目的:探讨核因子-κB（NF-κB）p65及相关细胞因子在邻苯二甲酸二丁酯（DBP）和苯并（a）芘（BaP）致大鼠肝功能损伤中的作用，为丰富DBP、BaP致大鼠肝脏损伤的机制提供支撑。方法:于2019年9至12月，将160只SPF级SD大鼠按性别、体重采用完全随机分组法分为空白对照组、溶剂对照组（玉米油）、DBP 50 mg/kg（DBP 50）组、DBP 250 mg/kg（DBP 250）组、BaP 1 mg/kg（BaP 1）组、BaP 5 mg/kg（BaP 5）组、DBP 50 mg/kg+BaP 1 mg/kg（DBP 50+BaP 1）组和DBP 250 mg/kg+BaP 5 mg/kg（DBP 250+BaP 5）组，每组20只，雌雄各半，连续灌胃染毒90 d。染毒结束后收集大鼠血清、分离肝脏，采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法分别检测大鼠肝组织NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平；酶联免疫吸附法检测血清中趋化因子-13（CXCL-13）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量；赖氏比色法检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）的水平。 结果:除BaP 1组外，其余各染毒组大鼠肝组织NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平均明显高于空白对照组（ P<0.05），其中DBP与BaP联合染毒组大鼠肝组织NF-κB p65的表达水平均明显高于各DBP、BaP单独染毒的低、高剂量组（ P<0.05）。与空白对照组比较，除BaP 1组外，其余各染毒组大鼠血清CXCL-13、IL-6水平均增加，且以DBP 250+BaP 5组增加更明显（ P<0.05）。各染毒组TNF-α水平均明显高于空白对照组，其中DBP与BaP联合染毒组大鼠血清TNF-α水平均明显高于各DBP、BaP单独染毒的低、高剂量组（ P<0.05）。此外，与空白对照组比较，除BaP 1组外，其余各染毒组大鼠血清AST水平均升高（ P<0.05），其中DBP与BaP联合染毒组大鼠血清ALT、AST水平皆明显高于各DBP、BaP单独染毒的低、高剂量组（ P<0.05）；而各染毒组ALB水平明显低于空白对照组（ P<0.05）；DBP 250组、BaP 5组和DBP 250+BaP 5组TP水平明显低于空白对照组，并以DBP 250+BaP 5组降低更明显（ P<0.05）。Pearson相关性分析显示，DBP单独染毒时，NF-κB p65蛋白表达水平与血清IL-6、TNF-α、ALT水平呈正相关关系（ r=0.762、0.951、0.924， P<0.05）。BaP单独染毒时，NF-κB p65蛋白表达水平与TNF-α、ALT水平呈正相关关系（ r=0.911、0.910， P<0.05）。DBP与BaP联合染毒时，NF-κB p65蛋白表达水平与CXCL-13、IL-6、TNF-α、ALT、AST水平均呈正相关关系（ r=0.711、0.764、0.955、0.903、0.827， P<0.05）。另外，DBP、BaP单独染毒时，大鼠血清TNF-α与ALT呈正相关关系（ r=0.883、0.894， P<0.05）。DBP与BaP联合染毒时，CXCL-13、IL-6、TNF-α与ALT水平呈正相关关系（ r=0.871、0.925、0.942， P<0.05），与AST水平亦呈正相关关系（ r=0.910、0.892、0.890， P<0.05）。 结论:DBP、BaP单独及共同暴露可上调大鼠肝脏组织内NF-κB p65的表达水平，从而调控下游相关细胞因子的异常分泌，进而导致大鼠肝细胞损伤；DBP、BaP共同暴露时肝脏损伤作用增强。

目的:研究白藜芦醇对苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子及相关基因表达的影响。方法:SZ95人皮脂腺细胞分为对照组、1 × 10 -5 mol/L白藜芦醇组、1 × 10 -5 mol/L苯并芘组及白藜芦醇+苯并芘组。实时荧光定量PCR检测各组SZ95人皮脂腺细胞中白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6、芳香烃受体（AhR）、细胞色素酶P450（CYP）1A1、CYP1B1 mRNA表达；Western印迹检测各组p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化水平（磷酸化p38水平/p38水平）和AhR蛋白相对水平；酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中IL-1α、IL-6蛋白表达。多组间均数比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:对照组、白藜芦醇组、苯并芘组及白藜芦醇+苯并芘组SZ95人皮脂腺细胞IL-1α的mRNA（2.045±0.272、2.058±0.154、3.124±0.094、2.185±0.337）和蛋白（9.132±1.181、9.429±0.771、20.361±0.907、9.917±0.897）表达水平差异均有统计学意义（ F值分别为14.662、101.705， P值分别< 0.01、< 0.001），其中白藜芦醇+苯并芘组IL-1α mRNA和蛋白相对水平低于苯并芘组（均 P < 0.01）。此外，苯并芘组p38磷酸化水平显著高于对照组、白藜芦醇组及白藜芦醇+苯并芘组（ F=303.129，均 P < 0.000 1）。白藜芦醇+苯并芘组AhR、CYP1A1和CYP1B1的mRNA表达较苯并芘组显著下调（ t值分别为10.640、33.599、18.327，均 P < 0.001）。苯并芘组细胞AhR蛋白表达低于白藜芦醇+苯并芘组（ P < 0.001）。 结论:白藜芦醇可抑制环境污染物苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子IL-1α表达，该作用可能通过AhR和p38MAPK通路所介导。

目的:基于网络药理学方法分析五味子防治稽留流产的潜在作用机制,并通过实验进行验证.方法:运用系统药理学方法查找并从中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)筛选五味子的活性成分及靶点,查找稽留流产相关基因,确定五味子防治稽留流产的靶点.利用Cytoscape构建"药物成分-靶点"网络,筛选关键化合物.利用String建立蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点.通过对靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析,以预测其可能的信号通路及机制.最后借助人绒毛膜外滋养层细胞系(HTR-8/SVneo)利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测和蛋白质印迹(Western blotting)检测进行机制验证.结果:从TCMSP数据库中鉴定了 7种五味子活性成分.PPI网络表明雄激素受体(androgen receptor,AR)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、核受体辅激活因子 2(nuclear receptor coactivator 2,NCOA2)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,ACHE)可能是五味子防治稽留流产的核心作用靶点.GO富集分析获得44个细胞生物学过程,KEGG途径富集分析获得2个相关信号通路,主要包括甲状腺激素信号通路和雌激素信号通路;在利用细胞模型验证机制过程中发现,二羟环氧苯并芘[benzo(a)pyren-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide,BPDE]染毒后的细胞中AR、ER和COX-2的蛋白质和(或)mRNA水平高于正常细胞,而先使用五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)预处理后再染毒BPDE的细胞中AR、ER和COX-2的蛋白质和(或)mRNA水平均较未用Sch B预处理的细胞降低,而NCOA2和ACHE的蛋白质和(或)mRNA水平变化不明显.结论:五味子可通过抗炎和调节AR、ER发挥防治稽留流产的作用,这一保护作用可能是通过雌激素信号通路来实现的.

目的 探究槲皮素拮抗苯并芘[benzo(a)pyrene,BaP]引起的大鼠气管-支气管上皮细胞中抑癌基因p16和RASSF1A启动子区域甲基化的作用.方法 采用组织块培养法培养原代大鼠气管-支气管上皮细胞,取得细胞后进行分组,分为空白组,模型(1 μmol/L BaP)组,低、中、高剂量槲皮素(25 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L)组,作用24h后,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测槲皮素拮抗BaP对原代大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区域甲基化程度的影响.结果 与空白组相比,模型组上皮细胞中p16和RASSF1A基因启动子区域甲基化程度显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,槲皮素组可以拮抗BaP引起的大鼠气管-支气管上皮细胞中p16和RASSF1A基因启动子区域甲基化作用,拮抗作用呈剂量依赖性增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 槲皮素可以拮抗BaP对大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区域的甲基化.

目的:检测江苏省生物医学实验室科研人员体内环境污染物残留状况,为实验室生物安全制度的制定提供依据.方法:在江苏省南京、苏州、盐城、淮安4个地区高校内分别选取100例生物医学实验室科研人员和100例非科研人员为研究对象,采用问卷调查了解不同人群接触环境污染物的现状,并进一步收集研究对象的晨尿样本,其中科研人员和非科研人员分别收集到了95例和94例样本.采用β-葡萄糖醛酸苷酶水解法和高效液相色谱-串联质谱法检测尿液中邻苯二甲酸盐[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]、双酚A和苯并芘的含量.结果:江苏省内生物医学实验室科研人员尿液中DEHP、双酚A、苯并芘的残留量[(1 359.0±251.0)μg/g、(284.4±134.0)μg/g、(109.0±43.2)ng/g)]显著高于对照组人员[(489.7±103.1)μg/g、(177.3±86.4)μg/g、(80.2±31.5)ng/g,P<0.001].其中苯并芘在南京和苏州地区实验室人员体内含量较高[(132.4±37.1)ng/g、(139.3±32.8)ng/g],DEHP在各地区实验室人员体内没有明显差异,而盐城地区实验室人员体内的双酚A含量最高[(386.1±202.1)μg/g].结论:江苏省各地区生物医学实验室科研人员体内积累的环境污染物普遍高于非实验室人员,这可能与日常实验室工作相关,因此实验室科研人员更应注重防护.

目的 分离具有抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)活性的全蝎活性肽(SOPs)并研究其潜在分子机制.方法 基于苯并芘(BaP)暴露的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)模型分离、鉴定具有抗AS活性的SOPs;MTT法检测SOPs保护活性及SOP-1细胞毒性;ELISA法检测细胞炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-8、PGE2及TNF-α)、细胞内ROS及ICAM-1、VCAM-1含量变化;Western blotting检测Pink1/Parkin和NLRP3炎症小体信号通路及COX-2蛋白的表达.结果 分离、鉴定4条寡肽(SOP-1～4);其中,SOP-1能够显著提高HUVEC细胞活力,降低BaP诱导的细胞炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-8、PGE2及TNF-α)及COX-2的表达;降低BaP诱导的HUVEC细胞内ROS含量;同时,SOP-1能够显著抑制BaP暴露诱导的HUVEC细胞ICAM-1过表达.SOP-1能抑制BaP诱导的HUVEC细胞Pink1/Parkin及NLRP3炎症小体信号通路的激活.结论 SOP-1通过Pink1/Parkin和NLRP3炎症小体信号通路抑制细胞炎症因子和ROS的过量产生,从而抑制BaP的毒性作用,发挥抗AS活性.

目的 研究有吸烟史的食管鳞癌患者肿瘤微环境中M2 型肿瘤相关巨噬细胞浸润增加的潜在机制.方法 通过免疫组织化学法以及免疫浸润分析(CIBERSORT)数据库分析检测M2 型肿瘤相关巨噬细胞在有/无吸烟史的食管鳞癌患者中表达差异.通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库检测有吸烟史的食管鳞癌患者肿瘤组织中参与调控巨噬细胞招募与极化相关的环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX2)表达变化.使用烟草中主要致癌物苯并芘处理食管鳞癌细胞,通过蛋白印迹(Western blotting)与实时荧光定量聚合酶链反应法(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测COX2表达变化.通过Transwell法评估苯并芘刺激前后对肿瘤细胞上清对巨噬细胞招募作用的影响.构建肿瘤细胞上清-巨噬细胞共培养体系,使用Western blotting法与RT-qPCR法评估苯并芘刺激前后肿瘤细胞上清对巨噬细胞M2 型标志物表达变化.通过观察巨噬细胞形态变化辅助判断其极化情况.结果 有吸烟史的食管鳞癌患者M2 型巨噬细胞浸润明显升高;在烟草中主要致癌物苯并芘刺激下,食管鳞癌细胞中COX2 明显增多;经苯并芘刺激后肿瘤细胞上清对巨噬细胞招募作用明显增强;经苯并芘刺激后肿瘤细胞上清处理巨噬细胞后可诱导其向M2 型巨噬细胞极化.结论 在烟草中主要致癌物苯并芘的刺激下,食管鳞癌细胞可诱导巨噬细胞进入肿瘤微环境并诱导其向M2 型肿瘤相关巨噬细胞极化.

目的 探究苯并芘(benzo[a]pyrene,BaP)通过芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)和核因子E2相关因子(subcellular localization of nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)信号通路对HepG2细胞中谷胱甘肽-S-转移酶P1(glutathione s-transferase P1,GSTP1)的影响.方法 将体外培养HepG2细胞分为Control组、BaP(10 μmol/L)组、BaP(10 μmol/L)+AhR抑制剂(1 μmol/L)组和BaP(10 μmol/L)+Nrf2抑制剂(1 μmol/L)组.BaP组给予10 μmol/L BaP培养24 h,抑制剂组给予1 μmol/L抑制剂0.5 h后,加入10 μmol/L BaP培养24 h,采用Western Blot和qPCR实验方法检测各组AhR、Nrf2、细胞色素P450s(cytochrome P450s,CYPs)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及GSTP1基因和蛋白的表达.结果 与Control组相比,BaP组中AhR、Nrf2、GSTP1、CYP1A1及HO-1的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与BaP组相比,BaP+AhR抑制剂组中AhR、GSTP1和CYP1A1的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),BaP+Nrf2抑制剂组中Nrf2、GSTP1和HO-1的表达均降低(P<0.05);与BaP+AhR抑制剂组相比,BaP+Nrf2抑制剂组GSTP1 mRNA和蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BaP通过AhR和Nrf2两条信号通路增加GSTP1的表达,以Nrf2信号通路为主导影响GSTP1的表达.

目的:从人参中分离纯化获得寡肽,并基于苯并芘诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型探究人参寡肽抗苯并芘诱导HUVECs炎症损伤的机制.方法:通过膜超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相的方法,从人参中分离具有保护活性的寡肽;CCK-8法检测并筛选出人参寡肽中抗苯并芘诱导HUVECs损伤活性最好的寡肽;试剂盒检测各组细胞ROS、IL-1β、IL-6、IL-18、NO含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;RT-qPCR 和 Western Blot 检测各组细胞芳基烃受体通路(AhR、CYP1A1)、凋亡相关(Bax、Bcl-2、Cyt C、APAF-1、pro-Caspase-9)、NLRP3 通路(NLRP3、ASC、Caspase-1)、PI3K 通路(p-PI3K、p-Akt)基因的 mRNA 和(或)蛋白表达;并进一步利用siRNA技术和抑制剂干扰AhR和PI3K通路的表达,检测各组细胞IL-1β、IL-6、IL-18含量变化.结果:从人参中共分离获得寡肽3个,其中人参寡肽-2(Phe-Thr-Glu-Gly-Pro)抗苯并芘诱导HUVECs损伤的活性最佳;人参寡肽-2可显著降低苯并芘诱导下HUVECs中ROS、IL-1β、IL-18、NO含量及细胞凋亡率和Bax、Cyt C、APAF-1、NL-RP3、ASC、Caspase-1蛋白表达及AhR、CYP1A1 mRNA和蛋白表达,显著升高Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).使用siRNA和抑制剂干扰AhR表达可显著降低IL-1β、IL-18分泌;PI3K抑制剂可进一步提高苯并芘诱导下HUVECs的IL-1β、IL-18分泌.结论:人参寡肽-2可调控NLRP3炎性小体、AhR和PI3K/Akt信号通路,对苯并芘暴露所致人脐静脉内皮细胞的炎症损伤具有保护作用,继而有助于内皮细胞功能损伤后的修复.

目的:探讨17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)和苯并芘(benzopyrene,BaP)对人肺腺癌A549细胞程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)表达的影响及其潜在分子机制.方法:分别选用浓度梯度为1～1 000 nmol/L的E2和浓度梯度为0.008～5 μmol/L的BaP处理A549细胞,筛选出最适浓度;实验分为对照组、E2组、BaP和E2+BaP组,每组实验重复3次.RT-qPCR检测PD-L1的mRNA水平;Western blot检测PD-L1、芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)和缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达水平,以及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)的磷酸化水平.分别加入AKT特异性抑制剂LY294002和ERK1/2特异性抑制剂PD98059进行反向验证,观察PD-L1表达的变化.结果:与E2 组和BaP组相比,E2+BaP组A549细胞中PD-L1的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05);AHR、HIF-1α、p-AKT和p-ERK1/2蛋白水平均显著高于其他各组(P<0.05);LY294002和PD98059能够逆转E2+BaP对A549细胞PD-L1表达的上调作用(P<0.05).结论:E2联合BaP可能通过异常激活AHR-AKT-ERK1/2信号通路诱导人肺腺癌A549细胞PD-L1表达升高.