目的:探讨奥曲肽联合双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊治疗急性胰腺炎的临床效果及其对患者肠黏膜屏障功能的影响。方法:将2019年1月至2021年2月河南省郑州大学第一附属医院收治的132例急性胰腺炎患者作为研究对象，按随机数字表法将分为对照组（66例，奥曲肽治疗）和观察组（66例，奥曲肽联合双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊治疗），均治疗7 d。比较两组临床症状缓解时间、临床疗效、治疗前后肠黏膜屏障功能、血清胰酶水平及不良反应情况。结果:与对照组比较，观察组患者腹痛、呕吐、发热症状缓解时间及血、尿淀粉酶恢复时间均明显缩短（均 P<0.05）。观察组患者治疗总有效率高于对照组（ P<0.05）。治疗后，两组患者血清内毒素、血浆D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）及血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIPA）水平均低于治疗前，其中观察组更低（均 P<0.05）。两组总不良反应发生率比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:奥曲肽联合双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊可明显降低急性胰腺炎患者血清AMY、LIPA水平，增强肠黏膜屏障功能，改善腹痛、发热等症状，安全有效。

目的:比较特应性皮炎患者与健康对照皮肤样本的单细胞转录组测序数据，探讨特应性皮炎皮损中炎症性树突状表皮细胞（IDEC）的免疫代谢特征。方法:对既往发表的8例特应性皮炎患者和7例健康对照的单细胞测序数据进行深入挖掘，利用标记基因筛选出IDEC，获取两组IDEC的差异表达基因，并对差异表达基因进行京都基因组百科全书富集分析，使用Seurat中的"AddModuleScore"功能对两组IDEC的炎症通路和代谢通路进行评分，Mann-Whitney秩和检验进行统计分析；通过上述评分以及R语言中的"cor"和"cor.test"函数来评估IDEC的代谢通路与炎症通路之间的相关性。结果:特应性皮炎患者皮损中大量浸润的IDEC高表达Th2趋化因子（CCL17）、抗原提呈相关基因（CD1B）、内皮生长相关基因（TYMP、AREG）、炎症相关基因（S100A8、S100A10、LGALS1）、基质纤维化相关基因（MMP12、ADAM19）、代谢相关基因（乳酸脱氢酶、脂肪酶A、谷氨酰胺合成酶）、危险信号传导相关基因（HSPA1B、HSP90AA1、HSPB1、HSPH1）。特应性皮炎患者IDEC的葡萄糖能量代谢、糖酵解代谢、核苷酸代谢、谷氨酸和谷氨酰胺代谢、氨基酸代谢活性显著上调，并且与Th2炎症水平呈正相关；氧化磷酸化和脂代谢活性显著下调，其中脂代谢活性与Th2炎症水平呈负相关。谷氨酰胺代谢和葡萄糖能量代谢活性与Th22炎症水平呈正相关；Th1炎症水平和Th17炎症水平与磷酸戊糖代谢、核苷酸代谢、糖酵解代谢和氨基酸代谢等活性呈负相关。结论:特应性皮炎患者皮损中IDEC的炎症和代谢相关基因调节异常，多条代谢通路显著上调，其中糖酵解代谢活性与Th2炎症水平相关性最强。

目的:探讨连续性肾脏替代治疗(CRRT)联合限制性液体复苏在重症急性胰腺炎(SAP)治疗中的应用价值.方法:选取 SAP患者 104 例,随机分为对照组(50 例)和试验组(54 例).对照组接受限制性液体复苏治疗,试验组接受CRRT联合限制性液体复苏治疗.比较两组临床疗效,血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素-7(IL-7)、Toll样受体 4(TLR4)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平,胃肠动力水平,以及感染、局部并发症发生情况及住院时间.结果:试验组总有效率高于对照组(P<0.05).治疗后,两组 AMY、LIPA、LDH、IL-7、TLR4 及MCP-1 水平较治疗前下降,且试验组低于对照组(均P<0.05).与对照组比较,试验组治疗后肠鸣音恢复时间较短,胃肠减压引流量及肛门排气率较高(均P<0.05).试验组感染及局部并发症发生率低于对照组,且住院时间较对照组短(均P<0.05).结论:CRRT联合限制性液体复苏可有效改善 SAP 患者临床症状,降低 AMY、LIPA、LDH 及炎症因子水平,促进胃肠动力恢复,减少感染及局部并发症的发生,缩短住院时间.

背景与目的:芍药苷是传统中药抗炎的重要药物,其具有广谱抗炎作用,而在急性坏死性胰腺炎(ANP)相关肾损伤中其是否发挥抗炎作用从而保护肾功能尚不明确,因此,本研究探讨芍药苷对ANP相关肾损伤中的影响及作用机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、ANP模型组(ANP组)、ANP模型+芍药苷处理组(芍药苷组),ANP模型采用胆胰管逆行注射5%的牛磺胆酸钠诱导,芍药苷在造模后通过股静脉注射.首先观察不同剂量芍药苷(50、100、150 mg/kg)对ANP大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)及肝功能指标的影响,分析芍药苷的最适剂量.随后采用最适剂量的芍药苷进行干预,检测造模后不同时间点(3、6、12 h)各组大鼠胰腺与肾脏组织病理变化、血清炎性指标水平、AMY与LIPA及尿素氮(BUN)与肌酐(Cr)水平.在各组造模后12 h肾脏组织中,用免疫组化检测NF-κB与caspase-3的表达、TUNEL法检测细胞凋亡、Western blot检测p38与磷酸化p38(p-p38)的表达.结果:量效关系分析结果,100 mg/kg为芍药苷的最适剂量.后续实验结果显示,与假手术组比较,ANP组与芍药苷组造模后均出现不同程度的ANP与肾损伤病理变化(病理评分增加)、炎性指标(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平升高、血清酶学指标(AMY、LIPA)以及肾功能指标(BUN、Cr)升高,且均随着时间延长而加剧,但芍药苷组的各项指标在各时间点均明显低于ANP组(均P<0.05).在造模后12 h肾脏组织中,ANP组与芍药苷组NF-κB与caspase-3表达、凋亡细胞数、p-p38/p38比例均明显升高,但芍药苷组的升高程度明显低于ANP组(均P<0.05).结论:芍药苷有明显抗ANP相关肾损伤作用,其作用机制一方面在于抑制ANP本身的进展,另一方面可能通过降低p38通路活性抑制NF-κB相关炎症因子所致的级联瀑布反应从而减轻ANP相关肾损伤.

为了研究粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)脂肪酶lipA中的Ca2+对酶活力的影响,采用定点突变的方法对平衡Ca2+的位点D388进行定点突变,对突变体进行诱导表达后,纯化目的蛋白并进行酶学性质分析.与野生酶相比,突变酶的最适温度由40℃降低到25℃,最适pH值由8.5降到8.0,T1/2值比野生酶提高了2℃.由此可知,该Ca2+对脂肪酶lipA酶学性质有着至关重要的作用.

目的 探讨炎症标志物与急性胰腺炎(AP)严重程度的关系.方法 对212例AP患者进行回顾性病例对照研究.根据临床诊断标准将患者分为轻型急性胰腺炎(MAP)组(n=138)和重型急性胰腺炎(SAP)组(n=74),对比两组患者淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)及炎症标志物红细胞体积分布宽度(RDW)、降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)的变化情况.结果 AP患者AMY、LIPA均明显增高;RDW、PCT和CRP在SAP组与MAP组对比,均有不同程度的增高,其中CRP、PCT在两组之间升高水平相似(P>0.05),而RDW在SAP组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 RDW、PCT和CRP在SAP患者与MAP患者对比,均有不同程度的增高,其中RDW明显增高.RDW与疾病的严重程度有关,可能是今后预测AP严重程度的一个有价值的血液学标志物.联合检测AMY、LIPA、RDW、PCT及CRP对重症胰腺炎早期诊断有较好的临床利用价值.

对荚壳伯克氏菌PG1(Burkholderia glumae PG1)基因组中的脂肪酶操纵子lipAB片段进行直接克隆,构建含有脂肪酶基因的分泌表达载体,实现其在防御假单胞菌Pf-5(Pseudomonas protegens Pf-5)中的异源表达,并研究重组工程菌的胞外脂肪酶活性.利用Red/ET直接克隆技术获得克隆载体p15A-cm-lipAB;再通过亚克隆技术构建重组表达载体pBBR1-km-lipAB和pBBR1-km-Papra-lipAB,将这两个表达载体分别电转至Pf-5中,通过卡那霉素或者阿伯拉霉素抗性筛选得到转化子,以三丁酸甘油酯平板扩散法和对硝基苯酚法检测脂肪酶酶活,并通过实时荧光定量PCR检测启动子的替换对lipA表达的影响.本研究从PG1中成功克隆了脂肪酶操纵子lipAB(GenBank accession number:AJK49931.1 and AJK49932.1);成功构建了重组工程菌Pf-5/pBBR1-km-lipAB和Pf-5/pBBR1-km-Papra-lipAB,并成功检测到两株工程菌的胞外脂肪酶活性;以LB培养基培养至24 h时,启动子优化后lipA基因表达量是原始水平的2.1倍;在LB培养基摇瓶发酵至66 h时,Pf-5/pBBR1-km-lipAB的脂肪酶酶活最高且为13.51 U/mL,而Pf-5/pBBR1-km-Papra-lipAB的酶活为46.85 U/mL,是Pf-5/pBBR1-km-lipAB的3.47倍.初步实现基因lipA在Pf-5中的表达,发现组成型启动子Papra比lipAB的原始启动子PlipAB效率更高,为将来实现规模化生产奠定了技术基础.

目的 建立肥胖合并急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠模型,观察异甘草酸镁对大鼠肝脏的保护作用.方法 24只肥胖雄性SD大鼠,随机分为4组,分别为对照组(H-control组,n=6)、假手术组(H-SO组,n=6)、ANP组(H-ANP组,n=6)和异甘草酸镁干预组(H-ANPT组,n=6).H-ANP组和H-ANPT组大鼠通过胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠方法建立ANP模型,术后12 h剖杀取材.全自动生化仪测量血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)、血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;光镜下观察大鼠胰腺、肝脏病理变化;免疫荧光法检测肝脏MPO、IL-1β水平;免疫组化法检测肝脏Caspase-3和NF-κB水平.结果 (1)与H-SO组比较,H-ANP组胰腺、肝脏组织损伤明显加重(P<0.05);H-ANPT组胰腺、肝脏损伤与H-ANP组相比明显改善(P<0.05).(2)与H-SO组比较,H-ANP组血清AMY、LIPA、AST及ALT水平较H-SO组明显升高(P<0.05);H-ANPT组上述血清指标与H-ANP组相比明显下降(P<0.05).(3)与H-ANP组相比,H-ANPT组血清TC和TG水平明显下降(P<0.05).(4)与H-SO组比较,H-ANP组过氧化物酶染色数量、IL-1β明显增加(P<0.05);H-ANPT组上述指标与H-ANP组相比明显降低(P<0.05).(5)与H-SO组比较,H-ANP组Caspase-3、NF-κB明显增加(P<0.05);H-ANPT组上述指标与H-ANP组相比明显降低(P<0.05).结论 异甘草酸镁对肥胖大鼠ANP时肝脏损伤具有保护作用.

目的 探讨糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)抑制剂TDZD-8对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠相关肾损伤保护作用的机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、ANP模型组、TDZD-8干预组和TDZD-8对照组,每组20只.采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备大鼠ANP模型;Sham组胰胆管内注入等量生理盐水.TDZD-8干预组和TDZD-8对照组于制模或假手术前30 min经股静脉注射GSK-3β抑制剂TDZD-8(1 mL/kg);ANP模型组和Sham组则注射等量10%二甲基亚砜(DMSO).术后12 h取大鼠下腔静脉血、胰腺和肾脏组织,测定血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)、血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,并观察胰腺、肾脏组织病理学改变和肾脏超微结构改变,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL-1β、IL-6)含量,免疫组化法检测核转录因子- κB p65(NF-κB p65)在肾脏中的定位表达,蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肾脏组织GSK-3β、磷酸化GSK-3β〔p-GSK-3β(Ser 9)〕、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和IL-10的蛋白表达.结果 与Sham组比较,ANP模型组血清学指标、炎性因子水平明显升高,胰腺和肾脏组织病理损伤严重,组织病理学评分明显升高,肾脏组织细胞核内NF-κB p65表达增强,GSK-3β、TNF-α、ICAM-1、iNOS蛋白表达明显增强, p-GSK-3β(Ser 9)、IL-10蛋白表达明显减弱.与ANP模型组比较,TDZD-8预处理可显著降低ANP大鼠血清学指标和炎性因子水平〔AMY(kU/L):5.60±0.30比10.07±0.34,LIPA(U/L):1 111.0±110.8比2 375.0±51.1, SCr(μmol/L):47.38±1.48比72.50±2.43,BUN(mmol/L):17.6±1.0比26.0±1.0,IL-1β(ng/L):195.90±5.50比332.40±38.29,IL-6(ng/L):246.10±26.74比385.30±32.19,均P＜0.01〕,减轻胰腺和肾脏组织病理损伤〔组织病理评分(分):7.1±0.4比12.1±0.3,301.2±7.5比433.5±13.8,均P＜0.01〕及肾脏细胞超微结构损伤,细胞核内NF-κB p65表达明显减少,肾脏组织中p-GSK-3β(Ser 9)表达明显增加,且阻断GSK-3β活性能够抑制TNF-α、ICAM-1、iNOS的表达,提高IL-10的表达,而GSK-3β表达差异无统计学意义.TDZD-8对照组各项指标与Sham组比较差异均无统计学意义.结论 GSK-3β抑制剂TDZD-8可有效导致ANP大鼠肾脏GSK-3β磷酸化而使其活性受到抑制,从而抑制肾脏NF-κB炎症通路激活及中性粒细胞的募集,进一步抑制其下游炎性介质的释放,减轻肾脏炎症及病理损伤.

[目的]中温伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA在工业领域具有重要的应用价值.利用蛋白质工程技术来提高其热稳定性,对开发脂肪酶LipA酶制剂及提高其应用范围及应用效果,具有重要的意义.[方法]利用生物信息学软件Castp、Voronoia和Cave分析LipA分子中存在的空腔及其组成氨基酸残基;利用FoldX软件构建上述氨基酸残基的突变体电子文库,并基于空腔效应(体积变小)、自由能变化值(降低)和空间结构特点等对前述突变体电子文库进行筛选.从突变体电子文库中选择具有代表性的突变体,通过基因工程技术,引入突变.经诱导表达后,实验验证并筛选出热稳定性的突变体.[结果]构建了一个由58个突变体组成的电子文库;并对其中17个代表性的突变体进行了实验验证;筛选到2个热稳定性有明显提高的突变体LipA-His15Pro和LipA-Ala210Val;其叠加突变体LipA-His15Pro/Ala2 10Va1 的T5012较野生型LipA提高了8℃,在55℃下的半衰期较野生型脂肪酶LipA提高了23.1倍.[结论]基于空腔填充技术构建热稳定性伯克霍尔德菌胞外脂肪酶LipA突变体,是一种行之有效的策略.