目的 利用蛋白质组学寻找抑制冠心病血瘀证的关键蛋白,并基于核因子(nuclear factoer,NF)-κB炎性信号通路和内皮细胞活化模型验证关键蛋白纤维连接蛋白(fibronectin 1,Fn)对冠心病血瘀证的作用.方法 将冠心病血瘀证组患者和健康组受试者的血清进行相对定量和绝对定量的等比标记(isobaic tag for relative and absolute quantitation,ITRAQ)蛋白质组学分析,将差异蛋白进行GO和KEGG功能富集,从与冠心病密切相关的富集通路中筛选出关键蛋白Fn.利用 60 μg/mL的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)构建内皮细胞活化模型,在内皮细胞活化模型中加入 5 μg/cm2、10 μg/cm2、20 μg/cm23个浓度的血浆Fn或敲减内皮细胞来源Fn的方法进行干预.分组为空白组、模型组、对照组、FnEC-KD 组、Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组.细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测各组 NF-κB 核位移和 NF-κB 蛋白表达水平,ELISA 检测培养上清的细胞间黏附分子(intercellular cell adhesion molecule,ICAM)-1、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM)-1、前列环素 I-2(Proataglandin-I-2,PGI2)、内皮素的蛋白含量.结果 血清蛋白质组学结果显示健康组和冠心病血瘀证组存在 121 种差异蛋白,51 种血瘀证组下调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞外基质-受体相互作用途径,70 种血瘀证组上调蛋白集中在补体与凝血级联、肌动蛋白细胞骨架的调节、血小板活化、吞噬体途径.Fn与冠心病密切相关且在血瘀证患者中下调.细胞实验发现各组NF-κB总蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较模型组NF-κB 核位移增强,ICAM-1、VCAM-1、内皮素表达上调,PGI2 分泌下调(P<0.05);与模型组比较,Fn5 组、Fn10 组、Fn20 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素分泌下调(P<0.05),PGI2 分泌显著上调(P<0.05);与模型组比较,FnEC-KD 组NF-κB 核位移减弱,VCAM-1、ICAM-1、内皮素表达含量明显降低(P<0.05),PGI2 表达明显增加(P<0.05).结论 血浆Fn抑制内皮细胞活化和功能障碍,内皮细胞来源的Fn促进内皮细胞活化和功能障碍.

目的:观察滋阴化痰方调控外泌体对小鼠胃癌皮下瘤的干预作用。方法:取对数生长期的第4代人胃癌细胞株MGC-803细胞，按随机数字表法分为外泌体对照组和低、高剂量组，低、高剂量组分别加入25、100 μg/ml的滋阴化痰方进行干预，48 h后提取各组MGC-803细胞分泌的外泌体。将20只BALB/c雄性小鼠按随机数字表法分为外泌体对照组、滋阴化痰方低剂量组、滋阴化痰方高剂量组和空白对照组，每组5只。除空白对照组外，其余各组小鼠分别经眼眶注射对应组细胞提取的外泌体，每只10 μg/次，隔日1次，共15次；空白对照组注射等量PBS。末次给药后以SGC-7901细胞接种小鼠建立肿瘤模型。观测小鼠体重及成瘤情况。采用免疫组化染色观察肿瘤组织血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1, CD31)、VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFG)表达。结果:与空白对照组比较，滋阴化痰方高剂量组肿瘤重量[(170.00±10.00)mg比(343.33±20.82)mg]降低( P<0.05)，肿瘤CD31[(37.43±0.55)比(63.30±0.85)]、VEGF[(11.37±1.19)比(70.30±0.72)]、bFGF[(43.77±1.53)比(84.97±1.86)]表达均降低( P<0.05)。与外泌体对照组比较，滋阴化痰方低、高剂量组CD31、VEGF、bFGF表达均降低( P<0.05)。 结论:滋阴化痰方可调控外泌体抑制小鼠胃癌皮下瘤的生长，这种作用可能与抑制肿瘤血管新生有关。

目的:建立大鼠肺动脉内皮细胞(PAEC)、肺静脉内皮细胞(PVEC)以及肺微血管内皮细胞(PMVEC)的体外分离和培养方法，分析3种肺血管内皮细胞的生物学特征及功能。方法:本研究为实验研究。精分1只雄性SD大鼠肺动脉、肺静脉，肺组织取边缘剪碎，各样本分别用混合酶液消化，以血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)免疫磁珠法分选内皮细胞，用内皮细胞专用培养基培养。倒置显微镜下观察3种肺血管内皮细胞的形态差别，通过免疫荧光鉴定各组细胞纯度。通过免疫荧光和Western blot观察3组细胞血管性血友病因子(vWF)和平滑肌激动蛋白抗体(α-SMA)蛋白表达情况。通过基质胶体外成环实验比较3组细胞1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5 h成环情况。采用SPSS 22.0和FlowJo 10软件进行统计学分析和统计作图。结果:3组细胞24 h后均迅速贴壁，vWF免疫荧光染色均为阳性。3组细胞形态均为铺路石状，其中PAEC为典型的铺路石状，大多数呈椭圆形；而PVEC、PMVEC形态更细长。免疫荧光显示PVEC和PMVEC细胞浆内少量α-SMA蛋白弥散表达[(0.16±0.03)、(0.23±0.01)]，而PAEC中几乎观察不到α-SMA蛋白表达(0.06±0.01)。随着时间推移，3种肺血管内皮细胞成环周长均呈先上升后下降趋势，其中PVEC组成环长度最长。3组细胞成环周长在组间、时点间、时间和组间交互作用差异均具有统计学意义( P值均<0.01)。 结论:该方法所获得的3种肺血管内皮细胞纯度高，可在体外稳定培养。3种血管内皮细胞生物学功能有差别，其中PVEC体外成环能力最强。PAEC细胞表达α-SMA蛋白量最少。

目的:探讨缺氧条件下，中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法:内皮细胞分为4组：(1)内皮细胞与系膜细胞共培养，加IMD处理作为HEMI组；(2)内皮细胞与系膜细胞共培养，无处理作为HEM组；(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组；(4)内皮细胞无处理作为HE组；将各组细胞在1%O 2、94%N 2、5%CO 2条件下缺氧培养12 h后，蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达，实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量，体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000， F＝0.734、1.244、6.134， P<0.05)，差异有统计学意义；血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000)，差异无统计学意义( F＝5.083、5.434、6.428， P>0.05)；VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000， F＝8.307、10.896， P<0.01)，ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294， F＝0.132， P<0.05)，差异有统计学意义；体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525， F＝5.926、0.030、1.033， P<0.05； F＝6.753， P>0.05)。 结论:缺氧条件下，IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞，促进血管形成。

目的:探讨CO 2点阵激光Fusion融合模式对小鼠皮肤增生性瘢痕(HS)的影响及其机制。 方法:将50只雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分成空白对照组(空白涂膜剂基质0.1 ml)、模型组(空白涂膜剂基质0.1 ml)、10 mJ激光治疗组(10 mJ组)、20 mJ激光治疗组(20 mJ组)和阳性对照复方醋酸地塞米松乳膏(DXM，0.1 ml)组，每组10只。空白对照组皮下注射生理盐水，其余各组小鼠均于背部皮肤注射博来霉素(BLM)(1 mg/ml)制作HS模型，3周后采用温哥华瘢痕量表(VSS)评估皮肤瘢痕增生情况。治疗4周后处死小鼠，取瘢痕全层皮肤组织，苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色法观察病理形态，免疫荧光染色检测血小板内皮细胞黏附分子(CD31)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)表达。组间数据比较采用单因素方差分析，最小显著性差异法(LSD)或Tamhane’s T2法进行两两比较。结果:模型组、10 mJ组、20 mJ组和DXM组VSS总评分高于空白对照组[(7.900±0.800)、(8.200±0.600)、(8.000±0.700)、(7.900±0.700)分比(0.000±0.000)分， t＝31.227、43.218、36.140、35.689， P均<0.05]，差异均有统计学意义。治疗4周后，空白对照组小鼠背部皮肤组织中表皮细胞排列整齐，层次清晰；模型组有较厚的表皮增生；10 mJ组有少量毛囊生出；20 mJ组毛囊排列较整齐；DXM组基本无表皮增生。空白对照组、10 mJ组、20 mJ组、DXM组的CD31、TGF-β1染色强度以及α-SMA、FN、Col Ⅰ蛋白相对表达量均明显低于模型组，且20 mJ组低于10 mJ组[α-SMA(3.840±0.410)、(2.560±0.260)、(2.180±0.250)、(1.330±0.150)比(0.980±0.120)， t＝21.171、17.448、13.684、5.762；FN(3.880±0.420)、(2.920±0.300)、(2.460±0.260)、(1.180±0.140)比(1.020±0.140)， t＝20.429、18.149、15.421、2.556；Col Ⅰ(3.360±0.340)、(2.480±0.260)、(2.020±0.220)、(1.360±0.180)比(1.000±0.160)， t＝19.861、15.330、11.857、4.727， P均<0.05]，差异均有统计学意义。 结论:CO 2点阵激光Fusion融合模式可减轻小鼠皮肤瘢痕增生，其机制可能与抑制瘢痕组织中CD31、TGF-β1和α-SMA、FN、Col Ⅰ蛋白表达有关。

目的:探究趋化因子和黏附分子在肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)发病机制中的作用及其临床意义。方法:纳入2014年至2016年丹阳市人民医院收治的35例HFRS患者。根据病期患者被分为发热期8例，低血压少尿期13例，多尿期8例，恢复期6例，并根据病情轻重分为轻症组19例和重症组16例。纳入20名健康者作为健康对照组。按病期采集血标本，分别检测血浆趋化因子、黏附分子、白细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、血小板计数、凝血功能指标、肌酸激酶同工酶、肝肾功能相关指标。统计学分析采用LSD- t检验。 结果:重症组发热期和低血压少尿期单核细胞趋化蛋白-1水平分别高于健康对照组( t＝3.239、5.585)，重症组发热期和低血压少尿期血浆白细胞介素-8水平分别高于轻症组( t＝2.201、3.670)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。重症组发热期和低血压少尿期的P选择素( t＝4.621、5.129)、L选择素( t＝5.321、5.641)、E选择素( t＝14.915、10.726)和细胞间黏附分子-1( t＝9.071、9.580)水平分别与健康对照组比较，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。白细胞介素-8和单核细胞趋化蛋白-1分别与白细胞计数( r＝0.521、0.355)、中性粒细胞计数( r＝0.512、0.457)、单核细胞计数( r＝0.479、0.387)呈正相关(均 P<0.01)。重症组肌酸激酶同工酶、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶在发热期( t＝4.049、3.887、6.021、4.660)与低血压少尿期( t＝4.614、3.955、4.937、4.396)均升高，与健康对照组相比差异均有统计学意义(均 P<0.01)。重症组尿素氮、肌酐在发热期( t＝11.127、8.342)和低血压少尿期( t＝10.078、6.011)均升高，与健康对照组相比差异均有统计学意义(均 P<0.01)。肌酸激酶同工酶与P选择素、L选择素、E选择素呈正相关( r＝0.365、0.401、0.425， P＝0.002、0.013、0.004)。重症组发热期和低血压少尿期活化部分凝血活酶时间( t＝6.977、7.862)、国际标准化比值( t＝6.326、6.664)、D-二聚体( t＝9.455、10.848)水平分别高于健康对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。重症组纤维蛋白原在发热期和低血压少尿期分别低于健康对照组，差异均有统计学意义( t＝-3.614、-5.674，均 P<0.01)。重症组血小板计数在发热期与低血压少尿期分别低于健康对照组( t＝-12.795、-14.160)，而血小板平均体积在发热期和低血压少尿期分别高于健康对照组( t＝8.132、9.976)，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:HFRS患者趋化因子和黏附分子所介导的白细胞和内皮细胞的相互作用是引起毛细血管损伤和多器官损伤的重要因素。

目的:探讨替吉奥联合奥沙利铂对晚期胃癌患者生存周期及血清甲胎蛋白（AFP）、糖类抗原242（CA242）的作用。方法:选取2016年10月至2019年10月合肥市第三人民医院收治的100例晚期胃癌患者，按随机数字表法分为两组，各50例。对照组采用亚叶酸钙+氟尿嘧啶+奥沙利铂治疗，观察组采用替吉奥联合奥沙利铂治疗。比较两组缓解率、疾病控制率、中位无进展生存期（PFS）、中位总生存期（OS）、不良反应发生情况；比较两组治疗前后血清肿瘤标志物AFP、CA242、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）、糖类抗原19-9（CA19-9）水平；比较两组治疗前后促肿瘤生长指标血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）水平；比较两组治疗前后微小RNA（miR）216a、miR95、miR4286水平。结果:观察组缓解率为42.0%（21/50），高于对照组的22.0%（11/50），差异有统计学意义（ P<0.05）。观察组治疗后AFP、CA242、CEA、CA125、CA19-9均低于对照组[（15.04 ± 3.65）μg/L比（20.65 ± 4.17）μg/L、（20.88 ± 6.37）kU/L比（35.46 ± 7.33）kU/L、（8.65 ± 2.13）μg/L比（15.39 ± 3.25）μg/L、（26.15 ± 8.49）kU/L比（34.16 ± 7.50）kU/L、（22.29 ± 5.80）kU/L比（38.81 ± 6.79）kU/L]，差异均有统计学意义（ P<0.05）。观察组治疗后VEGF、MMP-2、MMP-9、IGF-1、PECAM-1低于对照组；观察组治疗后miR216a高于对照组，miR95、miR4286低于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组中位PFS为3.0个月，中位OS为6.6个月，观察组中位PFS为3.3个月，中位OS为7.0个月，差异均无统计学意义（ P>0.05）。观察组骨髓抑制、皮肤损害发生率低于对照组[6.0%（3/50）比24.0%（12/50）、4.0%（2/50）比18.0% （9/50）]，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期胃癌，能提高抗癌效果，促进病情缓解，安全性高，其机制可能与抑制促肿瘤生长指标、调控miR有关。

目的:观察孔源性视网膜脱离（RRD）伴格子样变性（LD）患眼玻璃体液中相关细胞因子表达水平。方法:临床观察性研究。2022年5月至2023年2月于东南大学附属中大医院及南京医科大学附属眼科医院检查确诊且首次行玻璃体切割手术（PPV）治疗的RRD伴或不伴LD患者43例43只眼纳入研究。将患者分为RRD伴LD组（LD组）、RRD不伴LD组（Non-LD组），分别为27例27只眼、16例16只眼。选取同期特发性黄斑裂孔患者6例6只眼、特发性视网膜前膜患者4例4只眼作为对照组。PPV开始未开放眼内灌注前，切除并抽吸未稀释的中央部玻璃体液0.5 ml。采用Luminex高通量多因子检测技术定量检测玻璃体液中单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白（MIP）-1α、MIP-1β、干扰素-γ诱导蛋白-10 （IP-10）、白细胞介素（IL）-6、IL-8、巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）、肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、细胞间黏附分子（ICAM）-1、血管细胞黏附分子（VCAM）-1、血小板内皮细胞黏附分子（PECAM）-1、胎盘生长因子（PLGF）、血管内皮生长因子（VEGF）浓度。组间细胞因子表达水平比较采用Kruskal-Wallis秩和检验，DSCF法校正事后两两比较的显著性水平。结果:LD组、Non-LD组、对照组患眼IL-6 （ H=14.400）、IL-8 （ H=13.610）、MCP-1（ H=12.050）、VEGF （ H=9.920）、MIP-1α （ H=6.620）、IP-10 （ H=7.780）、MIF （ H=12.920）、PECAM-1（ H=9.990）、ICAM-1 （ H=8.070）、PLGF （ H=16.850）浓度比较，差异有统计学意义（ P<0.05 ）。组间两两比较，LD组玻璃体液中IL-6、IL-8、PLGF浓度高于Non-LD组，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:RRD伴LD患眼玻璃体液中IL-6、IL-8、PLGF表达水平升高。

目的:探讨高压氧处理对急性心肌梗死（AMI）大鼠心脏微血管功能及心室重构的影响。方法:选取33只雄性SPF级SD大鼠，按照随机数字表法分为假手术组、模型组和高压氧组，每组11只。模型组和高压氧组大鼠打开胸腔后在肺圆锥和左心耳之间下缘2～3 mm处进行结扎，术后缝合胸腔；高压氧组大鼠再进行高压氧处理7次；假手术组大鼠打开胸腔后再进行缝合，并不进行结扎。应用酶联免疫吸附实验检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β含量；运用超声心动图和BL-420F生物机能实验系统检测大鼠心脏功能；Western blotting实验检测大鼠心肌组织磷酸化内皮型一氧化氮合酶（P-eNOS）和血小板内皮细胞黏附分子（PECAM-1）蛋白的表达水平，并进行Masson及HE染色，观察心室重构情况。结果:与假手术组比较，模型组大鼠左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、左室收缩压（LVSP）、左室内最大上升速率（+dp/dt max）明显降低，左室舒张末压（LVEDP）、左室内最大下降速率（-dp/dt max）明显升高（ P<0.01）。与模型组比较，高压氧组大鼠LVFS、LVEF、LVSP、+dp/dt max及梗死面积明显降低或缩小，LVEDP、-dp/dt max明显升高（ P<0.05）。与假手术组比较，模型组大鼠心肌组织P-eNOS和PECAM-1 表达水平明显降低（ P<0.01）；与模型组比较，高压氧组大鼠心肌组织P-eNOS和PECAM-1表达水平明显升高（ P<0.05）。与假手术相比，模型组大鼠心肌组织纤维化程度明显增高（ P<0.01）；与模型组对比，高压氧组大鼠心肌组织纤维化程度明显降低（ P<0.05）。与假手术相比，模型组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及hs-CRP水平明显增高（ P<0.01）；与模型组对比，高压氧组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及hs-CRP水平均明显低于模型组（ P<0.05）。 结论:高压氧处理可调节AMI大鼠体内炎症反应及心肌细胞的凋亡，减轻心肌组织的纤维化程度，从而改善临床症状。

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(氯沙坦)对乳腺癌脑转移肿瘤微环境的调节作用及其抑制肿瘤增殖的潜在机制。方法:取鼠源性4T1乳腺癌细胞株通过蛋白质免疫印迹(WB)法检测其血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、AngⅡ受体1型(AT1R)的表达水平；通过CCK-8实验检测对照组、氯沙坦组(氯沙坦)、紫杉醇组(化疗药，紫杉醇)、联合用药组(氯沙坦联合紫杉醇)4组中4T1乳腺癌细胞的增殖情况。建立4T1乳腺癌脑转移荷瘤小鼠模型，同样随机分为4组(每组 n＝4)，通过小鼠头颅MRI检查观察颅内肿瘤最大径及药物调节肿瘤的增殖情况；采用免疫组织化学及免疫荧光染色方法检测肿瘤微环境中胶原变化相关的α-1 Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、血管分布相关的血小板－内皮细胞黏附分子(CD31)及缺氧程度相关的缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达情况，评估氯沙坦对乳腺癌脑转移肿瘤微环境的作用。 结果:WB结果显示，与健康小鼠的脑组织相比，4T1乳腺癌细胞中AngⅡ的表达量显著增高(分别为0.29±0.07和0.50±0.11， t＝3.28， P＝0.017)；AT1R基因表达为阳性。CCK-8实验结果显示，4组相对吸光度值的差异具有统计学意义( F＝556.40， P<0.001)，而对照组与氯沙坦组、紫杉醇组与联合用药组的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。小鼠头颅MRI结果显示，4组颅内肿瘤最大直径均呈线性增长趋势，差异具有统计学意义( F＝3.27， P＝0.049)；在药物治疗28 d，与对照组相比，氯沙坦组的肿瘤最大直径较小，与紫杉醇组相比，联合用药组的肿瘤最大直径较小，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示，4组COL1A1阳性率的差异具有统计学意义( F＝64.47， P<0.001)；免疫组织荧光染色结果显示，4组CD31、HIF-1α阳性率的差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:AngⅡ受体拮抗剂可能是通过调节乳腺癌脑转移肿瘤的微环境，降低缺氧程度，增强瘤内血管分布，提高化疗药物的治疗效果进而抑制肿瘤细胞的增殖，而非直接作用于肿瘤细胞。