目的:对活禽市场环境中检出的3份H5N6亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）标本进行测序鉴定和基因特征分析，为预防人感染H5N6亚型AIV提供依据。方法:通过实时荧光定量PCR确定病毒型别，采用二代测序方法对病毒血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）基因序列进行测序。使用NCBI中BLAST模块进行比对，用Mega7.0软件构建进化树并进行基因特征分析。结果:3份H5亚型阳性标本经测序鉴定为H5N6亚型AIV，属于Clade2.3.4.4支系。病毒的HA蛋白存在6个连续碱性氨基酸（LRERRRKRGL，其中R，K为碱性氨基酸）；病毒HA蛋白的受体结合位点238~240位氨基酸是QRG（氨基酸排序以H3-HA为准），受体特征为禽源；NA蛋白第69~73位点氨基酸未出现茎缺失。结论:环境中3份H5亚型AIV核酸阳性病毒鉴定为新型H5N6亚型AIV，属于高致病AIV，但具有不容易感染人的受体结合特征。活禽市场中持续存在H5N6病毒，对人类健康和公共卫生存在威胁，需要继续加强监测。

目的:分析淮南市2016年度外环境标本中H7N9禽流感病毒基因组特征。方法:采集活禽市场禽类粪便、笼具、台面或砧板、脱毛机、禽类饮水、污水等标本，选取H7N9、H9亚型PCR检测阳性标本( Ct值≤30)，鸡胚分离培养后提取RNA，扩增8个基因节段进行基因序列测定、分子特征与进化分析。 结果:2016年150份淮南市外环境标本检出H7N9亚型46份、H9亚型71份、H5亚型38份；2份H7N9亚型分离成功。基因进化分析显示，淮南市2株H7N9禽流感毒株血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因均处于长三角分支内，其余6个内部基因无明显地域分布聚类；HA氨基酸受体位点出现G186V、Q226L位点变异，NA茎区缺失了"QISNT"序列，R294K、E119V耐药位点没有发生突变；聚合酶发生PA基因I550L，PB1基因I368V，PB2基因I504V突变；NS1基因出现增强致病力的位点N205S、P42S改变；耐药相关位点出现M1基因N30D、T215A，M2基因S31N突变。结论:2016年淮南市活禽市场禽流感病毒高度流行，H7N9亚型感染人类的能力有所增强，M2离子通道抑制剂耐药，NA抑制剂仍为敏感有效药物。

目的:了解2015—2020年流感流行季北京市流感流行特征。方法:使用北京市2015—2020年流感样病例(influenza-like illness，ILI)和流感病原学监测数据，分析流感流行趋势和流感病毒流行特征。结果:2015年第27周至2020年第26周共涉及5个流感流行季，流感样病例百分比(percentage of influenza-like illness，ILI%)为1.58%。共检测ILI标本96 892件，流感病毒核酸阳性率为16.32%，其中A(H3N2)亚型6 474件(40.89%)、甲型H1N1 4 410件(27.86%)、乙型Victoria系3 290件(20.78%)、乙型Yamagata系1 597件(10.09%)。ILI周报告数、ILI%与流感病毒阳性率变化趋势基本一致( r＝0.796， P<0.001； r＝0.808， P<0.001)。2017—2018年和2018—2019年流行季活跃期较长。2017—2018、2018—2019年流行季ILI周报告数较高(49 628人次和71 555人次)，核酸阳性率峰值较高(58.51%和57.08%)。 结论:2015—2020年北京市流感流行符合北半球流行特征，其中2017—2018和2018—2019流行季活跃期较长、流行水平较高，且各流行季优势毒株不同。

目的:了解多重RT-PCR方法检测13种常见呼吸道感染病原体，在老年患者呼吸系统感染病原体检测中的应用价值。方法:317例2016年6月至2017年5月在石家庄市第一医院老年科就诊的具有呼吸系统感染症状的老年患者，年龄60～98岁，采集其抽吸痰液，提取病毒DNA/RNA，利用多重RT-PCR技术扩增，通过毛细管电泳，同时检测13种呼吸道病原体；并以直接测序方法和荧光实时PCR法为标准，评价该试剂的临床性能。结果:使用直接测序和荧光实时PCR结果为参照，多重RT-PCR技术的准确性为99.93% (95% CI: 99.79%～99.98%)，阳性预测值为99.24% (95% CI: 97.78%～99.74%)，阴性预测值为100% (95% CI: 99.9%～100%)，Cohen’s kappa值为0.9958 (95% CI: 0.965 2～1.026)。在317例老年患者中，呼吸道病原阳性检出率为75.7% (240/317)，其中甲型流感病毒最高，为20.2% (64/317)，主要为H3亚型(70.3% (45/64)；其次为鼻病毒、腺病毒、肺炎支原体和乙型流感病毒，检出率分别为15.5% (49/317)、13.6% (43/317)、11.0% (35/317)和10.1% (32/317)。此外，同时检出2种以及2种以上病原体的老年患者为81例，检出率为25.6% (81/317)。 结论:多重RT-PCR方法能满足临床对呼吸道病原体检测的需求，并为老年患者呼吸系统感染的防治提供有效的临床资料。

目的:利用纳米孔测序技术对新型重组H3N2禽流感病毒进行测序鉴定并分析病毒的基因特征。方法:对2021年广州市某农贸市场外环境H3N2禽流感阳性样本进行鸡胚培养，联合病毒全基因组序列靶向扩增和纳米孔测序技术进行病毒高通量测序。通过生物信息学软件，分析病毒基因特点。结果:系统发育进化树显示，该毒株各基因片段均属于欧亚进化分支，宿主来源均为禽源。其HA基因与我国H3N6禽流感病毒亲缘关系较近。NA基因与2017-2020年我国H3N2禽流感病毒亲缘关系较近。PB1基因与2016-2022年我国广西壮族自治区、福建省H5N6禽流感病毒亲缘关系较近，与广州市H5N6禽流感流行株PB1基因亲缘关系较远。其余内部基因片段来源复杂，具有明显的遗传多样性。分子特征显示，该毒株具有典型的低致病性禽流感病毒分子特征，倾向结合禽源受体。生物特性相关重要蛋白位点上，该毒株发生PB2-L89V、PB1-L473V、NP-A184K、M1-N30D/T215A、NS1-P42S/N205S等致病性增强突变。结论:本研究通过纳米孔测序鉴定一株新型重组H3N2禽流感病毒，分析发现该病毒与H5N6禽流感病毒发生了基因重组。目前该病毒跨种传播能力较低，但有必要密切关注H3亚型禽流感病毒的流行和变异。

目的:了解不同亚型禽流感病毒与不同动物来源红细胞的凝集特性，为流感环境样本监测工作选择更适宜的检测用红细胞。方法:选取2009-2016年我国禽流感环境监测中分离到的不同亚型的禽流感毒株，采用红细胞凝集试验，选用5种动物红细胞(鸡、火鸡、豚鼠、马和绵羊)进行检测；应用流式细胞仪检测不同动物红细胞表面唾液酸受体的表达及类型，通过氨基酸序列分析病毒血凝素蛋白受体结合区(receptor binding domain, RBD)的特征。结果:本研究共检测了14种亚型的28株禽流感病毒。结果显示所有毒株均能与火鸡和豚鼠红细胞发生凝集，其余红细胞均出现不能与某些毒株产生凝集的现象；其中1株H9N2(A/环境/安徽/43762/2015)毒株与鸡红细胞不产生凝集反应；1株H1N1(A/环境/山东/76972/2014)和2株H9N2(A/环境/重庆/79449/2014和A/环境/安徽/43762/2015)毒株与马红细胞不产生凝集反应；2株H9N2(A/环境/重庆/79449/2014和A/环境/安徽/43762/2015)和2株H13N8(A/环境/青海湖/166/2012和A/环境/青海湖/13/2012)毒株与绵羊红细胞不产生凝集反应。流式检测结果显示在火鸡、鸡和豚鼠红细胞表面可检测到两种类型唾液酸受体α2，3和α2，6，但两种受体表达比例不同；马和绵羊红细胞表面唾液酸受体只检测到表达α2，3。序列分析提示病毒RBD关键区域的氨基酸替换可能是影响病毒红细胞结合特性的重要因素。结论:在禽流感病毒检测中，火鸡和豚鼠红细胞在红细胞凝集试验中敏感性最好。不同来源的红细胞其受体表达及类型会显著影响不同亚型禽流感病毒的凝集反应，同时RBD关键区域的氨基酸变化也会影响病毒与不同红细胞的结合。

流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，严重危害人群健康。流感病毒抗原性易变，传播迅速，每年可引起季节性流行，在学校、托幼机构和养老院等人群聚集的场所易发生暴发疫情。每年季节性流感流行在全球可导致300万~500万重症病例，29万~65万呼吸道疾病相关死亡。孕妇、婴幼儿、老年人和慢性基础性疾病患者等高危人群，患流感后出现严重疾病和死亡的风险较高。2023年2月中旬至4月底，我国呈现一波以甲型H1N1亚型为主的流感流行季，强度略高于新冠疫情前的自然流行年份，今冬明春可能会面临新冠、流感等呼吸道传染病交互或共同流行的风险。接种流感疫苗是预防流感、减少流感相关重症和死亡的有效手段，可以减少流感相关疾病带来的危害及对医疗资源的挤兑。我国现已批准上市的流感疫苗有三价灭活流感疫苗（IIV3）、四价灭活流感疫苗（IIV4）和三价减毒活流感疫苗（LAIV3），其中IIV3和IIV4包括裂解疫苗和亚单位疫苗，LAIV3为减毒疫苗。流感疫苗在我国属于非免疫规划类疫苗，居民自愿接种。自2018年起，中国疾病预防控制中心在每年流感流行季之前均更新并印发当年度的《中国流感疫苗预防接种技术指南》。2022年9月以来，新的研究证据在国内外发表，新的流感疫苗在我国上市，为更好地指导我国流感预防控制和疫苗使用工作，国家免疫规划技术工作组流感疫苗工作组收集和整理国内外最新研究进展，在2022年版指南的基础上进行更新和修订，形成了《中国流感疫苗预防接种技术指南（2023-2024）》。本指南更新的内容主要包括：第一，增加了新的研究证据，尤其是我国的研究结果，包括流感疾病负担、疫苗效果、疫苗安全性监测、疫苗预防接种成本效果等；第二，更新了一年来国家卫生健康委员会、国家疾病预防控制局发布的流感防控有关政策和措施；第三，更新了2023-2024年度国内上市使用的流感疫苗种类；第四，更新了本年度三价和四价流感疫苗组分；第五，更新了2023-2024年度的流感疫苗接种建议。本指南建议：所有≥6月龄且无接种禁忌的人都应接种流感疫苗。≥18岁人群可在一次接受免疫服务时，在两侧肢体分别接种灭活流感疫苗和新冠疫苗；<18岁人群，建议流感疫苗与新冠疫苗接种间隔>14 d。对可接种不同类型或不同厂家疫苗产品的人群，可由受种者自愿选择接种任何一种流感疫苗，无优先推荐。结合流感疫情形势和多病共防的防控策略，尽可能降低流感的危害，优先推荐以下重点和高风险人群及时接种：①医务人员，包括临床救治人员、公共卫生人员、卫生检疫人员等；②≥60岁的老年人；③罹患一种或多种慢性病人群；④养老机构、长期护理机构、福利院等人群聚集场所脆弱人群及员工；⑤孕妇；⑥6~59月龄儿童；⑦6月龄以下婴儿的家庭成员和看护人员；⑧托幼机构、中小学校、监管场所等重点场所人群。对于接种灭活流感疫苗，6月龄~8岁儿童首次接种流感疫苗的应接种2剂次，间隔≥4周；2022-2023年度或以前接种过1剂次或以上流感疫苗的儿童，建议接种1剂次；≥9岁儿童和成年人仅需接种1剂次。对于接种减毒活流感疫苗，无论是否接种过流感疫苗，仅接种1剂次。建议各地在疫苗供应到位后尽早开展接种工作，尽量在当地流感流行季前完成接种。同一流行季，已按照接种程序完成全程接种的人员，无需再次接种。孕妇在孕期的任一阶段均可接种灭活流感疫苗。接种单位在整个流行季都可以提供接种服务。本指南适用于各级疾控机构、医疗机构、妇幼保健机构和接种单位等从事流感防治相关工作的专业人员。根据国内外研究进展，本指南今后亦将定期更新、完善。

目的:分析广州市2017－2018年流感疫情的流行特征，为流感疫情的防控提供参考依据。方法:采集2017－2018年流感疫情标本，采用多重实时荧光定量PCR方法检测流感病毒核酸。使用EXCEL 2010和SPSS 16.0软件进行数据统计和分析。结果:2017—2018年共采集流感疫情标本4 298份，流感病毒核酸阳性率为41.14 %。2017年和2018年均呈现双峰流行的特点，其中2017年流行高峰出现在5—8月和10月—次年1月，2018年流行高峰较2017年提前1至2个月，出现在3—6月和10—次年2月。2017年疫情流行株为甲型H3N2亚型和B型流感病毒，2018年疫情流行株为甲型H1N1流感病毒。0~19岁年龄组B型流感病毒为主要流行病原，20~29岁年龄组A型流感病毒为主要病原。幼儿园中A型流感病毒为主要病原，小学和初高中B型流感病毒为主要病原。不同年龄组的流感病毒核酸阳性率有统计学意义（ P<0.01），不同性别组流感病毒核酸阳性率差异无统计学意义（ P=0.373）。 结论:广州市2017—2018年流感疫情呈双峰流行，高峰期出现在4—7月和10—12月，不同流感型别交替流行，不同年龄组感染情况差异有统计学意义。

目的:研究2022—2024年盐城市分离的甲型H3N2流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)分子进化特征。方法:收集盐城市2022年4月至2024年3月间的流感哨点监测医院以及各县市区流感暴发点采集的流感样病例标本，Rt-qPCR进行核酸检测，阳性样本进行病毒分离。分离的甲型H3N2毒株，采用一步RT-PCR方法扩增HA1和NA基因并测序，采用相关生物信息学软件分析基因核苷酸、氨基酸位点变异及进化特征。结果:2022年4月至2024年3月间共采集5 020份样本，流感病毒核酸阳性检出率为18.59%(933/5 020)。2022年4月至2024年3月两个监测季冬春季流感峰明显，其中，仅2022年4月—2023年3月监测季夏季流感峰明显，甲型H3N2亚型流感病毒是两个监测季的优势流行株。遗传进化树显示：2022—2024年盐城市32株甲型H3N2毒株HA1和NA基因在各分支的聚类关系基本一致，2023—2024年24株分离株的HA1基因和NA基因与2022—2024年北半球疫苗株A/Darwin/9/2021(H3N2)聚类位于3C.2a1b.2a.2a.3a.1进化谱系；2022年8株分离株与2021—2022年北半球疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)聚类位于3C.2a1b.2a.1a进化谱系。6株分离株(A/JSTH/11735/2023、A/JSTH/11788/2023、A/JSTH/11974/2023、A/JSYD/353/2023、A/JSYD/354/2023、A/JSTH/138/2023)均发生F79L、N122D、P239S、K276E氨基酸位点的变异，既存在于散发株又存在于暴发株。盐城市甲型H3N2毒株HA1基因编码区抗原表位、受体结合位点、糖基化位点发生了一定程度变异，基因层面上分析，2023—2024年24株分离株与2022—2024年北半球疫苗株A/Darwin/9/2021免疫原性匹配性较好，2022年8株分离株与2021—2022年北半球疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020免疫原性匹配性较好。盐城市分离株未发生NA蛋白酶活性位点以及耐药位点的变化。结论:2022—2024年盐城市流行的甲型H3N2毒株HA1和NA基因正逐渐发生抗原性漂移，增加推荐疫苗株的不匹配度，造成流感的暴发流行。2022年盐城市分离株相对于疫苗株A/Darwin/9/2021(H3N2)已发生实质性抗原漂移。需要对甲型H3N2流感病毒进行动态监测及时发现变异株。

目的:分析整合酶(IN)区主要耐药突变对HIV-1 CRF01_AE毒株耐药的影响，并比较与B亚型毒株的差异。方法:根据美国斯坦福大学HIV耐药数据库选择7个IN区突变或联合突变(T66K、F121Y、Q148K、N155H、G118R、R263K、Q148K/N155H)，通过无缝克隆同源重组及点突变的方法引入到HIV-1 B亚型感染性克隆pNL4-3和CRF01_AE感染性克隆pGX002的IN区，转染293T细胞包装病毒，在MT2细胞上扩大培养并测定感染性滴度。检测4种整合酶链转移抑制剂(INSTIs)，拉替拉韦(RAL)、埃替拉韦(EVG)、多替拉韦(DTG)、比昔格韦(BIC)对14株突变病毒的半抑制浓度(IC 50)及其与野生型病毒相比提高的倍数。 结果:成功构建携带7个IN区突变或联合突变的B亚型和CRF01_AE质粒，包装获得14株重组病毒，感染性滴度为10 4~10 6半数组织细胞感染剂量(TCID 50)/ml，在MT2细胞高效复制，上清液中HIV-1 P24抗原浓度可达830~2 700 ng/ml。5个突变或突变组合(T66K、F121Y、Q148K、N155H、Q148K/N155H)均可导致CRF01_AE和B亚型毒株对RAL和EVG高度耐药，与野生病毒相比IC 50分别提高200倍和2 000倍以上，相同突变导致RAL和EVG对CRF01_AE的IC 50提高的倍数均显著低于B亚型( P<0.01)。Q148K/N155H突变导致B亚型和CRF01_AE对DTG和BIC高度耐药，IC 50提高50倍以上，其他突变对DTG和BIC的药物敏感性几乎无影响。 结论:构建了基于CRF01_AE和B亚型的14株携带不同INSTI耐药突变的HIV-1毒株，5个突变可导致对RAL和EVG的高水平交叉耐药，同一突变导致B亚型毒株耐药程度显著高于CRF01_AE毒株。Q148K和N155H突变组合可导致DTG和BIC的高度耐药，表明DTG和BIC耐药的遗传屏障高，可有效抑制携带INSTI耐药突变的毒株，且无明显的亚型耐药差异。