目的:了解浙江省衢州地区儿童病毒性脑炎埃可病毒(Echovirus, ECHOV)优势血清型与变迁并分析ECHOV VP1基因分子特征。方法:采集53例病毒性脑炎患儿脑脊液标本进行病毒分离培养。采用荧光RT-PCR和PCR分别检测脑脊液标本中人肠道病毒(human enterovirus，HEV)包括ECHOV、柯萨奇病毒(coxsackie virus，CV)和新型肠道病毒(enterovirus，EV)，以及流行性乙型脑炎病毒(japanese encephalitis virus, JEV)、腮腺炎病毒(mumps virus, MuV)、西尼罗病毒(west nile virus，WNV)、基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)和巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)。HEV阳性脑脊液标本采用RT-PCR法扩增HEV-B组全长VP1基因序列，测序后用多种生物信息学软件分析ECHOV VP1基因型、基因重组和遗传进化特征。结果:RD细胞分离培养出6株毒株，但Hep-2细胞分离培养结果均阴性。11份标本HEV通用荧光RT-PCR结果阳性，但其他病毒检测结果均阴性。11份HEV阳性标本中6份检出ECHOV，与分离培养结果一致，分别为4株ECHO6、1株为ECHO7和1株ECHO30血清型，柯萨奇病毒和EV检测结果均阴性。4株ECHO6病毒属于ECHO6-C2基因亚型，但分为ECHO6-41/46和ECHO6-45/48两个流行克隆，ECHO7和ECHO30分别属于ECHO7-C和ECHO30-C基因型。ECHO6与ECHO30病毒在进化过程中存在VP1基因重组。结论:ECHOV是该地区儿童病毒性脑炎主要病原体，且可能存在局部暴发流行。ECHO6与ECHO30病毒VP1基因存在重组可能性，ECHO6有成为ECHOV优势血清型的可能。

目的:建立一种实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增（reverse transcription recombinase-aided amplification，RT-RAA）技术检测寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）的方法，以实现ZIKV的现场快速筛查及诊断。方法:通过基因组序列比对，选择ZIKV保守序列设计RT-RAA特异性引物和探针，并用系列稀释的ZIKV重组质粒与毒株核酸验证方法的灵敏性与重复性，通过检测登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒等其他虫媒病毒验证方法的特异性。结果:建立的RT-RAA方法可在39 ℃恒温条件下30 min内对ZIKV进行高效扩增，检测系列稀释的ZIKV重组质粒，其95%检测限可达到15拷贝/反应，特异性强，与登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒虫媒病毒无交叉反应，且重复性好。结论:本研究建立的ZIKV的RT-RAA等温扩增方法，具有反应迅速，无需精密仪器，操作简单等优点，适合于应急快速检测。

目的:建立降低抗体依赖性增强(antibody-dependent enhancement，ADE)效应的抗体表达系统，以期降低目标抗体的ADE效应。方法:对哺乳细胞抗体表达载体Fc区进行L234A和L235A点突变，建立抗体表达载体pFRT-IgG1κ-FcM。选取前期工作中获得的1株具有显著ADE效应的抗体Wt-WNV利用pFRT-IgG1κ-FcM系统进行表达，获得突变后抗体FcM-WNV。ELISA检测FcM-WNV与靶抗原西尼罗病毒包膜蛋白DⅢ(West Nile virus envelope protein-DⅢ，WNV E-DⅢ)的结合，流式细胞术分析FcM-WNV与人高亲和力IgG Fc受体hFcγRⅠ(hCD64)的结合。假病毒感染宿主细胞(BHK21和K562)试验检测FcM-WNV的体外中和活性。结果:FcM-WNV与Wt-WNV表达水平相当，能识别结合WNV E-DⅢ，且呈浓度依赖效应；与Wt-WNV相比，FcM-WNV与hCD64的结合力明显减弱，表现为荧光强度明显降低；与前期实验结果一致，Wt-WNV在5 μg/ml的浓度下具有明显增强WNV假病毒感染K562细胞的作用，而FcM-WNV在5 μg/ml浓度下，能有效阻断假病毒感染K562和BHK21细胞。结论:本研究建立的抗体表达系统可有效降低目标抗体的ADE效应。

目的:基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification，RAA)和CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测，建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法:以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus，YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus，WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)、寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)为检测对象，设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)，建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应，评价方法的灵敏度和特异性，使用登革热疑似临床样本进行检测，并与荧光RT-PCR技术进行比较，同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果:RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39 ℃条件下，40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体，灵敏度达到1~10拷贝/μl，并且这8种病原体之间无交叉反应，临床样本均可100%检测出。结论:建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。

目的:建立西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)假病毒的体内感染模型，并对抗体WNV-XH1进行体内中和活性评价。方法:利用前期建立的可包装WNV假病毒的稳定细胞株制备假病毒上清，将上清浓缩后感染BHK21细胞检测假病毒滴度。假病毒经腹腔注入C57BL/J小鼠体内后进行生物发光成像，观测小鼠体内假病毒感染情况。同时感染后取血，ELISA检测小鼠血清中NS1水平。利用建立的小鼠感染模型，评价抗体WNV-XH1的体内功能活性。结果:C57BL/J小鼠感染WNV假病毒后，体内可检测到荧光，且感染假病毒的小鼠与未感染的小鼠相比外周血血清中WNV非结构蛋白NS1水平明显升高(1.453±0.09vs0.305±0.018)。攻毒前静脉给予抗体WNV-XH1后，小鼠体内荧光信号减弱，血清中NS1水平下降(0.384±0.015)。结论:成功建立WNV假病毒体内感染模型，并证实抗体WNV-XH1在体内对WNV假病毒的感染具有保护作用。

目的 了解长春市 2020-2023 年蚊虫的密度、种类、消长规律及病毒携带情况,为蚊虫防控及蚊媒传染病的风险预警提供科学依据.方法 按照《全国病媒生物监测实施方案》、《长春市病媒生物监测方案》及《全国病媒生物病原学监测方案(试行)》的要求,每年 5-10 月在长春市朝阳区和绿园区使用诱蚊灯法开展监测.使用Excel 2016 和SPSS 21.0 软件分析不同年份、月份及生境中蚊密度监测结果,采用单因素方差分析进行各组间的差异比较.结果 2020-2023 年共设置诱蚊灯 920 盏,捕获成蚊14 554只,蚊虫总密度为15.81 只/(灯·夜),蚊虫密度呈现逐年下降趋势.牲畜棚捕获蚊虫占总捕获蚊虫的 72.7%,且主要以刺扰伊蚊为主,其他生境均以淡色库蚊为主.蚊种构成比和各蚊种密度在不同年份间的差异均有统计学意义(F=13.092,P＜0.05;F=14.118,P＜0.05).蚊虫密度季节消长趋势总体呈单峰型,7-8 月为密度高峰.乙脑病毒和西尼罗病毒检测结果均为阴性.结论 2020-2023 年长春市蚊密度总体呈下降趋势,未发现其携带乙脑病毒和西尼罗病毒,但应关注淡色库蚊的构成比及密度,加强防蚊灭蚊工作.

2024年4月,全球共监测到传染病76种,涉及236个国家和地区.除流行性感冒外,涉及国家和地区数量位于前5位的传染病分别为新型冠状病毒感染(236个)、猴痘(117个)、登革热(26个)、霍乱(23个)和麻疹(20个).病死率位于前5位的传染病分别为人感染H5N1禽流感(52.10％)、中东呼吸综合征(36.00％)、链球菌中毒性休克综合征(24.70％)、拉沙热(18.30％)和猴痘(5.90％).死亡病例数位于前5位的传染病分别为新型冠状病毒感染、麻疹、登革热、霍乱和猴痘.亚洲主要流行新型冠状病毒感染、霍乱、登革热、克里米亚-刚果出血热和链球菌中毒性休克综合征;非洲主要流行新型冠状病毒感染、霍乱、黄热病、拉沙热、猴痘、麻疹、脑膜炎和脊髓灰质炎;美洲主要流行新型冠状病毒感染、猴痘、登革热和基孔肯雅热;欧洲主要流行新型冠状病毒感染、猴痘和麻疹.

西尼罗病毒(WNV)主要通过蚊虫传播,是美国大陆虫媒病毒病的主要原因,其他虫媒病毒也会引起散发的神经侵袭性疾病病例.2021年亚利桑那州发生了严重的西尼罗病毒感染暴发疫情,3个县报告的西尼罗病毒感染病例占美国所有报告病例总数的50％以上.美国西尼罗病毒感染神经侵袭性疾病的发病率(0.61/10万)超过了 2010-2020年的中位发病率(0.3 9/10万),是2012年以来的最高水平.医护人员接诊无菌性脑膜炎或脑炎病例时应考虑病例是否为虫媒病毒感染,采集合适样本开展实验室检测,并及时向公共卫生当局报告病例.

目的 建立单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的双重微滴式数字PCR检测方法.方法 基于单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的保守区域,设计特异性引物探针,通过筛选引物探针组合,优化双重微滴式数字PCR反应退火温度及引物探针浓度比,建立双重单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测反应体系,对其他病毒进行检测,对临床样本进行验证,对建立的双重微滴式数字PCR方法的灵敏性、特异性及重复性进行分析.结果 单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测方法最佳引物和探针浓度分别为800 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度是56℃;双重微滴式数字PCR检测方法的标准曲线相关系数(R2)为0.99,呈现良好的线性关系;灵敏度高,单纯疱疹病毒Ⅰ型最低检测下限为2.97拷贝/μL,水痘-带状疱疹病毒最低检测下限为2.73拷贝/μL;重复性好,变异系数小,检测结果稳定;特异性强,未发现与单纯疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、巨细胞病毒、人巨细胞病毒、肠道病毒71型、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及人类核酸有交叉反应.结论 本试验建立的单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR方法灵敏性强、特异性高、重复性好,可为不同场景下2种病毒的快速定量检测提供解决方案.

2023年 11月,全球共监测到传染病69种,涉及236个国家和地区.除流感外,涉及国家和地区数量位于前5位的传染病分别为新型冠状病毒感染(236个)、猴痘(116个)、登革热(34个)、麻疹(25个)和霍乱(18个).病死率位于前5位的传染病分别为人感染H5N1禽流感(52.3％)、拉沙热(17.1％)、克里米亚-刚果出血热(9.3％)、西尼罗热(8.6％)和白喉(5.6％).死亡病例数位于前5位的传染病分别为新型冠状病毒感染、疟疾、登革热、麻疹和霍乱.亚洲主要流行新型冠状病毒感染、霍乱、猴痘、克里米亚-刚果出血热和登革热;非洲主要流行新型冠状病毒感染、霍乱、猴痘、拉沙热、白喉、疟疾、脊髓灰质炎和麻疹;美洲主要流行新型冠状病毒感染、霍乱、猴痘和登革热;欧洲主要流行西尼罗热和麻疹.