目的 探讨血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞蛋白激酶Cε(PKCε)、Cα(PKCα)表达的影响.方法 采用不同浓度的血管紧张素Ⅱ处理HSC-T6细胞株,四唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞增殖,分析羟脯氨酸含量变化,免疫荧光染色检测PKCε和PKCα的表达,RT-PCR分析PKCε和PKCα mRNA的水平.结果 不同浓度血管紧张素Ⅱ促进HSC-T6细胞增殖(F=25.321,P＜0.001),上调羟脯氨酸水平(F=13.283,P＜0.001),并呈现明显的剂量效应;伴随血管紧张素Ⅱ浓度的增加,PKCε表达明显增加(F=21.387,P＜0.01),并发生转位于细胞膜;PKCα表达明显增加,尤以转位膜、胞浆比较明显(F=19.431,P＜0.01),并呈现明显的剂量效应;同时PKCε和PKCα mRNA水平增加(F=13.279、15.174,P＜0.05).结论 血管紧张素Ⅱ能够剂量依赖性地上调肝星状细胞胶原表达,提高蛋白激酶Cε、Cα表达水平,促进肝星状细胞的增殖.

目的:基于网络药理学思路与方法,研究二妙丸中有效成分、靶点、通路之间的关系,预测其可能的“一方多效”药理机制.方法:依托中药分子机制的生物信息学分析工具服务器(BATMAN-TCM)对二妙丸进行成分-靶点的预测和筛选,借助检索相互作用的基因/蛋白质的搜索工具平台(STRING)构建靶蛋白互作网络,利用BiNGO和MCODE插件对靶基因进行基因本体(G0)生物过程富集和聚类分析,通过注释、可视化和集成发现的数据库(DAVID)平台对关键靶点京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析.结果:二妙丸活性成分作用于血清白蛋白(ALB),丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1),肿瘤坏死因子(TNF),前列腺素内环氧合酶2(PTGS2),5-羟色胺受体2A(HTR2A),腺苷脱氨酶(ADA),糖皮质激素受体(NR3C1)等37个关键靶点;参与炎症反应、神经传导、金属阳离子稳态平衡、氧化还原、脂质代谢、核苷酸代谢等GO生物过程;调控TNF,TRP通道炎症调控,FcεRI信号通路,Ⅱ型糖尿病,钙离子信号通路,5-羟色胺以及多种信号转导、肿瘤、细胞色素P450通路.结论:二妙丸除具有治疗痛风、关节炎、湿疹等炎症疾病外,还可能具有抗糖尿病周围神经病变、治疗神经系统、胃肠系统、心血管系统疾病的“一方多效”作用.

目的 探索当降脂颗粒对单纯性非酒精性脂肪性肝病(NAFL)大鼠的防治作用及潜在机制.方法 雄性Wistar大鼠随机分为2组,正常组、高脂高糖饮食(HFHS)组,饲喂8周诱导大鼠NAFL.NAFL大鼠再根据体重随机分为降脂颗粒治疗(JZKL)组和非治疗(NAFL)组.治疗4周后处理动物,记录体重、肝重,收集血清和肝组织,HE染色和油红O染色观察肝脏病理改变,分析肝脏甘油三酯(TG)含量;检测血清总胆固醇(TC)、TG、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和空腹血糖水平,ELISA方法测定空腹胰岛素水平.计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Western blot分析肝脏蛋白激酶C(PKC)不同亚型,PKCε、PKCλ/L、PKCζ的蛋白表达情况.结果 HFHS饮食可诱导大鼠出现典型的NAFL特征,降脂颗粒干预可明显降低NAFL大鼠体重,改善肝脂堆积及肝脏TG水平,血脂分析结果提示降脂颗粒对血清LDL-C水平有明显降低的效应.NAFL大鼠血糖明显升高,降脂颗粒干预可明显降低大鼠空腹血糖水平以及升高ISI指数和降低HOMA-IR指数.对肝脏PKC的分析表明,降脂颗粒可明显降低PKCλ/L的蛋白表达和升高PKCζ蛋白在肝脏的表达.结论 降脂颗粒可显著改善NAFL大鼠肝脏组织学改变、血脂代谢紊乱,增加胰岛素敏感性.对不典型PKC的调节可能是其治疗NAFD的潜在机制.

目的:探索佛波酯(PMA)诱导C2C12肌管自噬的作用机制并考察补骨脂成分次苷酸查尔酮(CYA)对肌管的保护作用.方法:构建能够准确分析细胞自噬状态的mRFP-GFP-LC3B双荧光C2C12成肌细胞,将已分化C2C12细胞分为对照组、PMA组(1 μmol/L)、自噬阳性对照组(饥饿组)、CYA组(10 μmol/L)及PMA+CYA组.处理时间为48 h.Cytation 5测定细胞在不同波长下的荧光强度,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达水平,qPCR技术检测蛋白激酶C(PKC)-ε、PKC-β,PKC-θ和缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)的表达水平.用海马能量代谢分析仪(Seahorse XFe 24分析仪)检测细胞线粒体呼吸能力.结果:①与对照组比较,PMA(1 μmol/L)可使C2C12肌管的黄色荧光斑点显著增加,红色荧光信号强度也显著增强(P＜0.01),即自噬及自噬溶酶体均增加.而CYA(10 μmol/L)可以显著降低PMA诱导的C2C12肌管黄色荧光斑点和红色荧光信号强度(P＜0.01).②与对照组比较,PMA可以上调Beclin-1和LC3B U蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01);与PMA组比较,PMA+CYA组可以降低自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BU的蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01).③与对照组比较,PMA显著降低C2C12肌管的基础呼吸、最大呼吸和ATP的生成(P＜0.01).④与对照组比较,PMA组可以显著上调PKC-ε、PKC-β、PKC-θ和HIF-2α基因表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:PMA可能通过激活C2C12肌管的PKC通路来抑制细胞线粒体呼吸,促进HIF-2α的表达,HIF-2α上调自噬相关蛋白Beclin-1和LC3B Ⅱ的表达,从而诱导C2C12肌管自噬.CYA则可能通过下调Beclin-1和LC3BⅡ的蛋白表达来保护肌管对抗PMA诱导的自噬.

目的:检测降糖消渴颗粒干预后的2型糖尿病小鼠肝组织胰岛素信号通路、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路相关指标表达的变化,探讨其改善糖尿病状态下肝脏脂代谢的可能途径.方法:40只8周龄雄性KK-Ay小鼠,高脂饲料喂养4周,诱导2型糖尿病发生,尾静脉取血测量空腹血糖,以空腹血糖≥13.9mmol/L作为糖尿病成模标准.将40只糖尿病小鼠随机分为模型组、吡格列酮组及降糖消渴颗粒低(1.75 g/kg)、中(3.50 g/kg)、高(7.00 g/kg)剂量组,每组8只,灌胃给药治疗10周.8只同周龄雄性C57BL/6J小鼠作为正常组,普通饲料喂养.治疗结束后,肝组织取材,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠肝脏胰岛素受体底物-1(IRS-1)、蛋白激酶Ce(PKCε)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达情况.结果:与正常组比较,模型组NF-κB、TNF-α mRNA上升,IRS-1、AMPKα、PPARα mRNA降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,吡格列酮组IRS-1、AMPKα mRNA上升,差异均有统计学意义(P＜0.01);降糖消渴颗粒高剂量组PKCe mRNA降低,PPARα mRNA上升,差异均具有统计学意义(P＜0.01);降糖消渴颗粒中剂量组AMPKα mRNA上升,NF-κB、TNF-α mRNA降低,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);降糖消渴颗粒低剂量组AMPKα mRNA上升,NF-κB、TNF-α mRNA降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论:降糖消渴颗粒可上调糖尿病状态下小鼠肝细胞内AMPKα mRNA的表达,同时抑制NF-κB炎症信号通路的激活,调节肝脏脂质代谢;其中低、中剂量降糖消渴颗粒综合效果较好.