该研究建立了一种简便、快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),能够同时测定给药炒酸枣仁提取物后比格犬血浆中木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、当药黄素、N-去甲基荷叶碱、6?-阿魏酰斯皮诺素和酸枣仁皂苷B的含量.采用Waters HSS-T3 C18 色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为甲醇-水(含0.01%甲酸),梯度洗脱,9 种成分和 2 种内标于 8 min内完全分离;质谱检测在电喷雾离子源正、负离子切换模式下,采用多反应监测模式进行检测.分析方法经特异性、选择性、线性范围、准确度、精密度、回收率、基质效应和稳定性验证,可满足犬灌胃炒酸枣仁提取物后的药代动力学的研究要求.结果显示,比格犬单次灌胃给药后,木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、6?-阿魏酰斯皮诺素和酸枣仁皂苷B的Tmax 为2.40～3.20 h,t1/2 为2.08～6.79 h,其中木兰花碱和斯皮诺素的暴露量相对较高,Cmax 分别为 76.7、31.5 ng·mL-1,AUC0-∞分别为 581、315 ng·h·mL-1;其余 5 种暴露较弱的化合物的 Cmax 为 0.81～13.0 ng·mL-1,AUC0-∞为 6.00～106 ng·h·mL-1.该研究为炒酸枣仁后续相关药理研究提供了参考依据.

高脂血症是临床常见疾病,也是动脉粥样硬化、缺血性心脏病、脑中风等心血管系统疾病的重要诱因.天然产物中生物碱类成分具有显著的调血脂作用,其机制主要包括促进肝脏胆固醇摄取、抑制肝脏胆固醇合成、促进胆固醇转化、抑制肠道胆固醇吸收、促进脂肪酸氧化、抑制脂肪生成、促进脂肪水解、调节胆汁酸代谢、调节肠道菌群、抗脂质过氧化、减轻胰岛素抵抗等.通过查阅近10年国内外相关文献,从作用基因靶点和作用通路层面,对天然产物中生物碱类化合物调血脂作用机制综述.为生物碱类成分及含有生物碱类成分的中药或天然药物的临床应用提供科学依据.

研究杞荷分清饮中12种活性成分(琥珀酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、原儿茶醛、咖啡酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、对香豆酸、荷叶碱、槲皮素、齐墩果酸、熊果酸)在正常和糖尿病模型大鼠体内的药动学差异.采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,建立超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS)方法,同时测定正常大鼠和模型大鼠分别单次灌胃给予杞荷分清饮后血浆中12种成分的含量.结果显示,所建立的分析方法对12种所测定成分线性关系良好,专属性、准确度、精密度、稳定性等方法学均符合要求.采用DAS 3.2.8软件拟合计算药动学参数结果表明,模型组中除咖啡酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、齐墩果酸外其余9种成分半衰期时间(t1/2)相对正常组延长;隐绿原酸、对香豆酸、熊果酸、齐墩果酸药时曲线下面积(AUC0-t)模型组相对正常组增加,且平均驻留时间(MRT)延迟;正常组中槲皮素、荷叶碱出现"双峰"现象,模型组未见,提示疾病状态下药物的药动学参数出现明显差异.

目的:采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS)分析二冬汤基准样品(冻干粉)中的化学成分.方法:采用 GL Sciences Inertsil ODS-3(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以 0.2%甲酸-0.05 mol/L甲酸铵水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速 0.4 mL/min,柱温 30℃,检测波长 254 nm,进样量 1 μL,在正、负离子模式下进行质谱扫描.结果:通过对照品比对,结合文献报道,共鉴定 25 个成分,包括 15 个黄酮类、8 个生物碱类、2 个皂苷类,并对各成分进行药物归属指认,均来源于黄芩、知母、荷叶、甘草 4 味药材.结论:该实验建立的定性分析方法可系统、快速地检测二冬汤基准样品中的化学成分,可为该经典名方的复方颗粒剂的研发及质量控制体系的建立提供依据.

本研究基于网络药理学探究荷叶碱抑制人肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖的分子机制.采用MTT比色法、克隆形成实验检测荷叶碱对HuCCT1细胞增殖的影响;采用比色法、分光光度法检测荷叶碱对糖酵解生化指标的影响;通过网络构建和富集分析预测荷叶碱作用于肝内胆管癌的潜在靶点及通路,以此为基础探究荷叶碱影响HuCCT1细胞增殖的可能机制.结果表明荷叶碱能抑制HuCCT1增殖,显著降低细胞葡萄糖消耗及乳酸生成,并呈时间和剂量依赖性;网络药理学分析显示荷叶碱主要通过PI3K/Akt、MAPK、HIF-1信号通路影响肝内胆管癌生长、运动;聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)结果显示(30、60、120 μmol/L)荷叶碱能降低低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶2(HK2)和丙酮酸激酶2(PKM2)的mRNA水平和蛋白表达,同时下调p-AktThr308、p-mTOR、p4EBP1蛋白表达.综上,荷叶碱可能通过影响Akt/mTOR/4EBP1信号级联调控的糖酵解活性抑制HuCCT1细胞增殖.

综述荷叶生物碱类有效成分抗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的研究进展.荷叶生物碱类化合物治疗NAFLD疗效显著,其作用机制包括改善脂质代谢和糖代谢、抗氧化应激、减轻炎症反应并抗纤维化及调节肠道菌群等.

目的 制备二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)修饰荷叶碱脂质体,并考察其体内药动学.方法 薄膜超声法制备脂质体.以磷脂酰胆碱与胆固醇比例、脂药比、DSPE-mPEG2000用量、水化温度、超声时间为影响因素,单因素试验优化处方,测定包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位、体外释药.18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予荷叶碱原料药、不含DSPE-mPEG2000荷叶碱脂质体、DSPE-mPEG2000修饰荷叶碱脂质体的0.5％CMC-Na 混悬液(20mg/kg),于 0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12 h 采血,HPLC-MS/MS 法测定荷叶碱血药浓度,计算主要药动学参数.结果 最佳处方为荷叶碱用量20 mg,磷脂酰胆碱与胆固醇比例5∶1,脂药比12∶1,DSPE-mPEG2000用量30 mg,水化温度40℃,超声时间15 min,平均包封率为71.69％,载药量为4.59％,粒径为161.84 nm,PDI为0.163,Zeta电位为-7.17 mV.DSPE-mPEG2000修饰后,荷叶碱在人工胃液、人工肠液中48 h内累积释放度分别为66.17％、53.90％.与原料药比较,脂质体tmax、t1/2延长(P＜0.01),Cmax、AUC0～t、AUC0～∞升高(P＜0.01),相对生物利用度增加至6.14倍.结论 DSPE-mPEG2000修饰脂质体可促进荷叶碱口服吸收.

莲的多个部位均可作药,其中苄基异喹啉类生物碱是荷叶、莲子心的主要活性成分.荷叶含有荷叶碱、莲碱等阿朴啡类生物碱,具有良好调脂减肥作用;莲子心中主要含有甲基莲心碱、莲心碱等双苄基异喹啉类生物碱,可抗心律失常.近年来,莲生物碱成分的显著药理活性及荷叶与莲子心的"同源异效"现象,激发越来越多研究工作者开展莲生物碱生源合成途径及关键酶研究.为此,本文综述了荷叶、莲子心生物碱成分类型、生物碱合成途径及关键酶基因研究进展,以期为解析莲的生物碱合成途径及荷叶、莲子心的药效分化分子机制提供参考.

目的:使用反向传播(BP)人工神经网络结合正交试验优化荷叶降脂方中药物的提取工艺,为药物的规范化生产和产业化形成提供可靠的研究基础.方法:采用水回流提取法提取,以荷叶碱的含量为评价指标,以正交试验设计筛选提取工艺,并将正交试验层次分析法得到的实验数据作为反向神经网络的输入层,评价指标的综合得分作为网络的输出层,对主要影响因素进行仿真优化,得到最优提取工艺.结果:优化得到的提取工艺条件为 12 倍量水、提取 3 次、0.5h/次.结论:BP人工神经网络结合正交试验方法可用于荷叶降脂方提取工艺的优化,科学合理,稳定可行,符合中药制剂研发的需求.

目的 研究荷叶碱对人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制.方法 采用CCK-8法观察荷叶碱对人肝癌细胞株HepG2生长增殖的影响;Hoechst33258染色观察HepG2细胞凋亡形态的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和周期的影响;Western Blot检测HepG2细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 荷叶碱对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;Hoechst 33258染色可见实验组细胞固缩,凋亡小体形成,蓝色荧光加深;流式结果表示,荷叶碱可使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率随药物浓度的增大亦呈增长趋势;Western Blot结果表明,荷叶碱以浓度梯度抑制NF-КB蛋白,Bcl-2蛋白的表达,促进Bax蛋白的表达.结论 荷叶碱可抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,并在一定的范围内呈剂量、时间依赖性.荷叶碱可将人肝癌细胞株HepG2阻滞于G0/G1期,诱导其发生凋亡,凋亡机制可能与调节相关蛋白NF-КB、Bcl-2、Bax的表达有关.