常见的小儿脑损伤主要包括新生儿缺血缺氧性脑病、创伤性脑损伤、脑瘫、脑出血等,这类疾病在临床上较难治疗,可引起不可逆的损伤,导致严重的后遗症.脑损伤发病机制复杂,普遍认为神经炎症、缺血、细胞凋亡是引起脑损伤的关键因素.基于小儿大脑未成熟时有强大的神经重塑性,故小儿脑损伤已成为再生医学上有吸引力且有发展前景的研究方向.来自人脐血间充质干细胞来源的外泌体(hUMSC-Exos)在无细胞治疗方面隐藏着巨大的潜能,在不久的将来是替代细胞和药物治疗的新策略和新突破.本文将以hUMSC-Exos通过介导不同的信号通路及表达因子等分子机制减少神经炎症、促进神经再生、刺激血管生成、抗细胞凋亡修复脑损伤的过程展开综述.

目的:研究人脐带间充质干细胞条件培养基（CM）对宫内感染致新生大鼠肺损伤模型的影响。方法:选取孕龄20 d SD大鼠18只，随机分为3组（ n=6）。NS组孕20、21 d连续2 d腹腔注入生理盐水1 ml，所生幼鼠随机选取30只新生鼠，于第3天腹腔注射生理盐水0.1 ml。LPS组孕20、21 d连续2 d予腹腔注入LPS（大肠杆菌内毒素，2.5 mg·kg -1·d -1），随机选取30只新生鼠，于第3天腹腔注入0.1 ml生理盐水。LPS+CM组孕20、21 d连续2 d予腹腔注入LPS（2.5 mg·kg -1·d -1），所生幼鼠随机选取30只新生鼠，于第3天腹腔注入CM 0.1 ml。3组新生鼠分别于7、14、21 d随机选取10只麻醉处死，观察各组3个时间点新生鼠体质量、肺重、肺重/体质量；HE染色观察新生鼠肺形态学和鼠肺辐射状肺泡计数（RAC）；液相芯片技术检测各组新生鼠血清中IL-6、IL-10、TNF-α变化。 结果:LPS组新生鼠7、14、21 d体质量较NS组、LPS+CM组均减轻，3组新生鼠体质量随生后日龄不断增加（均 P<0.05）；LPS组新生鼠14、21 d肺重较NS组和LPS+CM组减轻，3组肺重随生后日龄不断增加（均 P<0.05）；LPS组新生鼠7 d肺重/体质量较NS组、LPS+CM组升高（均 P<0.05），14 d仅较NS组升高（ P<0.05），21 d仅较LPS+CM组降低（ P<0.05），3组新生鼠肺重/体质量随生后日龄不断下降（均 P<0.05）。肺组织HE染色显示NS组新生鼠肺组织结构完整，肺泡扩张均匀，肺泡间隔未见明显增厚，间隔内极少量炎细胞浸润，肺泡腔清晰；LPS组新生鼠肺泡数目减少，肺泡体积增大，肺泡间隔减少，部分肺泡间隔增厚，间隔内炎细胞浸润；LPS+CM组新生鼠肺泡数目、体积、肺泡间隔及间隔炎细胞浸润状态均较LPS组好转，损伤程度减轻。7 d LPS组新生鼠肺组织的RAC仅较NS组减少（ P<0.05），14、21 d较NS组、LPS+CM组均减少（均 P<0.05），3组新生鼠肺组织RAC随生后日龄不断增加（均 P<0.05）。与NS组比较，LPS组新生鼠血清IL-6在7、14、21 d升高（均 P<0.05），LPS+CM组则在7、21 d升高（均 P<0.05），LPS+CM组新生鼠血清IL-6在14、21 d较LPS组降低（均 P<0.05），3组新生鼠血清IL-6随生后日龄不断下降（均 P<0.05）。与NS组、LPS+CM组比较，LPS组新生鼠血清IL-10在7 d时降低（均 P<0.05），3组新生鼠血清IL-10随生后日龄不断下降（均 P<0.05）。LPS组血清TNF-α在7、14、21 d较NS组升高（均 P<0.05），14 d较LPS+CM组升高（ P<0.05），3组TNF-α随生后日龄不断增加（均 P<0.05）。 结论:通过孕20、21 d大鼠腹腔注射LPS能够成功构建宫内感染致新生大鼠肺损伤模型。宫内感染致新生大鼠炎症细胞因子发生变化，促炎因子表达量增加，抑炎因子表达量下降，CM干预对宫内感染致新生大鼠肺损伤具有一定保护作用。

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)介导的间充质干细胞外泌体(MSC-Exos)对高糖诱导损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物学功能和细胞焦亡的影响。方法:将人脐血间充质干细胞(hUCBMSCs)用400 mg/L的AS-IV干预后提取外泌体，行外泌体形态和特异性标志物鉴定。将HUVECs用30 mmol/L的葡萄糖干预制备成高糖诱导HUVECs损伤模型。将高糖受损HUVECs随机分为实验组和模型组，分别用100 μg/ml的MSC-Exos和等体积的PBS液干预；同时设置空白对照组。采用CCK-8细胞增殖试验、黏附能力测定试验、Matrigel体外成管试验、划痕试验检测AS-IV介导的MSC-Exos对HUVECs增殖、黏附、成管、迁移能力的影响；采用Western blot、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组中焦亡相关分子Caspase-1、GSDMD和NLRP3蛋白及其mRNA表达情况。结果:高糖导致HUVECs细胞增殖、黏附数、成管数、迁移宽度较空白组下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；而Caspase-1、GSDMD、NLRP3蛋白及其mRNA表达增加，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。而用AS-IV介导的MSC-Exos干预下，HUVECs的细胞增殖、黏附数、成管数、迁移宽度较模型组明显上升，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；Caspase-1、GSDMD、NLRP3蛋白及其mRNA表达降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:AS-IV介导的MSC-Exos可明显改善高糖诱导损伤内皮细胞的生物学功能，其作用机制可能与抗细胞焦亡有关。

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对人脐血间充质干细胞(hUCBMSCs)体外增殖和成管分化的影响，为进一步研究AS-Ⅳ作用于间充质干细胞介导的血管新生奠定基础。方法:从足月健康新生儿脐带血中提取并传代培养得到hUCBMSCs，分别进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定，同时对hUCBMSCs表面抗原CD44，CD73，CD105进行流式细胞仪鉴定。将鉴定成功的hUCBMSCs分别在不同浓度梯度的AS-Ⅳ(0、50、100、200、300、400 mg/L)干预下培养，确定AS-Ⅳ促hUCBMSCs增殖的最佳浓度。另将hUCBMSCs随机分为实验组和对照组，实验组用最佳浓度的AS-Ⅳ干预，对照组用等体积的PBS液处理。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测AS-Ⅳ对hUCBMSCs增殖的影响，另通过Matrigel体外成管实验检测AS-Ⅳ对hUCBMSCs成管分化的影响，并用免疫荧光检测hUCBMSCs向内皮细胞分化后CD31、血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果:光镜下hUCBMSCs细胞边缘清晰，排列整齐，呈典型的长梭状结构。流式细胞仪证实hUCBMSCs细胞表面有间充质干细胞的表面标志物。AS-Ⅳ促进hUCBMSCs增殖的最佳浓度为300 mg/L。对照组和实验组的OD值分别为(0.51±0.01)和(0.98±0.05)，差异具有统计学意义( t＝15.96， P<0.05)，显示实验组增殖能力增强。Matrigel成管实验显示，与对照组比较，实验组体外成管密度更大，体外形成管网状结构的长度更长，差异具有统计学意义[(629.80±52.94)mm vs (110.36±13.19)mm， P<0.05]。与对照组相比，实验组AS-Ⅳ诱导hUCBMSCs成管分化后CD31和vWF的表达均增多，差异有统计学意义( t＝13.64，13.18， P<0.05)。 结论:AS-Ⅳ对人脐血间充质干细胞无毒性，且能改善其增殖功能，并诱导hUCBMSCs向内皮细胞成管分化。

目的:优化脐带血单个核细胞的分离方法，培养、纯化及鉴定脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)，并观察其生物学特性，探讨单份和混合UCB-MSCs的区别。方法:采用四联袋方法和试管方法分离脐带血单个核细胞，比较两种方法分离后单个核细胞的回收率、细胞数及红细胞混入量。鉴定UCB-MSCs向神经样细胞横向分化的能力。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析单份组和混合组培养液上清中白细胞介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)含量。符合正态分布并方差齐的，根据数据类型应用参数检验中的单因素方差分析或 t检验，不符合正态分布的应用非参数检验中秩和检验。 结果:试管法和四联袋法分离的单个核细胞回收率分别为(60.23±6.34)%、(71.92±11.30)%( P<0.05)。试管法和四联袋法分离后单个核细胞(MNC)数量分别为(6.12±1.21)×10 7、(9.29±3.11)×10 7个( P<0.05)。混合组的培养液上清中IL-2和IFN-γ含量高于单份组。单份组和混合组的IL-2水平分别为(0.52±0.13)、(1.50±0.23) pg/ml( P<0.05)；单份组和混合组IFN-γ水平分别为(43.16±4.75)、(56.07±6.67) pg/ml( P<0.05)。巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)染色均为阳性表达。 结论:采用四联袋方法分离的单个核细胞回收率和细胞数均高于试管方法，四联袋法分离单个核细胞是一种高效、高质量和安全的分离方法，UCB-MSCs可以向神经样细胞分化，混合组UCB-MSCs增殖活跃，分泌更多IL-2和IFN-γ细胞因子。

目的:探讨脐血间充质干细胞(MSC)联合艾曲波帕治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物功能不良(PGF)患者的疗效及安全性。方法:选择2018年3月至2019年6月，在航天中心医院血液科接受allo-HSCT后，发生PGF的6例患者为研究对象。其中，男性患者为5例，女性为1例；患者中位年龄为33岁(范围：16~45岁)。根据血常规、骨髓细胞形态学、免疫表型及DNA指纹图谱等检查结果，患者被确诊为PGF。采用脐血MSC(1×10 6/kg)联合艾曲波帕(25~75 mg/d)对患者进行治疗。本研究对患者的随访截至2020年3月1日。回顾性分析患者的临床资料、相关实验室检查结果、脐血MSC联合艾曲波帕治疗PGF患者的临床疗效、不良反应及预后。本研究获得航天中心医院医学伦理委员会批准(批准号：20160420-XYZZ-02)，并与全部患者签署临床研究知情同意书。 结果:①本组6例患者的原发疾病中，急性髓细胞白血病(AML)为2例，肝脾T细胞淋巴瘤(HSTCL)为1例，T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(T-LBC/ALL)为2例，慢性粒单核细胞白血病(CMML)为1例。所有6例患者移植前均处于未缓解状态。allo-HSCT后，均获造血功能重建，粒细胞植入的中位时间为移植后13 d(范围：12~14 d)，有4例患者治疗前血小板未植入，剩余2例患者血小板植入时间分别为移植后13 d及90 d，所有患者在移植后28 d经骨髓DNA指纹图谱证实为完全供者嵌合。6例患者中有5例发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)，均为Ⅲ~Ⅳ度aGVHD，经系统治疗后均获得良好控制。②患者的PGF中位诊断时间为移植后57 d(范围：28~370 d)；其临床特征包括血常规检查结果示，2系或者3系血细胞计数持续减少，骨髓细胞形态学检查结果示骨髓增生减低或者明显减低，巨核细胞少见或者缺如，微小残留病(MRD)检查未见原发疾病复发证据。③患者输注脐血MSC的中位次数为3.5次(范围：2~4次)。治疗后，1例患者无效，5例有效，达治疗有效的中位时间为19 d(范围：12~56 d)，并且最终获得造血功能恢复。④患者输注脐血MSC过程中均无不良反应，亦未发生aGVHD及慢性GVHD(cGVHD)症状加重。2例出现间接胆红素水平升高，予以艾曲波帕减量后改善。⑤本组患者的中位随访时间为10.5个月(范围：6~19个月)，截至随访结束，6例患者中5例存活，并处于无病生存状态，存活患者中位总体生存(OS)期为11个月(范围：8~19个月)；1例死亡，其死亡原因为严重肺部感染。结论:脐血MSC联合艾曲波帕治疗allo-HSCT后PGF患者，疗效及安全性均良好。

目的 观察熔融堆积3D打印碳酸钙(CaCO3)/聚乳酸(Polylactic acid,PLA)材料负载人脐血间充质干细胞对新西兰大白兔软骨缺损的修复效果及安全性.方法 采用熔融堆积3D打印工艺制备CaCO3/PLA材料,电镜扫描其微观结构,人脐血间充质干细胞免疫荧光定性检测CD90;建立兔膝关节软骨缺损模型后将24只实验动物兔分为4组,每组6只并分别给予不同处理,对照组给予0.5 mL磷酸盐缓冲液,干细胞组给予0.5 mL细胞悬液(细胞计数约为6.56×106/mL),材料组将3D打印CaCO3/PLA材料填充于关节软骨缺损处,干细胞+材料组将3D打印CaCO3/PLA材料与人脐血间充质干细胞共培养后并注射0.5 mL细胞悬液,干预8周后进行组织学苏木素-伊红、番红固绿染色.根据染色结果结合ICRS大体评分、改良Pineda评分评估各组膝关节软骨修复情况.结果 熔融堆积3D打印CaCO3/PLA材料电镜扫描显示纵横排列整齐,内部为疏松多孔结构,孔道相连续,孔径为580～800 μm,微观扫描面呈三维立体结构.人脐血间充质干细胞标记物CD90免疫荧光检测结果显示人脐血间充质干细胞呈长梭形,胞内椭圆形细胞核,胞质染为红色,核染为蓝色.对照组ICRS大体评分平均1分,干细胞组平均6.5分,材料组平均5.5分,干细胞+材料组平均10.8分.对照组改良Pineda评分平均13.17分,干细胞组平均4.01分,材料组平均8.01分,干细胞+材料组平均2.66分.结论 熔融堆积3D打印CaCO3/PLA材料负载人脐血间充质干细胞具有修复膝关节软骨缺损的能力,且该材料的组织相容性良好,进一步证明了采用组织工程学方法进行软骨损伤修复的可行性,以及干细胞疗法的有效性与安全性.

背景:牙源干细胞在再生医学与组织工程等领域的研究不断深入,为牙相关组织修复及全身疾病治疗带来了希望.但目前对不同年龄区间牙源干细胞生物学特性上的差异缺少系统的分析.目的:探讨脐血源血小板裂解液培养人乳牙、恒牙牙髓干细胞的生物学特性,为人血小板裂解液代替胎牛血清提供可靠依据.方法:取出乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓组织,在含体积分数为10%胎牛血清或5%,10%,15%人血小板裂解液的DMEM/F-12培养基中培养,采用细胞计数法检测4组细胞增殖情况,选取最佳人血小板裂解液浓度进行后续实验.在最佳人血小板裂解液浓度条件下,体外培养乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞,显微镜下观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞表面特异性抗原,细胞计数法和CCK-8法检测细胞增殖能力,三系分化实验观察细胞体外分化能力.结果与结论:①10%人血小板裂解液组的细胞增殖速率最高;②各组牙髓组织块周围均有梭形成纤维状细胞生长并扩增,乳牙与少年恒牙细胞形态无明显差异;与同代次乳牙和少年恒牙细胞相比,成年恒牙细胞体积偏大;③流式细胞术检测结果显示乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞均符合间充质来源干细胞的表型特征;④成年恒牙牙髓干细胞增殖能力明显低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑤成年恒牙牙髓干细胞中成骨相关基因碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白2 mRNA表达,成脂相关基因脂蛋白脂肪酶、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 mRNA表达,成软骨相关基因Ⅱ型胶原α1、软骨寡聚基质蛋白mRNA表达均显著低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑥结果表明,人乳牙与少年恒牙牙髓干细胞相较于成年恒牙牙髓干细胞具有更强的增殖能力与多向分化潜能,更适用于临床研究和疾病治疗.

目的 探究人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路对脑缺血再灌注损伤大鼠周细胞表达和神经功能变化的影响.方法 取雄性SD大鼠共72只,随机分组为假手术组、模型组、干细胞组、干细胞+抑制剂组,每组18只.除假手术组外,剩余各组均建立脑缺血再灌注模型.造模成功后,模型组尾静脉注射0.1 mL的磷酸盐缓冲盐溶液(phosphate-buffered saline,PBS),干细胞组尾静脉注射0.1 mL含有2×106个hUCBMSCs的PBS,干细胞+抑制剂组尾静脉注射0.1 mL含2×106个hUCBMSCs的PBS及腹腔注射PI3K/Akt抑制剂LY294002(0.03 mg/100 g),LY294002每天给药1次,直至处死.术后1、3、7、14 d测定改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS).术后7、14 d,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测大鼠脑梗死面积,尼氏染色检测大脑皮质缺血半暗带正常神经元细胞数,免疫组织化学法检测大脑皮质缺血半暗带血小板衍生生长因子受体-β(platelet derived growth factor receptor-β,PDGFRβ)阳性周细胞的数量,免疫印迹法检测大脑皮质缺血半暗带PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt及Akt的表达.结果 术后7d,4组各项指标整体差异均有统计学意义(P<0.001).与假手术组比较,模型组的大鼠正常神经元细胞数[(55.42±4.75)个vs.(8.50±1.64)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(1.00±0.00 vs.0.47±0.06,P=0.002)均降低,脑PDGFRβ+周细胞数量[(1.08±0.29)个vs.(13.67±2.47)个,P<0.001]增加;与模型组比较,干细胞组大鼠的mNSS评分[(6.33±0.71)分vs.(4.78±0.98)分,P<0.001]和脑梗死率(32.66%±1.76%vs.14.60%±0.52%,P<0.001)均降低,正常神经元细胞数[(8.50±1.64)个vs.(23.17±1.77)个,P<0.001]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(13.67±2.47)个vs.(28.50±3.19)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(0.47±0.06 vs.0.83±0.18,P=0.017)均增加;与干细胞组比较,干细胞+抑制剂组的大鼠mNSS评分[(4.78±0.98)分vs.(6.11±0.78)分,P=0.002]和脑梗死率(14.60%±0.52%vs.27.85%±0.59%,P<0.001)均增加,正常神经元细胞数[(23.17±1.77)个vs.(11.83±0.88)个,P=0.003]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(28.50±3.19)个vs.(20.33±1.44)个,P=0.007]和p-Akt/Akt(0.83±0.18 vs.0.36±0.11,P=0.003)均降低.术后14 d,4组各项指标整体差异均有统计学意义(P<0.001).与假手术组比较,模型组的大鼠正常神经元细胞数[(57.08±3.79)个vs.(11.25±5.52)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(1.00±0.00 vs.0.53±0.12,P=0.002)均降低,脑PDGFRβ+周细胞数量[(2.00±0.25)个vs.(13.42±1.04)个,P<0.001]增加;与模型组比较,干细胞组大鼠的mNSS评分[(4.89±0.78)分vs.(2.33±0.87)分,P<0.001]和脑梗死率(32.58%±1.96%vs.11.78%±1.92%,P<0.001)均降低,正常神经元细胞数[(11.25±5.52)个vs.(31.00±1.89)个,P<0.001]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(13.42±1.04)个vs.(31.42±3.66)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(0.53±0.12 vs.0.93±0.12,P=0.004)均增加;与干细胞组比较,干细胞+抑制剂组大鼠的mNSS评分[(2.33±0.87)分vs.(4.44±0.53)分,P<0.001]和脑梗死率(11.78%±1.92%vs.25.25%±2.76%,P<0.001)均增加,正常神经元细胞数[(31.00±1.89)个vs.(13.83±1.04)个,P=0.002]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(31.42±3.66)个vs.(20.67±1.42)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(0.93±0.12 vs.0.53±0.09,P=0.005)均降低.结论 hUCBMSCs可能通过激活PI3K/Akt通路促进周细胞的存活募集,发挥神经保护的作用,进而促进脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能恢复.

目的 探讨体外人脐带间充质干细胞(MSCs)向软骨细胞分化的可能性.方法 取足月剖官产健康新生儿脐血,应用贴壁法分离获取MSCs,观察其形态学特点并检测细胞表面标志,体外定向成软骨分化诱导培养3周.结果 人脐带MSCs表达CD44,不表达CD45,经成软骨诱导分化3周后呈细胞呈多角形改变,番红O染色、Ⅱ型胶原染色检测均为强阳性,提示分泌胞外基质糖胺多糖和Ⅱ型胶原.结论 体外人脐带MSCs可以定向诱导分化成软骨细胞,有望成为关节软骨组织工程的新型种子细胞.