目的:探讨富含生物活性的脱钙骨基质（decalcified bone matrix，DBM）对外科级医用硫酸钙的影响，观察不同含量DBM对硫酸钙理化性能影响的变化规律，为制备含有成骨性能的、可注射性的硫酸钙骨水泥提供理论依据。方法:按照DBM在硫酸钙复合物的质量比，分为0组、5%组、10%组、20%组、30%组、40%组共6组。充分混合不同含量DBM与外科级硫酸钙制备骨水泥的粉剂。将0.3 g甲基纤维素溶于10 ml的去离子水中，制备浓度为3%的甲基纤维素溶液，作为骨水泥的液剂。按液固比0.4∶1，混合上述骨水泥的粉剂和液剂，搅拌均匀，形成浆体。根据不同的模具，测量并记录DBM/硫酸钙复合物的初凝时间、终凝时间、抗压强度、体外降解率及pH值变化。结果:单纯硫酸钙的初凝时间和终凝时间分别为（4.96±0.20）、（5.83±0.12）min。随着DBM的含量的增加，初凝时间和终凝时间增长趋势明显（ F=49.275， P<0.05； F=124.859， P<0.05）。单纯硫酸钙（0组）的抗压强度为（23.33±6.35）MPa，40%组抗压强度仅为3.33 MPa。随DBM的含量的增加，抗压强度先增强后降低；5%组、10%组、20%组的DBM对抗压强度影响不大（ P>0.05）；而30%组、40%组的抗压强度明显降低（ t=3.259， P<0.05）。不同含量的DBM能够明显改变硫酸钙复合物的降解速率，30%组和40%组体内完全降解时间仅为10 d；0组30 d的降解速率为63%。在体外降解的任何时间点内，DBM对硫酸钙复合物培养液的pH值均无明显影响，且与单纯硫酸钙的pH变化规律一致。 结论:随着DBM含量的增加，降解速率逐渐加快，抗压强降低、凝固时间延长，这些不利于可注射型硫酸钙骨水泥的制备。

目的:探讨内外侧联合入路治疗合并载距突骨折脱位的跟骨骨折的疗效。方法:选取成人下肢防腐标本4具（8侧），其中2具（4侧）行跟骨内侧解剖，观察载距突毗邻结构及显露范围；另2具模拟内外侧联合入路复位固定跟骨骨折。回顾性分析临床应用内外侧联合入路切开复位内固定术治疗的合并载距突骨折脱位的SandersⅡ~Ⅳ型跟骨骨折患者9例（9足），男7例、女2例；年龄（49.9±11.3）岁（范围25~58岁）。术中先取内侧切口，临时复位并固定载距突于距骨；再取外侧切口，显露跟骨外侧，复位并固定骨折块；载距突以螺钉经外侧固定，其中2例经内侧辅以可吸收棒固定。同期采用单纯外侧入路手术的合并载距突骨折脱位的跟骨骨折6例（8足）作为对照。两组外侧均采用跟骨锁定接骨板固定，并以脱钙骨基质植入后关节面复位后的空腔。测量两组患者术后1年的B?hler角、Gissane角，并采用美国足踝外科协会（American Orthopaedic Foot and Ankle Society，AOFAS）踝与后足评分系统评估功能。结果:载距突-距骨关节面呈倒"V"形，分为前、后两部分。经胫后肌腱前方可显露载距突尖部，经胫后肌腱与趾长屈肌腱间隙可完整显露并复位固定载距突及跟骨体内侧。内外侧联合入路组术后切口引流量为（73.6±4.3） ml，大于单纯外侧入路组的（70.6±7.1） ml（ t=2.18， P=0.045）。外侧切口均一期愈合，内外侧联合入路组1例内侧切口出现延迟愈合。内外侧联合入路组及单纯外侧入路组骨折均愈合，愈合时间分别为（12.2±2.1）周和（12.8±2.8）周，差异无统计学意义（ t=0.50， P=0.622）。术后1年，内外侧联合入路组及单纯外侧入路组B?hler角分别为37.0°± 5.7°、27.9°± 4.0°，大于术前的4.7°±3.4°、3.9°±2.9°（ P<0.05），组间比较差异有统计学意义（ t=3.76， P=0.002）；Gissane角分别为133.2°±9.8°、139.1°±9.4°，较术前的172°±7.3°、175.6°±5.6°减小（ P<0.05），组间差异无统计学意义（ t=1.26， P=0.226）；内外侧联合入路组AOFAS评分为（93.6±4.0）分，大于外侧入路组的（84.3±8.2）分，差异有统计学意义（ t=3.03， P=0.008）。 结论:跟骨关节内骨折合并较高概率的载距突骨折或脱位，采用内外侧联合入路及先内侧后外侧的手术顺序有利于恢复跟骨力线及解剖形态，尤其是跟骨内侧载距突与距骨下缘的对位关系，与采用单纯外侧入路比较可获得更好的早期临床疗效。

目的:探讨不同粒径大小对γ辐照中脱钙骨基质（demineralized bone matrix，DBM）中胶原结构的影响以及辐照保护剂的有效性。方法:取同一供体的冻干皮质骨，依据Urist改良法制备不同粒径的（0.5~1.0 mm、1.2~2.8 mm、3.3~4.7 mm及5.7~7.0 mm）DBM样品，按照不同剂量分为：0 kGy、15 kGy、25 kGy及25 kGy（辐照保护剂），真空密封后储存于-80℃冰箱待用。通过扫描电镜观察胶原表面形态，大体观察胶原表面结构损伤的程度；将样品按照0.2 g/ml生理盐水比例在50℃条件下72 h，利用浸提液颜色深度观察胶原被辐照损伤的程度；使用2，4-二硝基苯肼（吸光光度计法）测定样品中羰基含量；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺钠凝胶电泳法（Sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）测定样品中胶原分子量的变化；利用差示热量扫描法（differential scanning calorimetry，DSC）检测样品热变性温度以观察胶原热稳定性。结果:样品浸提液颜色与γ辐照剂量相关度较高，未辐照样品浸提液颜色清亮，而在同粒径下随辐照剂量加大浸提液黄色逐渐加深，5.7~7.0 mm粒径组颜色相对较浅；25 kGy组相比于25 kGy+保护剂组浸提液颜色加深。扫描电镜观察到γ辐照导致胶原结构紊乱，纤维断裂，随着辐照剂量增大损伤区域增多，当粒径增大时，损伤区域有减少的趋势；相比于25 kGy组，25 kGy+保护剂组胶原结构性破坏减少。差示热量扫描法得出样品热交换曲线，随着粒径增大，热变性温度有增高的趋势，粒径间对比有统计学差异（ F=189.4， P<0.001）；同粒径间差异不明显。SDS-PAGE发现同粒径下γ辐照剂量愈大，胶原分子量愈小；同辐照条件下随粒径较小，高分子量胶原含量减少明显；225 kGy+保护剂组相比于25 kGy组，高分子量增多。羰基含量结果显示在同一粒径下，γ辐照使羰基含量增多，0.5~1.0 mm组（ F=13.631， P=0.002），1.2~2.8 mm组（ F=6.390， P=0.016），3.3~4.7 mm组（ F=5.630， P=0.023），5.7~7.0 mm组（ F=4.150， P=0.048）的差异均有统计学意义，不同粒径间随着粒径增大羰基含量逐渐减小但差异统计学意义（ F=0.560， P=0.650）。 结论:γ辐照与胶原的氧化损伤具有明显的剂量反应关系，随着γ辐照剂量的增加，胶原损伤程度逐渐增加；DBM的粒径大小影响着胶原对γ辐照的敏感度，随着粒径的减小，DBM颗粒更易被γ辐照损伤；辐照保护剂在辐照过程中对胶原有一定程度的保护作用。

目的:评估异体脱钙骨基质作为鼻成形中线支架材料的可行性。方法:2018年1—6月，沈阳美莱医疗美容医院选择6例(男1例，女5例；年龄19～40岁，平均23.2岁)缺少足够鼻中隔软骨、耳软骨软弱、拒绝取双侧耳软骨、拒绝取肋软骨患者，以异体脱钙骨基质作为构建鼻成形的中线支架结构。鼻成形术后18个月随访。结果:6例患者在术后半个月对手术效果均满意。术后18个月，2例对手术效果满意；4例鼻尖突度下降，要求再次手术。再次手术术中无法解剖出完整的异体脱钙骨基质。异体脱钙骨基质剩余部分残渣。组织学发现，植入的骨基质呈碎块状，纤维断裂。骨基质碎片周边可见炎症细胞和多核巨细胞。骨基质内骨细胞消失。结论:商用异体脱钙骨基质不适合作为鼻成形手术的中线支架材料。

目的:通过显微CT（micro-CT）和组织形态学分析探讨氟化猪骨羟基磷灰石（fluorinated porcine hydroxyapatite，FPHA）修复比格犬下颌种植体颊侧开裂型骨缺损的效果。方法:通过随机数字表法将6只雄性比格犬随机分为两个时间点（骨增量术后4和12周）处理，每个时间点3只。拔除犬下颌双侧第二前磨牙至第二磨牙，术后12周下颌骨每侧制备4个种植窝洞，在窝洞颊侧骨壁制备开裂型骨缺损。将48个缺损位点通过随机数字表法随机分为空白对照组、脱蛋白牛骨基质（deproteinized bovine bone mineral，DBBM）组、猪骨羟基磷灰石（porcine hydroxyapatite，PHA）组和FPHA组（每组每个时间点6个位点）。种植体植入后，在缺损区分别植入相应骨替代材料，空白对照组不放置任何材料，各组均覆盖可吸收胶原膜后无张力缝合创口。分别于骨增量术后4、12周处死动物，获取种植位点标本，通过micro-CT分析获得新生骨体积分数（bone volume fraction，BV/TV）和骨小梁分离度（bone trabecular separation degree，Tb.Sp），进行不脱钙硬组织切片，通过组织形态学分析评价材料对种植体颊侧开裂型骨缺损的修复能力。结果:micro-CT结果显示，术后4周DBBM、PHA与FPHA均能成功维持缺损区牙槽骨外形轮廓，空白对照组缺损区牙槽骨轮廓塌陷；FPHA组BV/TV［（24.77±2.20）%］显著大于PHA组［（16.89±1.70）%］和DBBM组［（15.68±3.15）%］（ P<0.05）；FPHA组Tb.Sp（0.70±0.07）显著小于DBBM组（1.03±0.19）（ P<0.05）。术后12周DBBM、PHA和FPHA组缺损区牙槽骨轮廓维持良好，空白对照组牙槽骨轮廓仍塌陷。DBBM、PHA、FPHA组BV/TV和Tb.Sp差异均无统计学意义（ P>0.05）。组织形态学结果显示，术后4周骨缺损中央区FPHA组材料颗粒周围新生骨含量和成熟度高于PHA和DBBM组，4组骨缺损区均可见新生骨与种植体形成骨结合。术后12周DBBM、PHA和FPHA组材料颗粒被大量成熟的新生骨包绕。 结论:FPHA可在引导骨再生的早期有效促进种植体周骨缺损的修复。

[目的]探讨脱细胞骨基质/磷酸钙/半水硫酸钙(ACBM/CPC/CSH)复合人工骨材料的生物相容性及成骨性能.[方法]物理混合法合成ACBM/CPC/CSH复合人工骨材料,制备材料浸提液,用于急性、亚急性毒理、热原和表皮刺激实验.材料肌肉埋植实验,第7、14和21 d取材组织病理学检查,观察肌肉炎症反应;第14 d取材行流式细胞检查,观察血液与组织CD4+、CD8+T淋巴细胞含量变化,CCK-8法检测细胞毒性.建立大鼠股骨髁骨缺损模型,分别植入ACBM/CPC/CSH骨材料组(材料组)、磷酸钙/半水硫酸钙(CPC/CSH)(对照组)和不植任何材料(空白组),观察成骨情况.[结果]浸提液未引起小鼠急性与亚急性毒理反应,体重变化差异无统计学意义(P＞0.05).热原实验体温正常.表皮注射实验72h内皮肤未出现红斑.肌肉埋植实验,第7d肌肉组织有轻微炎症反应,21 d炎症消失;第14d流式细胞学检查,材料组、对照组和空白组外周血CD4+[(9.6±1.8)vs(10.1±1.2)vs(10.7±1.4),P=0.470],CD8+[(9.5±1.1)vs(10.3±1.8)vs(10.5±1.7),P=0.249];脾脏 CD4+[(18.1±1.5)vs(17.2±7.3)vs(17.5±1.0),P=0.195],CD8+[(8.8±7.2)vs(7.7±7.6)vs(7.8±7.2),P=0.359]淋巴细胞含量差异无统计学意义(P＞0.05).X 线片与Micro-CT结果显示,各组骨缺损均有不同程度修复,ACBM/CPC/CSH骨材料修复效果最佳.[结论]ACBM/CPC/CSH复合人工骨材料具有良好的生物相容性和体内成骨性能,有利于不规则骨缺损的修补.

目的 制备一种可注射含钙骨基质(injectable calcium-containing bone matrix,ICBM),评价其骨修复效果,并分析用于临床治疗的可行性.方法 将甘油和明胶作为赋型剂,与其制备的含钙骨基质(calcium-containing bone matrix,CBM)粉进行混合,得到 ICBM;通过测定骨粉、赋型剂和 ICBM 的 pH 值、钙含量,以及赋型剂、ICBM 的注射推力情况,对 ICBM 进行初步表征;通过体外 L929 细胞增殖实验对 ICBM 进行体外生物相容性评价;在昆明小鼠和白化豚鼠体内分别植入 ICBM 评价其体内安全性;进一步用裸鼠进行体内骨诱导验证;最后采用兔股骨髁缺损模型进行体内骨缺损修复,评价 ICBM 的有效性.结果 骨粉 pH 值为 6.51±0.32、钙含量为(26.24±1.25)%;赋型剂 pH 值为 5.56±0.28,注射推注力为(1.23±0.16)N;ICBM pH 值为 6.44±0.47,钙含量为(5.32±0.73)%,注射推注力为(10.87±1.53)N.ICBM 组细胞相对增殖率为(104.25±3.39)%,细胞毒性为 0 级;ICBM 未对昆明小鼠产生急性全身毒性反应,也未引起白化豚鼠发生迟发型超敏反应;在体内骨诱导组织学观察发现 ICBM 组可见大量有明显成骨出现;在兔股骨髁缺损修复 8 周时,脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)组缺损修复面积为(12.91±2.27)%,ICBM 组为(15.68±2.25)%,两组缺损修复面积差异有统计学意义(P<0.05).结论 制备一种 ICBM,使 CBM 具有注射可操作性同时不影响其成骨诱导活性,不仅使用方便,安全性高,还具有较高的临床推广应用价值.

目的 探讨新型脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)在四肢创伤骨缺损中的应用效果.方法 回顾分析 2020 年 1 月至 2021 年 12 月,解放军总医院第四医学中心采用 DBM 治疗的 30 例四肢创伤骨缺损患者的临床资料,其中男 20 例,女 10 例;年龄 18～60 岁,平均 44 岁.骨折部位:胫骨平台骨折 12 例,踝关节骨折(合并关节面塌陷)8 例,骨不连 5 例,四肢长骨骨折伴骨缺损 5 例.分别于术后 3 个月、6 个月、12 个月采用 Lane-Sandhu X 线评分评价骨愈合情况并观察并发症发生情况.结果 本组随访时间3～20 个月,平均 11.8 个月.30 例均实现骨愈合,恢复良好.愈合时间 10～16 周,平均(12.70±1.92)周,患者术后 1 个月、3 个月及末次随访时 Lane-Sandhu X 线评分均高于术前,术后 3 个月及末次随访时Lane-Sandhu X 线评分均高于术后 1 个月[术前(0±0),术后 1 个月(2.17±0.80),术后 3 个月(4.63±1.35),末次随访(7.30±1.29)],且差异均有统计学意义(P<0.05).30 例患者随访期间均未出现与 DBM 植入材料相关的不良反应,术后无一例感染、内固定及植入物松动等并发症.结论 新型 DBM 在四肢创伤骨缺损治疗中具有较好的应用效果.

目的 物理混合制备脱细胞骨基质(ACBM)与磷酸钙/硫酸钙(CPC/CS)复合材料,以提升人工骨材料的可塑性并观察其理化特性.方法 选取健康牛股骨干骺端松质骨制备ACBM,以ACBM为主体填充磷酸钙/半水硫酸钙(CPC/CSH),制备复合人工骨支架.设置ACBM占复合材料总体质量的10%、20%和30%3组,分别测量各组力学性能(弹性模量和抗压强度),选取其中最优力学性能组,采用X射线衍射(XRD)分析仪、扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、微量凯氏定氮法和液体置换法进一步分析其理化性能,并与同种异体骨和复合CPC/CSH进行力学性能比较.结果 ①ACBM不同占比复合材料中,20%ACBM复合人工骨材料具有最佳力学性能,能够承受最大应力923.81 N,最大变形4.92 mm,弹性模量(85.91±3.67)MPa,抗压强度(3.34±0.15)MPa,与其他两组相比差异具有统计学意义(P<0.001).XRD显示,复合人工骨材料固化后主要是羟基磷灰石(HA)、CS和二水硫酸钙(CSD)等可吸收物质.扫描和透射电镜观察显示,材料孔径为(496.56±153.37)μm,内部孔隙相互贯通,连通性较好,缺损填充度高.材料蛋白质含量极低.液体置换法测量,孔隙率为(80.7±5.1)%.②力学性能测试,20%ACBM骨材料力学性能优于同种异体骨组和CPC/CSH组,差异有统计学意义(P<0.001).结论 20%ACBM复合人工骨材料具有较高的力学性能和孔隙率,可塑性强.

目的 研究探讨日本大耳白兔脂肪干细胞与脱钙骨基质构筑的组织工程骨在长期玻璃化冻存后的活性和成骨能力,以及它们复苏后在兔桡骨骨缺损修复中的作用.方法 分离脂肪干细胞,将其扩增至第 3 代后接种于猪松质骨来源的脱钙骨基质,经过 1 周的成骨诱导,将建立的组织工程骨置于装有玻璃化冻存液的 2 ml 冻存管内,置液氮环境中冻存.在冻存 1 周和12 周时,取出组织工程骨,分别在复苏后的第 1、4、7 和 11 天,使用 Hochest33258法检测细胞数量.复苏后的第 1、4、7 天,使用碱性磷酸酶(ALP)检验试剂盒评估 ALP 的活性,并使用 RT-PCR 反应来确认骨钙素(OCN)基因的表达量.建立 16 只日本大耳白兔的 2 cm 的桡骨中段缺损模型,随机分成 4 组:未经冰冻的组织工程骨组、空白对照组、经过 12 周冻存组织工程骨组和单独材料组.12 周后进行 X 线观察、Micro-CT 评价和 HE 染色组织学观察.结果 经过 Hochest33258 测试,在冻存 1 周和 12 周之后,复苏后第 1 天的细胞数量分别达到了冻存前的 74.4%和 72.3%,第 4～7 天细胞数量达到最高峰,而第 7～11 天则进入了平台期.冻存 1 周或 12 周后,ALP 表达量出现了轻微的下降,但随后又开始回升.冻存 1 周、12 周复苏后第 1 天 OCN 表达量稍微降低,随后 OCN 表达量逐渐升高,第 4～7 天升高速率快.X 线结果显示,冻存 12 周组与新鲜组织工程骨组都有连续性骨组织形成.Micro-CT 结果显示,冻存组与新鲜组织工程骨组可见明显的骨质形成,连续性完整.冻存组与新鲜组织工程骨组在骨体积、骨小梁数量、骨密度上均无明显差异(P>0.05),但均明显高于对照组和单纯支架材料组(P<0.05).HE 染色结果显示,新鲜组织工程骨组和冻存 12 周组织工程骨组可见明显的连续的新生骨形成.结论 长期冻存后的组织工程骨仍能保持足够的细胞数量,仍具备成骨能力和修复兔桡骨骨缺损的能力.