心肌c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的干预机制。方法:选取健康SPF级雄性SD大鼠50只，采用单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液55 mg/kg建立糖尿病模型。继续喂养3周后，将造模成功大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、阿拉氯胺组、化瘀组、化痰组、痰瘀同治组，每组6只。化痰组、化瘀组、痰瘀同治组分别灌胃小陷胸汤（4.05 g/kg）、血府逐瘀汤（7.02 g/kg）、抵当陷胸汤（8.10 g/kg），阿拉氯胺组灌胃阿拉氯胺（3 mg/kg）。连续灌药8周，采用HE染色观察各组大鼠心肌组织形态学改变；Masson染色观察大鼠心肌间质胶原沉积情况；免疫组化染色检测心肌组织中JNK1蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织中JNK1、胰岛素受体底物-1（IRS-1）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）mRNA水平；Western blot法检测IRS-1、p-Akt、NLRP3蛋白表达。结果:模型组大鼠心肌细胞排列混乱，细胞肥大，纹理模糊，间质有炎性浸润，胶原纤维增多，出现局灶性坏死；各给药组均可不同程度地改善纤维化、炎性浸润状况，减少心肌胶原沉积。与模型组比较，痰瘀同治组JNK1、NLRP3 mRNA及蛋白表达降低（ P<0.01），IRS-1 mRNA水平及蛋白表达升高（ P<0.01），p-Akt蛋白表达升高（ P<0.01）。 结论:痰瘀同治法可有效改善糖尿病大鼠心肌病变，且效果较单纯使用化痰法或化瘀法更佳，其机制可能与抑制JNK信号通路激活，下调JNK1、NLRP3蛋白，上调IRS-1、Akt蛋白表达有关。

目的:探讨长链非编码RNA AW112010(lncRNA AW112010)是否可能通过miR-204/POU类同源盒2(POU2F2)信号通路改善衰老脂肪细胞的胰岛素抵抗。方法:体内实验：将C57BL/6小鼠按体重分成年轻对照组(4月龄)、衰老模型组(18月龄)；实时荧光定量PCR及Western印迹法检测附睾脂肪组织中lncRNA AW112010、miR-204-5p、POU2F2、衰老相关指标(p16、p21)及胰岛素信号通路基因[胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)]的表达量。体外实验：用阿霉素诱导3T3-L1衰老脂肪细胞模型，β-gal染色观察细胞衰老，成功构建miR-204抑制剂及miR-204模拟物的小干扰RNA，转染3T3-L1脂肪细胞。结果:实时荧光PCR与Western印迹结果表明，与年轻小鼠比较，衰老小鼠附睾脂肪组织中AW112010的表达水平增高，而miR-204-5p的表达水平降低；衰老小鼠附睾脂肪组织中POU2F2、p16、p21的表达水平增高，而INSR、IRS1、PI3K、GLUT4 mRNA及蛋白的表达水平降低。β-gal染色结果表明，阿霉素诱导的3T3-L1衰老脂肪细胞数量明显增多，且与对照组相比，阿霉素诱导的衰老脂肪细胞中AW112010、POU2F2、p16、p21的表达量增高，而miR-204-5p、INSR、IRS1、PI3K、GLUT4的表达量降低，培养基中葡萄糖的剩余量增多。与对照组相比，miR-204过表达后，衰老指标p16、p21及靶基因POU2F2的表达量降低；INSR、GLUT4的表达量增高。结论:衰老小鼠脂肪细胞中上调的lncRNA AW112010可能通过靶向miR-204-5p/POU2F2/IRS1导致胰岛素抵抗。

百日咳毒素(pertussis toxin，PTx)是百日咳鲍特菌产生的重要毒素，是百日咳发病过程中重要的致病因子。研究显示，与PTx互作蛋白的分子量差异较大，从人淋巴细胞表面的43 kD蛋白到胰岛素分泌细胞表面的200 kD蛋白不等。已经明确PTx可与宿主细胞表面的N连接寡糖糖蛋白、唾液酸糖蛋白类因子以及一些糖蛋白(如触珠蛋白和胎球蛋白)、G D1a糖脂相互作用，尤其与其受体Gi蛋白互作，致胞内cAMP水平上升，引起各种生理反应。但目前对PTx在胞内的其他修饰底物和互作蛋白认识有限，严重阻碍了对PTx如何调控宿主细胞的其他信号通路和生理功能的深入理解。

目的 探讨地黄饮子通过磷脂酰肌醇三激酶-蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路双重调节db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常,探究地黄饮子多途径发挥治疗糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)作用的分子机制.方法 10只db/m小鼠作为空白组,30只db/db小鼠随机分为模型组、地黄饮子组(地黄饮子,30.03 g/kg)、阳性对照组(二甲双胍,0.61 g/kg).药物干预4周,每周检测小鼠体质量、空腹血糖.末次给药后进行口服糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)及胰岛素耐量试验(insulin tolerance test,ITT)并计算曲线下面积(area under the curve,AUC);葡萄糖氧化酶法检测小鼠视网膜葡萄糖含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠视网膜胰岛素含量;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠视网膜组织病理改变;免疫组化法检测视网膜组织胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS1)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测视网膜PI3K、Akt、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated kinase,ERK)、c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kainse,JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p3 8抗体(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)mRNA表达量.结果 与空白对照组相比,模型组小鼠空腹血糖显著升高(P＜0.01);OGTT、ITT试验各时间点血糖均升高(P＜0.05,P＜0.01);视网膜组织水肿,新生血管生成;视网膜葡萄糖、胰岛素含量升高(P＜0.01);IRS1蛋白表达量显著升高而GLUT4蛋白表达量显著降低(P＜0.01);PI3K、Akt mRNA 表达量降低(P＜0.05,P＜0.01)、ERK、JNK、p38MAPK mRNA 表达量升高(P＜0.05,P＜0.01).地黄饮子和阳性对照药物均可降低小鼠OGTT、ITT试验AUC(P＜0.01);改善视网膜水肿,减少新生血管;降低视网膜葡萄糖、胰岛素含量(P＜0.05,P＜0.05);降低小鼠视网膜IRS1蛋白表达,提高GLUT4蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01)、升高PI3K、Akt mRNA表达量,降低ERK、JNK、p38MAPK mRNA表达量(P＜0.05,P＜0.01).结论 地黄饮子可通过激活PI3K/Akt信号通路和抑制MAPK信号通路双重调节GLUT4表达从而改善db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常.