目的:研究沉默蛋白质精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)基因对胃癌细胞株MGC-803增殖和迁移的影响，并探讨其相关分子机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western blotting检测人正常胃黏膜上皮细胞GSE-1和人胃癌细胞株(AGS、SGC-7901、MGC-803)中PRMT6 mRNA与蛋白的表达水平。胃癌细胞株MGC-803分为沉默对照组(NC)、PRMT6沉默组(si-PRMT6)、过表达核转录因子-κB(NF-κB/p65)组(pcDNA-p65)、si-PRMT6＋pcDNA-p65组及PRMT6沉默同时过表达基质金属蛋白酶9(MMP9)组(si-PRMT6＋pcDNA-MMP9)。Western blotting检测PRMT6、NF-κB/p65和MMP9的蛋白表达水平；CCK-8实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移率。结果:qRT-PCR结果显示，PRMT6 mRNA在GSE-1、AGS、SGC-7901、MGC-803细胞中的相对表达水平分别为1.041±0.114、2.141±0.132、2.716±0.231、2.825±0.300，4组间差异有统计学意义( F＝46.082， P<0.001)，与GSE-1细胞相比，PRMT6 mRNA表达水平在AGS、SGC-7901、MGC-803细胞中明显升高(均 P<0.001)。Western blotting结果显示，PRMT6蛋白在GSE-1、AGS、SGC-7901、MGC-803细胞中的相对表达水平分别为1.090±0.101、2.847±0.331、2.925±0.419、3.278±0.463，4组间差异有统计学意义( F＝22.683， P<0.001)，与GSE-1细胞相比，PRMT6蛋白表达水平在AGS、SGC-7901、MGC-803细胞中明显升高( P＝0.008； P＝0.002； P＝0.003)。MGC-803细胞沉默PRMT6 48 h后，NC组和si-PRMT6组中的PRMT6 mRNA表达水平分别为0.921±0.110、0.303±0.045；PRMT6蛋白表达水平为分别为1.032±0.105、0.289±0.043；细胞增殖活性分别为0.917±0.089、0.660±0.069；细胞迁移率为(89.122±5.109)%、(30.831±4.463)%；p-p65/p65的蛋白相对表达量比值分别为0.947±0.143、0.285±0.023；si-PRMT6组PRMT6 mRNA表达水平、PRMT6蛋白表达水平、细胞增殖活性、细胞迁移率、p-p65/p65的蛋白相对表达量比值均显著低于NC组( t＝9.006， P<0.001； t＝11.338， P<0.001； t＝3.954， P＝0.017； t＝14.881， P<0.001； t＝7.919， P<0.001)。Western blotting结果显示，NC组、si-PRMT6组、pcDNA-p65组与si-PRMT6＋pcDNA-p65组中MMP9的蛋白相对表达量为1.202±0.138、0.318±0.018、2.849±0.217与1.595±0.194，4组间差异有统计学意义( F＝127.410， P<0.001)，进一步两两比较，si-PRMT6组MMP9的蛋白相对表达量显著低于NC组( P<0.001)，而si-PRMT6＋pcDNA-p65组MMP9的蛋白相对表达量显著低于pcDNA-p65组( P＝0.002)。MGC-803细胞转染si-PRMT6同时转染pcDNA-p65或pcDNA-MMP9 48 h后，NC组、si-PRMT6组、si-PRMT6＋pcDNA-p65及si-PRMT6＋pcDNA-MMP9组细胞增殖活性分别为0.923±0.054、0.608±0.024、0.818±0.035与0.807±0.029，4组间差异有统计学意义( F＝37.343， P<0.001)，进一步两两比较，si-PRMT6＋pcDNA-p65组与si-PRMT6＋pcDNA-MMP9组细胞增殖活性显著高于si-PRMT6组(均 P<0.001)；4组的细胞迁移率分别为(85.195±3.176)%、(28.419±1.845)%、(60.490±7.231)%与(53.653±6.761)%，4组间差异有统计学意义( F＝59.672， P<0.001)；进一步两两比较，si-PRMT6＋pcDNA-p65组与si-PRMT6＋pcDNA-MMP9组细胞迁移率显著高于si-PRMT6组( P＝0.002； P＝0.003)。 结论:PRMT6沉默可抑制NF-κB/MMP9信号通路的活化，进而抑制胃癌细胞MGC-803的增殖和迁移。

目的:探讨真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)和蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达水平，以及两者与NSCLC临床病理特征之间的关系。方法:收集诸城市人民医院2015年1月至2020年7月病理检查确诊的106例NSCLC患者癌组织以及癌旁组织标本，采用免疫组织化学法检测EIF5A2和PRMT5水平，结合临床资料行 χ2检验统计学分析。 结果:NSCLC癌组织中EIF5A2阳性表达率76.42%(81/106)，明显高于癌旁组织EIF5A2阳性表达率16.98%(18/106)，差异有统计学意义( χ2＝75.215， P<0.01)。NSCLC癌组织中PRMT5阳性表达率84.91%(90/106)，明显高于癌旁组织PRMT5阳性表达率20.75%(22/106)，两者差异有统计学意义( χ2＝87.526， P<0.01)。EIF5A2表达水平与NSCLC淋巴结转移、TNM分期(TNM stage)明显相关( χ2＝4.825、7.620， P<0.05)，PRMT5表达水平与NSCLC淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期明显相关( χ2＝6.845、6.108、6.508， P<0.05)。 结论:EIF5A2和PRMT5在NSCLC癌组织中呈高表达，EIF5A2和PRMT5有助于评估NSCLC生物学行为和预后。

共激活蛋白相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)是蛋白质精氨酸甲基转移酶(protein arginine methyltransferase,PRMT)家族的成员,又称PRMT4.近年来,CARM1作为一种辅助转录调节因子已被广泛研究,并被发现在肿瘤、炎性疾病、糖尿病等疾病中具有重要作用.一方面,CARM1通过调节翻译后甲基化修饰参与表观遗传调控,另一方面通过RNA代谢、代谢重编程等形式调控基因表达过程.随着研究的深入,CARM1在恶性肿瘤中的调控作用及分子机制逐步被揭示,但其在不同肿瘤中的调控效应不尽相同,目前需进一步探索其在恶性肿瘤中的调控网络机制.本文就近年来恶性肿瘤中CARM1的作用及其分子机制展开综述,以期为今后的研究提供新思路.

目的 观察精氨酸甲基转移酶1(CARM1)在肾透明细胞癌细胞中表达情况,探讨其对上皮-间质转化和免疫细胞浸润的影响.方法 对数生长期肾透明细胞癌Caki-1细胞随机分为敲低组(转染CARM1敲低慢病毒)、过表达组(转染CARM1过表达慢病毒)、阴性对照组(转染阴性对照慢病毒).转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞CARM1 mRNA 相对表达量;转染 72 h,采用 Western blot 法检测 3 组细胞 CARM1、E-cadherin、N-cadherin、vimentin 蛋白相对表达量,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数.应用Coexpedia数据库筛选肾透明细胞癌组织中与CARM1共表达基因,应用STRING数据库生成蛋白质相互作用网络图,应用京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析CARM1共表达蛋白所涉及的信号通路.采用quanTIseq肿瘤浸润免疫细胞定量分析CARM1基因与肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、混合肾癌、肾嫌色细胞癌中免疫细胞浸润评分的Pearson相关系数,筛选具有显著相关性的肾癌肿瘤免疫细胞;采用TIMER免疫细胞浸润分析CARM1基因表达与不同肾癌肿瘤免疫细胞浸润水平的相关性.结果 转染48 h,过表达组细胞CARM1 mRNA相对表达量(3.59±0.27)高于阴性对照组(1.00±0.01)、敲低组(0.43±0.06)(P＜0.05),阴性对照组高于敲低组(P＜0.05).转染72 h,过表达组细胞E-cadherin蛋白相对表达量(0.44±0.04)低于阴性对照组(1.00±0.05)、敲低组(2.06±0.10)(P＜0.05),CARM1、N-cadherin、vimentin 蛋白相对表达量(2.15±0.19、4.44±0.39、2.87±0.23)均高于阴性对照组(1.00±0.07、1.00±0.05、1.00±0.07)、敲低组(0.45±0.08、0.48±0.08、0.45±0.04)(P＜0.05);阴性对照组细胞E-cadherin蛋白相对表达量低于敲低组(P＜0.05),CARM1、N-cadherin、vimentin蛋白相对表达量均高于敲低组(P＜0.05).转染72 h,过表达组侵袭细胞数[(178±10)个]多于敲低组[(44±4)个]、阴性对照组[(83±4)个](P＜0.05),阴性对照组多于敲低组(P＜0.05).Coexpedia数据库筛选出肾透明细胞癌组织中与CARM1基因共表达的前100个基因,构建蛋白质相互作用网络显示CARM1与转录因子FOS、JUN、CREBBP等蛋白相互作用,提示CARM1可能参与下游蛋白的转移翻译.KEGG富集分析结果显示,CARM1共表达基因主要富集于细胞周期、PI3K/Akt信号通路、RNA运输、聚焦黏附等信号通路.quanTIseq肿瘤浸润免疫细胞定量分析结果显示,CARM1在多种肾癌中与中性粒细胞的表达呈正相关.TIMER免疫细胞浸润分析结果显示,肾透明细胞癌中B淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞浸润水平与CARM1表达均呈正相关.结论 CARM1通过下调E-cadherin表达,上调N-cadherin、vimentin表达调控肾透明细胞癌细胞上皮-间质转化,促进肾透明细胞癌侵袭;CARM1可能与多种蛋白相互作用,影响细胞生命活动,参与多种肾癌的肿瘤免疫应答.

目的·研究蛋白质精氨酸甲基转移酶6(protein arginine methyltransferase 6,PRMT6)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法·通过R语言分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中PRMT6 mRNA在多种癌症中的表达情况.采用基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA2)在线数据库分析PRMT6在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达差异.利用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库获得人正常乳腺组织和乳腺癌组织的免疫组织化学数据,分析PRMT6的蛋白表达情况.使用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测27例乳腺癌组织及配对癌旁组织中PRMT6的表达.通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染技术在MDA-MB-231和MCF-7细胞系中敲低PRMT6,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及Western blotting在转录和蛋白水平验证PRMT6的敲低效率.通过细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆形成实验探究PRMT6对乳腺癌细胞增殖能力的影响.通过细胞划痕实验和Transwell实验探究PRMT6对乳腺癌细胞迁移能力的影响.利用基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中GSE210948数据集的转录组测序数据分析对照组和PRMT6低表达组的差异基因,并进行京都基因与基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析.使用流式细胞术进行细胞周期分析.采用Western blotting技术检测增殖和迁移相关靶蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达.结果·生物信息学相关分析显示,PRMT6在乳腺癌组织中的表达高于正常乳腺组织(P=0.000).IHC结果显示,PRMT6在乳腺癌组织中的表达显著高于配对癌旁组织(P=0.001).qRT-PCR及Western blotting验证MDA-MB-231和MCF-7细胞系中PRMT6的mRNA及蛋白质表达水平,发现与对照组相比,siRNA(siPRMT6#1、siPRMT6#2)显著降低两种细胞中PRMT6 mRNA(P=0.006,P=0.004;P=0.001,P=0.043)和蛋白(P=0.035,P=0.001;P=0.003,P=0.002)的表达水平.敲低PRMT6显著降低MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖(P=0.014,P=0.000;P=0.003,P=0.003)和迁移能力(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.002).KEGG通路富集分析显示,PRMT6的表达影响细胞周期通路.Western blotting结果显示,敲低PRMT6后,与细胞周期通路相关的cyclin D1蛋白水平下降(P=0.021,P=0.000;P=0.034,P=0.014);qRT-PCR结果显示,敲低PRMT6后,cyclin D1转录水平明显下降(P=0.036,P=0.001;P=0.044,P=0.000).流式细胞术结果显示,敲低PRMT6后,G0/G1期细胞增加(P=0.000;P=0.003),G2/M期细胞减少.下调PRMT6表达后,与细胞迁移相关的E-cadherin表达增加(P=0.002,P=0.012;P=0.043,P=0.003),N-cadherin(P=0.004,P=0.041;P=0.032,P=0.034)和Vimentin(P=0.028,P=0.005;P=0.024,P=0.001)的蛋白表达减少.结论·PRMT6在乳腺癌组织中表达升高,可促进乳腺癌的增殖和迁移.

目的 探讨灵芝多糖肽(GLPP)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、迁移和凋亡的影响,及相关作用机制.方法 将OCI-LY19细胞分为对照组、GLPP组、si-NC组、si-蛋白质精氨酸甲基转移酶6(PRMT6)组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组.si-NC 组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组分别转染 si-NC、si-PRMT6、pcDNA3.1-NC 和 pcDNA3.1-PRMT6.待转染完成后,对照组、si-NC组和 si-PRMT6 组均用 RPMI-1640 培养基培养,GLPP 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组均用含 20 μg·mL-1 GLPP的RPMI-1640培养基培养.培养24 h后,检测各组细胞的增殖抑制率、迁移数和凋亡率,用蛋白质印迹法检测细胞中PRMT6蛋白的表达水平.结果 si-NC组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC 组和 GLPP+pcDNA3.1-PRMT6 组的细胞增殖抑制率分别为(1.28±0.16)％、(38.61±3.29)％、(52.84±7.74)％和(22.75±3.87)％;对照组、GLPP 组、si-NC 组、si-PRMT6 组、GLPP+pcDNA3.1-NC组和GLPP+pcDNA3.1-PRMT6组的细胞迁移数目分别为(252.65±24.65)、(136.54±16.46)、(231.65±21.24)、(142.76±15.34)、(140.23±9.84)和(192.38±23.38)个,凋亡率分别为(4.36±0.52)％、(28.24±2.36)％、(4.23±0.45)％、(24.54±2.27)％、(28.42±3.85)％和(14.25±2.13)％,PRMT6 蛋白相对表达水平分别为 1.82±0.21、0.56±0.05、1.78±0.19、0.54±0.05、0.29±0.02 和 0.32±0.03.对照组的上述指标与GLPP组比较,si-NC组的上述指标与si-PRMT6组比较,GLPP+pcDNA3.1-NC组的上述指标与GLPP+pcDNA3.1-PRMT6组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 GLPP可通过下调PRMT6表达,抑制DLBCL细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡.

辅激活蛋白关联精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyltransferase 1,CARM1)是一种Ⅰ型蛋白质精氨酸甲基转移酶,可以催化组蛋白和非组蛋白底物的精氨酸残基不对称二甲基化.越来越多的研究发现CARM1在多种类型的恶性肿瘤中表达水平升高并发挥促癌作用.高表达的CARM1可通过多种机制促进肿瘤的发生及进展,例如影响肿瘤免疫、肿瘤代谢、自噬等.因此,CARM1被认为是一个极具潜力的抗肿瘤靶点,已有研究尝试开发靶向CARM1的小分子抑制剂治疗恶性肿瘤.尽管目前利用CARM1抑制剂治疗恶性肿瘤还处于临床前研究阶段,但在体内外试验中已展现出很好的治疗前景.针对CARM1的靶点干预可能为肿瘤治疗提供新策略.全文主要对CARM1的分子结构、肿瘤生物学功能、分子机制以及CARM1特异性抑制剂进行综述.

目的:肥胖会导致肥胖相关性肾病(obesity related glomerulopathy,ORG),但其发病机制并不明确.本研究拟检测早期生长反应蛋白3(early growth response protein 3,EGR3)在ORG患者和高脂饮食诱导的肥胖小鼠肾皮质组织中的表达,并探讨EGR3抑制棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的人足细胞炎症损伤的分子机制.方法:收集排除其他疾病导致的肾损害并经组织病理学证实的ORG患者(n=6)和高脂饮食诱导的肥胖小鼠的肾皮质组织(n=10).使用150 μmol/L PA干预人和小鼠足细胞48 h;人足细胞中分别过表达或沉默EGR3.采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-1β的含量;real-time RT-PCR检测EGR3、足细胞分子标志 NPHS1(nephrosis 1)、NPHS2(nephrosis 2)、足糖萼蛋白(podocalyxin,PODXL)、平足蛋白(podoplanin,PDPN)mRNA的表达;RNA-seq检测人足细胞过表达EGR3并150 μmol/L PA干预后与对照组的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs);免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)+液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS)检测EGR3可能的相互作用蛋白质,并与RNA-seq的结果取交集;Co-IP验证EGR3与蛋白精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltransferases 1,PRMT1)的相互作用;沉默EGR3和PRMT1抑制剂干预后检测PA诱导的足细胞培养液中IL-6和IL-1β的含量;蛋白质印迹法检测分别过表达或沉默EGR3后磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)的蛋白质表达.结果:EGR3在ORG患者和高脂饮食诱导的肥胖小鼠肾皮质组织中的表达均显著上调(均P<0.01),150 μmol/L PA干预人和小鼠足细胞48 h后显著上调2种细胞EGR3的表达(均P<0.05).人足细胞过表达或沉默EGR3分别抑制或促进PA干预后细胞培养液中IL-6和IL-1β的分泌,并分别上调或下调NPHS1、PODXL、NPHS2及PDPN的表达(均P<0.05).RNA-seq结果显示共有988个DEGs,Co-IP+LC-MS共发现238个可能与EGR3相互作用的蛋白质,且Co-IP证实PRMT1为EGR3的相互作用蛋白质.PRMT1抑制剂能部分减少人足细胞沉默EGR3后PA诱导的IL-6及IL-1β的分泌(均P<0.05);此外,过表达或沉默EGR3负调控PRMT1及p-STAT3的表达.结论:EGR3可能通过抑制PRMT1/p-STAT3通路减轻ORG足细胞炎症损伤.

目的:探究白藜芦醇(Res)通过调控PRMT5表达对肝胆管癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭、细胞周期的影响及其机制.方法:常规培养正常肝细胞LO2和SMMC-7721细胞,用0、20、40、80 μmol/L的Res进行处理,用qPCR法、MTT法、Transwell实验、流式细胞术和WB法分别检测Res处理后PRMT5 mRNA在LO2和SMMC-7721细胞中的表达,Res对SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡,以及PRMT5、cyclin D1和cyclin E1蛋白表达的影响.结果:PRMT5在SMMC-7721细胞中呈高表达(P<0.01);20、40、80 μmol/L Res均能明显抑制PRMT5 mRNA和蛋白在SMMC-7721细胞中的表达(均P<0.01),抑制SMMC-7721细胞的增殖能力(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05),阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期并促进其凋亡(P<0.01),明显抑制SMMC-7721细胞中周期蛋白cyclin D1、cyclin E1蛋白的表达(P<0.01).结论:PRMT5在SMMC7721细胞中呈高表达,Res可有效抑制SMMC-7721细胞的增殖和侵袭能力并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PRMT5表达相关.

骨骼肌萎缩不仅严重影响患者日常活动能力,也是造成诸如2型糖尿病等代谢性疾病的重要诱因.运动干预是改善骨骼肌萎缩的有效手段,最新研究发现蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)作为运动敏感型蛋白,通过发挥其转录共激活和精氨酸甲基转移酶的双重作用,可调节多条信号通路以改善骨骼肌萎缩.因此,全面了解PRMT1在运动改善骨骼肌萎缩中的作用机制对于未来以PRMT1为靶点开发治疗肌萎缩的新途径具有重要意义.