目的:探讨超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱（ultra-high performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometer，UHPLC/Q-TOF-MS）技术在新生儿败血症早期诊断中的应用。方法:前瞻性选择2019年1月至2020年1月在湖南省人民医院新生儿科住院的新生儿败血症患儿为败血症组，选择同期门诊体检的健康新生儿为对照组，取患儿入院第1天/体检当天的静脉血标本，采用UHPLC/Q-TOF-MS技术进行代谢组学分析，探讨败血症患儿代谢产物特点。结果:共纳入败血症组20例，对照组10例。败血症组患儿血苯丙氨酸、法尼基焦磷酸、6-磷酸葡萄糖、乳糖、4-羟基甲苯丁酰胺、伊洛前列素、顺式8，11，14，17-二十碳四烯酸、皮质酮、雌三醇3-硫酸盐16-葡糖醛酸、苯乙酰胺、血氧烷B2、二氯二甲基二乙胺共12种代谢产物高于对照组（ P<0.05），采用受试者工作特征曲线对这些代谢物进行可信度分析，得到7种可信度较高的代谢物，分别为4-羟基甲苯丁酰胺、皮质酮、雌三醇3-硫酸盐16-葡糖醛酸、法尼焦磷酸、6-磷酸葡萄糖、苯乙酰胺、苯丙氨酸。 结论:新生儿败血症患儿代谢产物明显异常，4-羟基甲苯丁酰胺、皮质酮、雌三醇3-硫酸盐16-葡糖醛酸、法尼基焦磷酸、6-磷酸葡萄糖、苯乙酰胺、苯丙氨酸7种代谢物水平明显升高。

Analyzing polysorbate 20(PS20)composition and the impact of each component on stability and safety is crucial due to formulation variations and individual tolerance.The similar structures and polarities of PS20 components make accurate separation,identification,and quantification challenging.In this work,a high-resolution quantitative method was developed using single-dimensional high-performance liquid chromatography(HPLC)with charged aerosol detection(CAD)to separate 18 key components with multiple esters.The separated components were characterized by ultra-high-performance liquid chro-matography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry(UHPLC-Q-TOF-MS)with an identical gradient as the HPLC-CAD analysis.The polysorbate compound database and library were expanded over 7-time compared to the commercial database.The method investigated differences in PS20 samples from various origins and grades for different dosage forms to evaluate the composition-process relationship.UHPLC-Q-TOF-MS identified 1329 to 1511 compounds in 4 batches of PS20 from different sources.The method observed the impact of 4 degradation conditions on peak components,identifying stable components and their tendencies to change.HPLC-CAD and UHPLC-Q-TOF-MS results provided insights into fingerprint differences,distinguishing quasi products.

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)并结合多种数据后处理技术分析鉴定升麻素苷在正常大鼠及牙周炎模型大鼠体内外代谢物,并比较代谢差异.方法 收集正常大鼠和模型大鼠新鲜粪便,探究升麻素苷在肠道菌孵育体系中的体外代谢轮廓.正常及模型大鼠ig升麻素苷(100mg/kg)后,分别于不同时间收集血浆、尿液、粪便、胆汁样本,合并相同样本,经适当方法进行处理后,采用COSMOCORE C18柱(150mm×2.1mm,2.6 μm),以0.1％甲酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱.在电喷雾离子源(electro-spray ionization,ESI)正离子模式下采集各生物样品的质谱数据,同时以右美沙芬为内标,采用峰面积相对定量法评估不同生物样品中代谢物的相对含量.结果 初步鉴定出正常大鼠中代谢产物25个(其中Ⅰ相代谢产物21个、Ⅱ相代谢产物4个),牙周炎模型大鼠中代谢产物27个(其中Ⅰ相代谢产物22个、Ⅱ相代谢产物5个).通过峰面积相对定量比较发现在不同病理状态下及不同生物样本中各代谢物含量存在显著差异,其中升麻素在各生物样品中的含量普遍较高.结论 在不同病理状态下,同种化合物产生的代谢物种类及含量存在显著差异,模型动物的代谢研究更符合临床实际用药.升麻素可能是其在体内发挥抗炎、抗菌作用的药效物质.

基于炮制和配伍探究山茱萸与黄芪相关组分对糖尿病肾病大鼠血浆代谢组学的影响.SD大鼠随机分为4组,用高脂饲料联合30 mg·kg-1链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠模型.采用HE、PAS和Masson染色对各组大鼠的肾脏组织切片进行病理学观察.超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)代谢组学方法研究山茱萸酒制前后与黄芪相关组分配伍给药后对糖尿病肾病大鼠血浆代谢物的影响.给予药物治疗后,糖尿病肾病大鼠的肾组织损伤情况和间质胶原纤维沉积面积均有不同程度的改善(P＜0.001).血浆代谢组学的检测结果显示,在患病大鼠中共鉴定出71种与糖尿病肾病发病机制相关的生物标志物,主要涉及亚油酸代谢,咖啡因代谢,甘油磷脂代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,花生四烯酸代谢,苯丙氨酸代谢,视黄醇代谢,乙醚脂质代谢.经药物干预后,其中有26种发生显著性回调,以精准炮制药对(P-CG5)疗效更好.该研究从血浆代谢组学的角度阐述了 P-CG5可从苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,咖啡因代谢等途径改善糖尿病肾病的代谢紊乱,为山茱萸与黄芪相关组分配伍在中医临床上的应用提供了理论支撑和实验依据.

基于灵敏、高效的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术,结合自建信息数据库,系统地表征与鉴定吴茱萸的化学成分.对色谱分离条件(固定相、流动相、柱温、洗脱梯度)和质谱检测条件(喷嘴电压、毛细管电压、fragmentor、碰撞能量)进行优化,最终采用HSS T3 色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为 0.1%甲酸水-乙腈,流速 0.4 mL·min-1,柱温 35℃,电喷雾离子源,在Auto MS/MS模式下进行正、负离子模式质谱数据采集.根据对照品比对、碎片离子信息解析、相关文献及自建信息数据库检索等,从吴茱萸水煎液中共鉴定或推导了 92 个化合物,包括 33 个生物碱类、23 个黄酮类、12 个萜类、12 个苯丙素类、12 个其他类.其中 17 个化合物通过对照品比对鉴定,11 个化合物为吴茱萸中未报道成分.该研究实现了吴茱萸水煎液中多类别化学成分的快速表征与鉴定,为其药效物质与质量控制研究提供了参考.

目的:基于代谢组学方法研究腺苷对Aβ25-35多肽诱导的阿尔兹海默症(Alzheimer's disease,AD)小鼠体内代谢紊乱的干预作用.方法:将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组、腺苷组.脑室内注射Aβ25-35多肽模拟AD的生理病理状态,末次给药结束,禁食12h后收集各组小鼠的尿液样本.处理后的尿液样本进行超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF-MS)分析,得到质谱原始数据,经预处理后导入SIMCA-P软件,进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选潜在差异代谢物,并利用HMDB、MassBank等在线数据库进一步鉴定生物标志物.通过Mev软件对生物标志物在各组中的相对含量进行热图聚类分析.结合MBRole、KEGG和MetaboAnalyst5.0等在线数据库进行通路富集分析和代谢网络构建.结果:腺苷组小鼠代谢轮廓与模型组明显分离,并向正常组回调.腺苷组与模型组间共筛选出59个差异标志物(正源模式下38个、负源模式下21个),通路富集分析后得到烟酸盐和烟酰胺代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、精氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等显著受干扰的代谢通路.结论:腺苷可能通过氨基酸代谢和维生素代谢来修复AD小鼠的神经损伤,为临床上腺苷治疗AD的应用提供了理论依据.

目的 本研究拟从宿主-肠道菌群-代谢的角度探讨泻白散保护过敏性哮喘大鼠可能的微观机制.方法 将SPF级SD大鼠分为正常对照组(NC组)、过敏性哮喘模型组(M组)和泻白散组(Xiebaisan组).通过卵清白蛋白(OVA)诱导建立大鼠过敏性哮喘模型;HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;取结肠内容物进行16S rDNA高通量测序,观察肠道菌群结构与功能的变化;采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)分别进行血清样本和肺组织样本非靶向代谢组学检测.结果 HE染色显示:与NC组相比,Xiebaisan组可以在一定程度上改善哮喘大鼠肺部组织形态结构;16S rDNA高通量测序结果显示:M组肠道菌群多样性降低,与M组相比,Xiebaisan组肠道菌群多样性增加,肠道微生态得以改善;血清非靶向代谢组学检测结果显示:Xiebaisan组能够调节氨基酸代谢、mTOR等通路,且部分回调M组引起的差异代谢物表达;肺组织样本非靶向代谢组学检测结果显示,Xiebaisan组能够调节碳代谢、血管平滑肌收缩信号通路和cAMP等信号通路,且部分回调M组引起的差异代谢物表达.结论 泻白散可能通过改善肺组织形态结构、肠道菌群的多样性以及调控mTOR通路、血管平滑肌收缩信号通路和cAMP等信号通路影响氨基酸代谢、碳代谢等途径发挥对过敏性哮喘大鼠的保护作用.

目的:采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem quadru-pole time-of-flight mass spectrometry,UHPLC-Q-TOF-MS)的代谢组学技术分析牛膝对骨质疏松模型大鼠内源性代谢物的影响,分析牛膝改善骨质疏松的作用机制.方法:采用维甲酸建立骨质疏松大鼠模型,通过血清磷(Pi)和碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP)生化指标初步评价牛膝对骨质疏松大鼠的保护作用;利用UHPLC-Q-TOF-MS技术检测血清、尿液内源性小分子代谢物的代谢轮廓谱,采用偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)及正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)等多元统计分析方法筛选出潜在生物标志物,并借助MetaboAnalyst分析构建相关的代谢通路和代谢网络.结果:牛膝能显著降低骨质疏松模型大鼠血清Pi和ALP水平(P＜0.05);代谢组学结果显示,共筛选鉴定出45 个与骨质疏松相关的潜在生物标志物,主要涉及组胺酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、泛酸和CoA生物合成、核黄素代谢、精氨酸生物合成、烟酸和烟酰胺代谢、色氨酸代谢、类固醇激素生物合成等代谢通路.结论:综合生化指标及代谢组学分析,牛膝可通过调控内源性差异代谢物相关的代谢通路改善骨质疏松.

为了阐明组方药材芦荟对天天胶囊体内存在形式(原形成分和代谢产物)的贡献,首次对芦荟、天天胶囊及去芦荟天天胶囊在大鼠体内的存在形式进行了研究.大鼠灌胃给药,每天 1 次,连续灌胃 7 d.收集给药 7 d的全部尿液和粪便,最后一次灌胃给药后分别于 0.5、1、1.5 h收集血液.采用UHPLC-Q-TOF-MS检测和鉴定生物样品中的存在形式,分别鉴定了芦荟给药组、天天胶囊给药组、去芦荟天天胶囊给药组生物样品中的原形成分 34、28、2 个及代谢产物 64、94、0 个.代谢反应类型主要为甲基化、氢化、羟基化、脱羟基、葡萄糖醛酸结合、硫酸结合等.该研究首次阐明了芦荟、天天胶囊、去芦荟天天胶囊在大鼠体内的存在形式和部分代谢途径,为进一步揭示其显效形式奠定基础,并对中药芦荟和天天胶囊的作用机制及质量控制研究具有重要意义.

目的:采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS)分析二冬汤基准样品(冻干粉)中的化学成分.方法:采用 GL Sciences Inertsil ODS-3(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以 0.2%甲酸-0.05 mol/L甲酸铵水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速 0.4 mL/min,柱温 30℃,检测波长 254 nm,进样量 1 μL,在正、负离子模式下进行质谱扫描.结果:通过对照品比对,结合文献报道,共鉴定 25 个成分,包括 15 个黄酮类、8 个生物碱类、2 个皂苷类,并对各成分进行药物归属指认,均来源于黄芩、知母、荷叶、甘草 4 味药材.结论:该实验建立的定性分析方法可系统、快速地检测二冬汤基准样品中的化学成分,可为该经典名方的复方颗粒剂的研发及质量控制体系的建立提供依据.