目的 研究使用荧光探针法床边快速检测口腔黏膜脱落细胞标本亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因型的准确率和安全性.方法 选取2019年1月至2020年9月间就诊于十堰市太和医院心血管内科的门诊和住院高血压患者,患者均在实验室检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平,选取Hcy≥10μmol/L的高血压患者共482例,患者均采集口腔黏膜细胞及全血标本,分别用口腔黏膜脱落细胞荧光探针法及全血标本对比试剂检测上述标本MTHFR C677T基因型,若两者检测结果不一致则使用"金标准"Sanger测序法检测全血标本对MTHFR C677T基因型进行最终判定.比较两种检测方法的符合率并观察记录采集标本过程中发生不良事件的概率,评价荧光探针法检测患者口腔黏膜脱落细胞MTHFR C677T基因型的准确率和安全性.结果 482例高血压患者口腔黏膜脱落细胞标本和全血标本成功完成采集,且采样过程中患者未发生明显不良反应.荧光探针法和对比试剂检测MTHFR C677T基因总突变发生率为73.23％(353/482),两种方法检测MTHFR C677T基因纯合野生型(CC型)符合率为100.00％(95％CI:97.11～100.00),杂合突变型(CT型)符合率为99.14％(95％CI:96.91～99.76),纯合突变型(TT型)符合率为99.17％(95％CI:95.47～99.85),MTHFR C677T基因型总符合率为99.38％(95％CI:98.19～99.79),检测结果一致性Kappa值为0.9902.结论 采集口腔黏膜脱落细胞使用荧光探针法检测MTHFR C677T基因突变操作简便、创伤小,且快速、安全、准确.

目的:建立指环病毒7型(TTV7)、8型(TTV8)、10型(TTV10)实时荧光定量PCR检测体系并进行临床验证。方法:本研究根据GenBank已发布的TTV7、TTV8、TTV10基因序列设计特异性引物，构建重组质粒pMD19-T-TTV7、pMD19-T-TTV8、pMD19-T-TTV10，以其作为阳性标准品建立了基于FAM-Eclipse探针法的实时荧光定量PCR检测，并进行特异性、敏感性试验与临床样本检测。结果:TTV7、TTV8、TTV10的实时荧光定量PCR检测体系标准曲线方程分别为 y＝-0.340 2 x+114.780 0、 y＝-0.351 1 x+114.940 0、 y＝-0.348 9 x+115.020 0，相关系数都在0.99以上，与其他病毒无交叉反应，检测敏感性分别为108拷贝/μl、84拷贝/μl、98拷贝/μl。在临床小儿血清样本中的检测阳性率分别为10.9%、2.1%和4.3%。 结论:本研究建立的TTV7、TTV8、TTV10实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏性高等特点，可为临床血清样本TTV检测提供一个快速手段。

目的:开发和评估一种快速、简单和经济的替代测序的Omicron变异株荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)。方法:针对SARS-CoV-2 ORF1ab保守区域、Omicron变异株S基因高频共同突变位点设计引物和TaqMan探针，建立Omicron株RT-qPCR检测方法，用经全基因组测序确定型别的样本进行验证，并对该方法的特异度和敏感度进行评估。结果:本研究建立的RT-qPCR分型法可以将Omicron变异株与包括早期A型流行株、Alpha和Delta变异株在内的SARS-CoV-2毒株进行区分，结果与全基因组测序结果一致，符合率为100.00%(28/28)；与其他6种呼吸道病毒及柯萨奇病毒A组16型无交叉反应；该方法RNA标准品在10 9~10 3拷贝/μl之间呈良好的线性关系，相关系数 R2均大于0.99，检测敏感度为10 3拷贝/μl。 结论:本研究设计的针对Omicron变异株的RT-qPCR敏感度高且特异度好，在任何可以进行PCR检测的实验室中都容易开展，可极大地促进对Omicron变异株的传播监测。

目的:评估一种新型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV) RNA定量检测方法——HBV实时荧光核酸恒温扩增检测(simultaneous amplification and testing，SAT)(RNA捕获探针法)的临床检测性能。方法:采用简单随机抽样法收集2017年6月至2018年6月上海复旦大学附属华山医院收治的170例慢性乙型肝炎患者和30例非HBV感染者的血清标本HBV RNA，使用HBV SAT与常规反转录聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)进行检测，对两种方法检测的灵敏度、特异度、к值及定量值相关性进行比较，并对两种方法检测的不同HBV DNA浓度样本的检出率进行分析比较。统计学分析采用 χ2检验。 结果:以临床诊断为标准，HBV SAT检测灵敏度为97.06%(165/170)，特异度为100.00%(30/30)， κ值为0.908；反转录PCR检测灵敏度为92.94%(158/170)，特异度为100.00%(30/30)， κ值为0.798。在HBV DNA低浓度样本(HBV DNA<100 IU/mL)中，HBV SAT检出率为77.27%(17/22)，反转录PCR检出率为59.09%(13/22)。两种方法定量结果线性相关系数 r＝0.987 8。 结论:全自动HBV SAT与反转录PCR定量结果一致，在HBV DNA低浓度样本中的检测灵敏度比反转录PCR方法略高，是一种快速、准确的HBV RNA定量检测方法。

目的 探讨非结核分枝杆菌(NTM)的菌种鉴定分布及耐药性,为临床诊治提供参考依据.方法 搜集2017―2020年贵州某专科医院微量肉汤稀释法药敏试验对-硝基苯甲酸(PNB)培养基阳性的疑似NTM菌株,经聚合酶链式反应(PCR)-荧光探针法初步鉴定为NTM后,用基因芯片法进行菌种鉴定,采用微量肉汤稀释法进行15种药物测试.结果 贵州地区流行的100例NTM菌株经鉴定分为10种菌型类别.其中,占比最高者为龟/脓肿分枝杆菌48%(48/100),其后依次为鸟分枝杆菌16%(16/100),堪萨斯分枝杆菌12%(12/100),胞内分枝杆菌11%(11/100).药敏结果显示100株NTM总耐药率61.8%,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高76.4%,其后依次为微黄分枝杆菌73.3%、偶然分枝杆菌55.6%、鸟分枝杆菌53.8%和戈登分枝杆菌53.3%.男女病人比例为63∶37,男性耐药率56.1%;女性耐药率71.5%.结论 贵州地区有10种NTM菌种流行,龟/脓肿分枝杆菌是该地区NTM优势菌种.不同菌种间耐药率差异较大,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高.男性病人多于女性,女性耐药率高于男性.应用快速NTM菌种鉴定和药敏试验,可为NTM防控项目的决策者提供参考依据,有助于促进医务人员对抗NTM药物的科学选择.

目的:探讨宏基因二代测序技术(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)在胸内淋巴结结核中的诊断价值.方法:采用回顾性研究方法,搜集2020年12月至2023年9月浙江省中西医结合医院结核病诊疗中心收治的122例疑似胸内淋巴结结核患者临床资料,所有患者均行支气管内超声引导下经支气管针吸活检术(endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration,EBUS-TBNA).穿刺标本同时进行mNGS、GeneXpert MTB/RIF(简称"Xpert")、PCR-荧光探针法(简称"RT-PCR")、RNA恒温扩增荧光实时检测技术(简称"TB-SAT")、BACTEC MGIT 960分枝杆菌全自动快速液体培养(简称"MGIT 960")和涂片抗酸染色(简称"涂片"),比较6种方法对胸内淋巴结结核的诊断效能.结果:根据诊断标准,122例疑似患者中,最终89例诊断为胸内淋巴结结核,33例为非胸内淋巴结结核患者.以综合诊断结果为参照标准,mNGS对胸内淋巴结结核诊断的敏感度为89.9%(95%CI:81.7%～95.3%)、特异度为87.9%(95%CI:71.8%～96.6%)、准确率为89.3%(95%CI:82.5%～94.2%),AUC值为0.889(95%CI:0.819～0.939),明显高于Xpert、RT-PCR、TB-SAT、MGIT 960和涂片对胸内淋巴结结核检测的敏感度(68.5%、61.8%、33.7%、49.4%和11.2%)、特异度(93.9%、97.0%、97.0%、100.0%和100.0%)、准确率(75.4%、71.3%、50.8%、63.1%和35.2%)和AUC(0.812、0.794、0.747、0.653和0.556).结论:mNGS检测对胸内淋巴结结核具有较高的临床诊断价值,尤其在其他结核病相关检测均阴性时,该技术可给临床诊断提供重要参考,但与传统的病原学检测手段相比较,特异度仍偏低,尤其在鉴别疾病良恶性时,需结合病理结果进行综合分析.

目的 分析PCR-荧光探针法、BD960 液体培养法和直接涂片荧光染色法诊断分枝杆菌感染的效果.方法 选取2021 年1 月至2021 年4 月在广西壮族自治区胸科医院就诊的 104 例疑似分枝杆菌感染者作为研究对象,以BD960 液体培养法为参照,评估PCR-荧光探针法和直接涂片荧光染色法检测分枝杆菌的检验效能.结果 104 例疑似分枝杆菌病患者的标本中,BD960 液体培养法检测结果与PCR-荧光探针法及直接涂片荧光染色法比较差异均有统计学意义(P =0.013,P＜0.001).结论 PCR-荧光探针法和BD960液体培养法可以快速诊断结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM),但当MTB和NTM混合生长时,只能表达MTB,有检测局限性,有待进一步提高.直接涂片荧光染色法检出率低,但是操作简单、快速、价格低廉,适合基层实验室进行初步鉴定.

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)对非结核分枝杆菌(NTM)肺病的诊断价值.方法 收集 2020 年 1 月—2021 年 12 月安徽省胸科医院收治的 112 例疑似NTM肺病患者.对患者BALF行MALDI-TOF MS检测、PCR荧光探针检测、BACTEC MGIT 960 分枝杆菌全自动快速液体培养(BD960法)检测,并对三种检测技术诊断效能进行比较.结果 依据NTM的诊断标准,112 例患者最终诊断为NTM肺病 78 例,MALDI-TOF MS、PCR荧光探针法、BD960法检测NTM的灵敏度分别为:85.9%(67/78)、56.4%(44/78)、28.2%(22/78),MALDI-TOF MS分别与PCR荧光探针、BD960 比较,χ2 分别为:16.52、52.98,P均＜0.05,差异有统计学意义.三种检测技术阳性预计值分别为:98.5%、93.6%、100%,阴性预计值为:75.0%、47.7%、37.8%.MALDI-TOF MS检测诊断NTM肺病时间明显短于液体培养法,差异有统计学意义(Z=8.168,P＜0.001).结论 MALDI-TOF MS检测技术对NTM肺病的诊断具有较高的临床应用价值.

目的 建立一种能同时检测EV71型、CA16型及其它肠道病毒的荧光PCR检测方法,主要用于手足口病病原的快速检测.方法 针对肠道病毒的保守基因设计特异性引物和探针序列,优化荧光RT-PCR反应体系,构建标准的阳性质控模板,建立标准曲线,研究产品的检测限、重复性、特异性;同时对2015年6月份收集的26份阳性样品和10份阴性样品进行检测.结果 试验得到了阳性重组质粒,线性范围在8×102 copics/μl～8×108 copies/μl范围内检测结果良好;优化后肠道病毒EVUN上下游引物和MGB探针浓度分别为0.50,0.50,0.30 μmol/L,RT-PCR反应条件为:42℃30 min,95℃3 min;95℃5 s,60℃35 s,45个循环.检测限达到800 copies/μl,变异系数CV≤5％,重复性好,特异性良好,与其他传染病毒无交叉反应;用该检测方法检测26份临床阳性样本和10份阴性样本,阳性检出率为100％(26/26),阴性检出率为100％(10/10).结论 试验所建立的荧光PCR检测方法,可用于临床对手足口病病原的快速检测.

目的 对自贡市2012 2016年临床分离44株疑似非结核分枝杆菌进行菌种鉴定.方法 使用PCR-荧光探针法对自贡市临床44份疑似非结核患者的菌株进行初步筛查,并对44份菌株的hsp65及rpoB基因进行扩增并测序,通过序列比对获得菌株型别.结果 44株菌株分枝杆菌经PCR-荧光探针法检测结果显示均为非结核分枝杆菌.对44株分枝杆菌进行hsp65及rpoB基因测序比对,进一步菌种鉴定结果显示,44株分枝杆菌分别为11种非结核分枝杆菌.结论 自贡市非结核分枝杆菌种类较多,44株菌即分为11个种.PCR荧光探针法及基因测序法可对临床非结核分枝杆菌进行快速、准确的鉴定.