目的:探讨核因子-κB（NF-κB）p65及相关细胞因子在邻苯二甲酸二丁酯（DBP）和苯并（a）芘（BaP）致大鼠肝功能损伤中的作用，为丰富DBP、BaP致大鼠肝脏损伤的机制提供支撑。方法:于2019年9至12月，将160只SPF级SD大鼠按性别、体重采用完全随机分组法分为空白对照组、溶剂对照组（玉米油）、DBP 50 mg/kg（DBP 50）组、DBP 250 mg/kg（DBP 250）组、BaP 1 mg/kg（BaP 1）组、BaP 5 mg/kg（BaP 5）组、DBP 50 mg/kg+BaP 1 mg/kg（DBP 50+BaP 1）组和DBP 250 mg/kg+BaP 5 mg/kg（DBP 250+BaP 5）组，每组20只，雌雄各半，连续灌胃染毒90 d。染毒结束后收集大鼠血清、分离肝脏，采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法分别检测大鼠肝组织NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平；酶联免疫吸附法检测血清中趋化因子-13（CXCL-13）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量；赖氏比色法检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）的水平。 结果:除BaP 1组外，其余各染毒组大鼠肝组织NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平均明显高于空白对照组（ P<0.05），其中DBP与BaP联合染毒组大鼠肝组织NF-κB p65的表达水平均明显高于各DBP、BaP单独染毒的低、高剂量组（ P<0.05）。与空白对照组比较，除BaP 1组外，其余各染毒组大鼠血清CXCL-13、IL-6水平均增加，且以DBP 250+BaP 5组增加更明显（ P<0.05）。各染毒组TNF-α水平均明显高于空白对照组，其中DBP与BaP联合染毒组大鼠血清TNF-α水平均明显高于各DBP、BaP单独染毒的低、高剂量组（ P<0.05）。此外，与空白对照组比较，除BaP 1组外，其余各染毒组大鼠血清AST水平均升高（ P<0.05），其中DBP与BaP联合染毒组大鼠血清ALT、AST水平皆明显高于各DBP、BaP单独染毒的低、高剂量组（ P<0.05）；而各染毒组ALB水平明显低于空白对照组（ P<0.05）；DBP 250组、BaP 5组和DBP 250+BaP 5组TP水平明显低于空白对照组，并以DBP 250+BaP 5组降低更明显（ P<0.05）。Pearson相关性分析显示，DBP单独染毒时，NF-κB p65蛋白表达水平与血清IL-6、TNF-α、ALT水平呈正相关关系（ r=0.762、0.951、0.924， P<0.05）。BaP单独染毒时，NF-κB p65蛋白表达水平与TNF-α、ALT水平呈正相关关系（ r=0.911、0.910， P<0.05）。DBP与BaP联合染毒时，NF-κB p65蛋白表达水平与CXCL-13、IL-6、TNF-α、ALT、AST水平均呈正相关关系（ r=0.711、0.764、0.955、0.903、0.827， P<0.05）。另外，DBP、BaP单独染毒时，大鼠血清TNF-α与ALT呈正相关关系（ r=0.883、0.894， P<0.05）。DBP与BaP联合染毒时，CXCL-13、IL-6、TNF-α与ALT水平呈正相关关系（ r=0.871、0.925、0.942， P<0.05），与AST水平亦呈正相关关系（ r=0.910、0.892、0.890， P<0.05）。 结论:DBP、BaP单独及共同暴露可上调大鼠肝脏组织内NF-κB p65的表达水平，从而调控下游相关细胞因子的异常分泌，进而导致大鼠肝细胞损伤；DBP、BaP共同暴露时肝脏损伤作用增强。

目的:研究白藜芦醇对苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子及相关基因表达的影响。方法:SZ95人皮脂腺细胞分为对照组、1 × 10 -5 mol/L白藜芦醇组、1 × 10 -5 mol/L苯并芘组及白藜芦醇+苯并芘组。实时荧光定量PCR检测各组SZ95人皮脂腺细胞中白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6、芳香烃受体（AhR）、细胞色素酶P450（CYP）1A1、CYP1B1 mRNA表达；Western印迹检测各组p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化水平（磷酸化p38水平/p38水平）和AhR蛋白相对水平；酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中IL-1α、IL-6蛋白表达。多组间均数比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:对照组、白藜芦醇组、苯并芘组及白藜芦醇+苯并芘组SZ95人皮脂腺细胞IL-1α的mRNA（2.045±0.272、2.058±0.154、3.124±0.094、2.185±0.337）和蛋白（9.132±1.181、9.429±0.771、20.361±0.907、9.917±0.897）表达水平差异均有统计学意义（ F值分别为14.662、101.705， P值分别< 0.01、< 0.001），其中白藜芦醇+苯并芘组IL-1α mRNA和蛋白相对水平低于苯并芘组（均 P < 0.01）。此外，苯并芘组p38磷酸化水平显著高于对照组、白藜芦醇组及白藜芦醇+苯并芘组（ F=303.129，均 P < 0.000 1）。白藜芦醇+苯并芘组AhR、CYP1A1和CYP1B1的mRNA表达较苯并芘组显著下调（ t值分别为10.640、33.599、18.327，均 P < 0.001）。苯并芘组细胞AhR蛋白表达低于白藜芦醇+苯并芘组（ P < 0.001）。 结论:白藜芦醇可抑制环境污染物苯并芘诱导的SZ95人皮脂腺细胞炎症因子IL-1α表达，该作用可能通过AhR和p38MAPK通路所介导。

目的:探讨中国华东某城市儿童的血清中多环芳烃加合物与血清补体C3、C4水平的剂量-效应关系。方法:于2016年9月，以华东地区某市大气污染暴露区和对照区（在大气污染暴露区的上风向30 km以外的区域）的2所寄宿制学校为研究现场，招募符合标准的学龄儿童。共纳入273名学生，暴露组和对照组分别有163、110名。收集研究期间两个地区的全年空气污染物数据（PM 2.5、PM 10和NO 2），利用尿中可替宁评估烟草暴露水平，全自动生化分析仪测定血清补体C3、C4水平，ELISA法测定血清反式二氢二醇环氧苯并［a］芘（BPDE）-白蛋白加合物水平，并采用线性回归模型探讨BPDE-白蛋白加合物和血清补体C3、C4的剂量-效应关系。 结果:273名儿童的年龄为（13.67±0.37）岁，其中男生165名（60.4%）。暴露组儿童的PM 2.5、PM 10和NO 2年均暴露水平以及血清BPDE-白蛋白加合物水平高于对照组（ P<0.05）。线性回归模型分析结果显示，调整年龄、性别、BMI z-评分和尿可替宁水平后，儿童血清BPDE-白蛋白加合物水平每升高10%，儿童血清补体C4水平下降1.20%（ P=0.017）；调整年龄、BMI z-评分和尿可替宁水平后，男生血清BPDE-白蛋白加合物水平每升高10%，血清补体C4水平降低1.68%（ P = 0.024）；调整年龄、性别和BMI z-评分后，尿可替宁检出组的儿童血清BPDE-白蛋白加合物水平每升高10%，血清补体C3、C4水平分别降低1.31%和3.57%（ P<0.05）。 结论:儿童血清多环芳烃加合物与补体C4有明显的剂量-效应关系。

目的 探讨苯并(a)芘对变应性鼻炎(AR)模型鼻黏膜功能及Treg细胞甲基化水平的影响.方法 36只SPF级BALB/c雌性小鼠中选取12只作为正常对照组,剩余小鼠采用随机数表法分为AR模型组和苯并(a)芘干预组,各12只.AR模型组和苯并(a)芘干预组进行建模处理.建模后,苯并(a)芘干预组腹腔注射7.89 mg/kg苯并(a)芘,正常对照组和AR模型组给予等量的无菌PBS溶液腹腔注射.对各组小鼠的鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片嗜酸细胞(EOS)计数、血清中卵清蛋白特异性IgE(OVA-sIgE)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平、小鼠鼻黏膜病理学变化、小鼠鼻黏膜Th亚群及Foxp3甲基化和蛋白水平进行对比.结果 与AR模型组相比,苯并(a)芘干预组中小鼠鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片EOS计数增加最为明显(P＜0.05),小鼠血清中 OVA-sIgE、GM-CSF、TNF-α、IL-13 和 Eotaxin 水平升高最为明显(P＜0.05);苯并(a)芘干预后,可见大量的炎性细胞浸润,鼻黏膜上皮组织排列紊乱,增生和血管扩张严重,纤维上皮也受到严重的损伤,出现大量的杯形细胞,苯并(a)芘干预组小鼠鼻黏膜中AhR阳性细胞数量升高最为明显(P＜0.05);Th1和Treg占比降低最为明显,Th2、Th17占比升高最为显著(P＜0.05);小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化水平升高最为明显(P＜0.05),小鼠脾脏中Foxp3蛋白水平降低最为明显(P＜0.05).结论 苯并(a)芘通过增加CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化,降低Treg细胞比例,加重了鼻黏膜炎症和免疫失衡,进而参与变应性鼻炎的发病机制.

目的 分析2019-2021年西宁市两区大气PM2.5中多环芳烃(PAHs)的变化趋势.方法 于2019年1月至2021年12月对西宁市城东、城北两区大气PM2.5中 16种PAHs浓度进行检测,分析不同时间、地区、季节的变化趋势.结果 2019-2021 年西宁市城东、城北区 PAHs 年均浓度的 M(P2.5,P75)分别为 9.94(4.01,21.96)、10.47(3.33,24.05)、6.90(2.15,27.99)ng/m3 和 16.17(5.68,45.33)、13.12(5.44,46.79)、8.08(2.62,34.85)ng/m3.两区整体呈现较明显的季节性变化规律,以冬季浓度最高.两区PAHs污染的主要组分为苯并[b]荧蒽、茚并[1,2,3-cd]芘、苯并[a]芘、苯并[k]荧蒽、苯并[g,h,i]苝,其中苯并[a]芘所占比例逐年降低.两区PAHs污染高峰时段均在11-3月,高峰时段城北区浓度高于城东区,其他时段两区浓度接近.石油燃烧、汽油车排放、燃煤是PAHs的主要来源.结论 西宁市大气中PAHs污染水平总体下降,环境治理有一定效果.

目的 建立对炒制饮片焦栀子中4种多环芳烃含量测定方法,并利用单因子污染指数和综合污染指数对其进行风险评估.方法 采用高效液相-荧光检测法测定焦栀子中苯并(α)蒽、?、苯并(b)荧蒽、苯并(α)芘4种多环芳烃的含量;采用单因子污染指数和综合污染指数对其风险进行评估.结果 4种多环芳烃线性关系良好,相关系数r≥0.999,回收率在75.82％～81.83％,RSD≤2.5％.风险评估结果表明焦栀子中苯并(α)蒽、苯并(b)荧蒽和?的污染程度相当且较大,远高于苯并(α)芘.同时,综合污染指数＞1的占比为69.57％,提示4种多环芳烃污染较为严重,表明焦栀子多环芳烃污染风险需要关注,需进一步加强其风险监测和风险评估.结论 该方法可以用于焦栀子中4种多环芳烃的测定及其风险评估,为炒制饮片焦栀子的多环芳烃污染水平进行监测,为其安全风险预警及保障人民用药安全提供数据依据.

目的:基于网络药理学方法分析五味子防治稽留流产的潜在作用机制,并通过实验进行验证.方法:运用系统药理学方法查找并从中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)筛选五味子的活性成分及靶点,查找稽留流产相关基因,确定五味子防治稽留流产的靶点.利用Cytoscape构建"药物成分-靶点"网络,筛选关键化合物.利用String建立蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点.通过对靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析,以预测其可能的信号通路及机制.最后借助人绒毛膜外滋养层细胞系(HTR-8/SVneo)利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测和蛋白质印迹(Western blotting)检测进行机制验证.结果:从TCMSP数据库中鉴定了 7种五味子活性成分.PPI网络表明雄激素受体(androgen receptor,AR)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、核受体辅激活因子 2(nuclear receptor coactivator 2,NCOA2)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,ACHE)可能是五味子防治稽留流产的核心作用靶点.GO富集分析获得44个细胞生物学过程,KEGG途径富集分析获得2个相关信号通路,主要包括甲状腺激素信号通路和雌激素信号通路;在利用细胞模型验证机制过程中发现,二羟环氧苯并芘[benzo(a)pyren-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide,BPDE]染毒后的细胞中AR、ER和COX-2的蛋白质和(或)mRNA水平高于正常细胞,而先使用五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)预处理后再染毒BPDE的细胞中AR、ER和COX-2的蛋白质和(或)mRNA水平均较未用Sch B预处理的细胞降低,而NCOA2和ACHE的蛋白质和(或)mRNA水平变化不明显.结论:五味子可通过抗炎和调节AR、ER发挥防治稽留流产的作用,这一保护作用可能是通过雌激素信号通路来实现的.

[背景]苯并[a]芘(BaP)的活性代谢产物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)可与DNA加合,但BPDE-DNA加合物图谱尚不明确.[目的]采用染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-Seq),在全基因组水平上鉴定BPDE加合位点分布及加合基因,为深入研究BaP的毒作用机制提供依据.[方法]人支气管上皮样细胞 16HBE培养至第四代达对数生长期.收获细胞并加入染色质免疫共沉淀裂解缓冲液,将裂解产物等分为实验组和对照组,实验组添加终浓度 20 μmol·L-1 的BPDE溶液,对照组添加相同体积的二甲基亚砜溶液,在 37℃环境下孵育 24 h.超声获得100～500 bp的染色质小片段.使用BPDE特异性抗体(anti-BPDE 8E11)富集与BPDE加合的DNA片段,高通量测序检测BPDE加合位点,使用MEME和DREME软件对前 1000个峰序列进行模体分析,注释BPDE在全基因组水平的加合靶基因,并通过生物信息学技术对BPDE加合靶基因进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析.[结果]高通量测序共检测出 842个BPDE结合位点,在各染色体上均有分布.BPDE可以与基因编码区和非编码区共价结合,73.9%的结合位点分布在基因间区,19.6%分布在内含子区,上游 2千碱基区域、外显子区、下游 2千碱基区域及 5'非翻译区也有少量分布.对前 1000个峰序列进行分析,寻找到 4条可靠的模体,发现富含鸟嘌呤(G)和腺嘌呤(A)的位点易于结合.对结合位点进行富集,共鉴定出 199个BPDE加合靶基因,大多分布在 1号、5号、7号、12号、17号和X染色体上.GO分析显示,靶基因主要富集于核酸和蛋白质结合,参与调节催化活性、转运活性、翻译延伸因子活性,在细胞分裂、分化、运动、物质运输和信息传递方面发挥重要作用.KEGG分析显示靶基因主要富集于心血管疾病、癌症、免疫炎症反应等相关通路.[结论]利用ChIP-Seq在全基因组水平上共鉴定出 199个BPDE加合靶基因,主要影响细胞分裂、分化、运动、物质运输和信息传递等生物学功能,与心血管疾病、肿瘤及免疫炎症反应密切相关.

目的 探究槲皮素拮抗苯并芘[benzo(a)pyrene,BaP]引起的大鼠气管-支气管上皮细胞中抑癌基因p16和RASSF1A启动子区域甲基化的作用.方法 采用组织块培养法培养原代大鼠气管-支气管上皮细胞,取得细胞后进行分组,分为空白组,模型(1 μmol/L BaP)组,低、中、高剂量槲皮素(25 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L)组,作用24h后,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测槲皮素拮抗BaP对原代大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区域甲基化程度的影响.结果 与空白组相比,模型组上皮细胞中p16和RASSF1A基因启动子区域甲基化程度显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,槲皮素组可以拮抗BaP引起的大鼠气管-支气管上皮细胞中p16和RASSF1A基因启动子区域甲基化作用,拮抗作用呈剂量依赖性增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 槲皮素可以拮抗BaP对大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区域的甲基化.

目的 研究4种不同药用部位药食同源中药材中多环芳烃的污染现状、溯源解析与健康风险.方法 采用固相分散萃取前处理技术联合高效液相色谱-紫外荧光串联检测器(HPLC-UV-FLD)同时在线检测技术,对中药材中4种不同药用部位进行污染检测、来源解析和健康风险评估.结果 中药材中16种多环芳烃(PAHs)污染水平范围在ND～150.50 μg/kg,芘(Pyr)的检出率最高(51.43％),其次为?(Chr,45.71％),苯并[a]芘在所有样品中均未检出.2～6环中,4环占比最高(41.22％～50.95％),其次为3环(22.23％～49.05％)和2环(ND～36.56％),5～6环均未检出.特征比率分析表明,石油、煤炭和生物质燃烧是药食同源中药材多环芳烃的主要来源.荧蒽(Flu)的致癌毒性贡献率最高(37.06％),其次为苯并[a]蒽(BaA,23.59％).药食同源中药材终生致癌风险范围在2.90×10-8～1.75×10-7,ILCR值小于10-6.结论 35种药食同源中药材中4种不同药用部位普遍存在PAHs污染,但其致癌风险可以忽略.