视黄醇是维生素A的主要活性形式之一,对于机体的生长发育、眼部和皮肤功能维持至关重要,被广泛应用于化妆品、医药和饲料添加领域.动物体内不具备完整的维生素A合成途径,但可通过膳食直接摄入或将膳食中获得的β-胡萝卜素转化获得.为了推进视黄醇的生物法合成研究,首先以β-胡萝卜素合成平台CAR?1 为基础,筛选了 3 种不同来源的醇脱氢酶,确定了大肠杆菌来源的ybbO具有最高的催化活性,转化率可达 95.6%.为了进一步提高反应速率和产量,采用蛋白质融合技术将视黄醇合成模块中 2 个相邻酶blh和ybbO进行融合后,在高产β-胡萝卜素工程菌株CAR?3 中进行评估,获得了最优组合blh-GGGS-ybbO,其产量较融合前提高了 44.9%,达到(111.1±3.5)mg·L-1.进一步工作中,通过引入人源的视黄醇结合蛋白(RBP4)以及转甲状腺素蛋白(TTR),在酿酒酵母中模拟了人体肝脏细胞分泌视黄醇的过程,视黄醇产量增加至(158.0±13.1)mg·L-1.最后,采用过表达INO2 扩张β-胡萝卜素合成途径反应区室,提高血红蛋白VHb表达量以增强氧气的供给,强化PDR3m表达促进视黄醇的转运和开发 2 个阶段发酵工艺等方法,在 5 L发酵罐中成功将视黄醇的产量提升至(2 320.0±26.0)mg·L-1,为视黄醇产业化发展提供了重要基础.

目的:探讨高温高湿环境下大鼠肠道菌群结构和功能表达,及其与血清脑肠肽指标间的相关性.方法:将16只成年SD雄性大鼠随机分成2组,常温常湿组和高温高湿组,每组8只.常温常湿组放置于温度(25±2)℃、湿度(50±5)%的恒温恒湿箱中,高温高湿组放置于温度(40±2)℃、湿度(70±5)%的恒温恒湿箱中,饲养7d,期间正常喂食饮水.实验收集两组SD大鼠粪便样品于1.5 mL离心管,并通过腹主动脉采集血液样本.采用16S rDNA和宏基因组测序法对2组大鼠粪便样品进行分析,明确高温高湿环境对菌群结构和功能的影响.采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清胆囊收缩素(CCK)水平;Spearman相关性分析菌群与脑肠肽间的相关性.结果:动物行为学观察表明高温高湿组大鼠躁动不安,随着时间延长出现大鼠前爪挠面部且精神差的情况,大鼠活动也逐渐减弱.16S rDNA和宏基因组测序结果显示,与常温常湿组相比,高温高湿环境能够显著降低肠道菌群的Alpha和Beta多样性,引起厚壁菌门/拟杆菌门的比值升高.物种差异分析获得核心差异菌群,其中上调菌群为棒状杆菌、另枝菌属,下调菌群为普雷沃氏菌、考拉杆菌、毛螺旋菌、瘤胃球菌;功能分析结果表明高温高湿主要影响精氨酸和脯氨酸代谢、卟啉代谢、视黄醇代谢等新陈代谢过程及生物合成,还涉及糖酵解/糖新生、ABC转运蛋白、核糖体等.ELISA测定结果显示高温高湿组SD大鼠血清CCK含量较常温常湿组显著降低,并与核心差异菌群呈现相关性.结论:高温高湿环境可引起大鼠肠道菌群结构和功能异常,进而通过核心差异菌群影响CCK水平变化,影响大鼠情绪的调控.功能富集分析表明,高温高湿环境下大鼠肠道差异菌与大鼠情绪变化具有相关性,提示与神经性疾病有重要的关系.该研究丰富了环境对肠道菌群影响的认识,同时对临床诊断和研究提供了支撑.

目的 比较肾功能稳定的肾移植供受者的尿蛋白质组变化,并分析差异蛋白生物学功能.方法 选择5对于2010-2014年在解放军总医院行肾移植术的肾功能稳定的肾移植受者及其相应供者的尿液样本,采用LC-MS/MS蛋白质组学技术进行蛋白质定量,并对筛选的差异蛋白进行生物信息学分析.结果 5对供受者间共存在12个共同的差异蛋白,其中8个蛋白在肾移植受者尿液中表达上调:二磷酸腺苷核糖基转移酶3、碳酸酐酶4、视黄醇结合蛋白4、基底细胞黏附分子、过氧化物酶6、乳酸脱氢酶B、丝氨酸蛋白酶抑制剂A1和丝氨酸蛋白酶抑制剂A3.肾移植受者尿液表达中下调蛋白4个:细胞液泡蛋白质分选因子4B、囊泡运输体1、Bro1包涵域蛋白及三肽氨基肽酶1.结论 移植肾功能正常的受者与健康供者的尿蛋白质组有差异,这些差异蛋白大多定位于细胞外环境,主要与物质转运、能量代谢及免疫反应等多种生物学过程有关.

视黄醇结合蛋白4(RBP4)是一种视黄醇转运体,其主要作用是将视黄醇从肝脏转移到外周.已有研究表明RBP4能引起胰岛素抵抗,且血液循环中RBP4的水平与肥胖、2型糖尿病、心血管疾病有关,非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)也与这些疾病密切相关.鉴于此,近年来出现了一些针对RBP4与NAFLD之间关系的研究,并探讨了可能的致病机制.该文主要从胰岛素抵抗和炎性反应等方面,就RBP4在NAFLD中作用机制的研究进展作一综述.

流行病学调查发现, 肾病综合征的发病率可达 (374～583)/10000人[1]. 临床上,肾病综合征的发生能够增加多器官功能衰竭的风险. β2-微球蛋白(β2-MG)是体内的小分子蛋白,其能够通过肾小球滤过膜滤过而排出体外,在肾病综合征患者体内,由于肾脏基膜组织的损伤,通透性增加,导致体内的β2-MG漏出明显增多,血清中的β2-MG表达浓度明显下降[2]. 视黄醇结合蛋白(RBP4)是维生素A的特异性转运蛋白,其能够通过诱导肾脏基膜组织的氧化应激性损伤,提高炎性因子对于肾脏组织的浸润程度,进而促进患者肾单位的损伤[3]. 部分研究者认为β2-MG、RBP4的异常表达能够显著促进患者肾功能的恶化[4],但对于二者与肾病综合征患者凝血功能的关系研究不足. 本次研究探讨了β2-MG、RBP4及凝血功能指标表达情况,报告如下.

目的:观察山茱萸对视黄醇转运的调控作用,阐明山茱萸对干眼症的治疗作用机制.方法:60只BALB/c小鼠随机分为空白对照组,模型组,阳性对照组,低、中和高剂量山茱萸组.采用苯扎氯铵滴眼法制备干眼症小鼠模型.阳性对照组小鼠经口灌服石斛夜光丸(20 mL·kg-1体质量),低、中和高剂量山茱萸组小鼠分别经口灌服600、1200和2400 g·L-1山茱萸水煎剂(20 mL·kg-1体质量),空白对照组小鼠不处理,模型组小鼠经口灌服等量生理盐水;各给药组大鼠均每日给药1次,连续4周.泪液测试试纸法检测各组小鼠泪液分泌量,荧光素染色法检测各组小鼠泪膜破裂时间,ELISA法检测各组小鼠血清中前蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RB P)和肝组织中视黄醇水平,免疫组织化学法和免疫印迹法检测各组小鼠泪腺组织中胞内视黄醇结合蛋白(CRBP)和RBP受体—维甲酸诱导蛋白6(STRA6)蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组小鼠泪液分泌量明显减少(P<0.01),泪膜破裂时间明显缩短(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和不同剂量山茱萸组小鼠泪液分泌量明显增加(P<0.05或P<0.01),泪膜破裂时间明显延长(P<0.01).与空白对照组比较,模型组小鼠血清中PA和RBP水平及肝组织中视黄醇水平明显降低(P<0.01),泪腺组织中CRBP和STRA6蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和不同剂量山茱萸组小鼠血清中PA和RBP水平及肝组织中视黄醇水平明显升高(P<0.01),泪腺组织中CRBP和STRA6蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组比较,高剂量山茱萸组小鼠血清中PA和RBP水平明显升高(P<0.05或P<0.01),泪腺组织中CRBP和STRA6蛋白表达水平进一步升高(P<0.01).结论:干眼症发生时,机体伴随视黄醇缺乏和视黄醇转运障碍,而酸味药山茱萸水煎液可以促进视黄醇吸收,改善机体视黄醇缺乏状态,进而调控视黄醇转运过程.

目的 探讨山茱萸对视黄醇转运的调控作用,阐述其治疗干眼症的作用机制,丰富“酸补肝明目”的分子基础.方法 60只BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,分别为对照组、模型组、阳性对照(石斛夜光丸2.9 g/kg)组及山茱萸低、中、高剂量(12、24、48 g/kg)组.采用苯扎氯铵滴眼法诱导干眼症模型小鼠,ig给予不同剂量的山茱萸水煎液,通过检测各组小鼠泪液分泌量、泪膜破裂时间,评价山茱萸水煎剂对干眼症模型小鼠的干预作用.ELISA法检测血清前蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)水平、肝脏中视黄醇水平;免疫组织化学法(IHC)及Western blotting法检测泪腺组织中胞内视黄醇结合蛋白(CRBP)及RBP受体(STRA6)的表达水平.结果 与对照组比较,模型组小鼠泪液分泌量显著减少,泪膜破裂时间显著缩短(P＜0.01),泪腺组织中CRBP及STRA6蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与模型组比较,各给药组小鼠血清PA、RBP及肝脏组织中视黄醇水平显著升高(P＜0.01),泪腺组织中CRBP及STRA6蛋白表达水平显著升高(P＜0.05、0.01).结论 干眼症发生时,机体伴随视黄醇缺乏和转运障碍,而酸味药山茱萸水煎液可以促进视黄醇吸收,改善机体视黄醇缺乏状态,进而调控其转运过程,这可能是“酸入肝,明目”的分子机制之一.

目的 探究纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及视黄醇结合蛋白4(RBP4)在妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘组织中的表达及临床意义.方法 选取2017年1月-2018年8月在该院接受治疗的GDM患者50例为GDM组,另外选取在院进行健康体检的健康妊娠期产妇50例作为正常对照组;取两组患者分娩完成后的1 cm×1 cm×1 cm胎盘组织块制作标本;酶联免疫吸附法检测PAI-1、GLUT1水平;双抗体夹心法检测RBP4表达水平.结果 GDM组的胎盘组织PAI-1、RBP4表达水平显著高于正常对照组,胎盘组织GLUT1表达水平显著低于正常对照组(P＜0.05).GDM患者PAI-1、GLUT1及RBP4表达水平与年龄、孕次/产次、BMI、口服葡萄糖耐量试验时间(OGTT)以及分娩时间无关,与患者各时段血糖值、空腹血糖值以及新生儿体质量有关.PAI-1、RBP4在GDM患者胎盘组织中的表达呈正相关,与GLUT1表达呈负相关.胎盘组织中PAI-1、GLUT1及RBP4三项联合检测敏感度、特异度、准确度显著高于单项检测(P＜0.05).结论 胎盘组织PAI-1、GLUT1以及RBP4水平在GDM中呈现异常表达,且具有一定相关性,为GDM临床诊断提供依据.

目的:探讨孕晚期妇女静脉血与新生儿脐带血血浆维生素A(vitamin A,VitA)水平的相关性.方法:2009年5月至6月在河北省元氏县和乐亭县募集孕妇688例,采集产前静脉血和新生儿脐带血,采用高效液相色谱法检测血浆视黄醇浓度,用以反映VitA水平.根据产前静脉血血浆视黄醇浓度,孕妇VitA营养状态分为缺乏(＜0.70μmol/L)、边缘性缺乏(0.70～＜1.05 μmol/L)、充足(≥1.05 μmol/L).根据脐带血血浆视黄醇浓度,新生儿VitA营养状态分为缺乏(＜0.35 μmol/L)、边缘性缺乏(0.35～＜0.70 μmol/L)、充足(≥0.70 μmol/L);将脐带血血浆视黄醇浓度低于第10百分位数定义为新生儿VitA相对缺乏.新生儿与孕妇血浆视黄醇浓度比值定义为VitA胎盘转运系数.采用多元分式多项式(multivariable fractional polynomials,MFP)模型和Pearson相关探讨孕妇与新生儿血浆VitA水平的关系,采用Logistic回归模型探讨孕妇VitA营养状态对新生儿VitA缺乏的影响,采用MFP模型和Spearman相关探讨孕妇VitA水平与胎盘转运系数的关系.结果:孕晚期妇女视黄醇平均浓度为(1.15±0.30)μmol/L,VitA缺乏率和边缘性缺乏率分别为4.5％和37.8％;新生儿视黄醇平均浓度为(0.78±0.13)μmol/L,无VitA缺乏,边缘性缺乏率为28.2％.调整孕妇年龄、体重指数等因素后,孕妇与新生儿VitA水平间呈线性正向剂量-反应关系(幂参数=1,P ＜0.05),Pearson相关系数为0.13(P ＜0.01).与VitA充足组孕妇相比,缺乏组(crude OR=2.20,95％ CI:1.04～ 4.66)和边缘性缺乏组(crude OR=1.43,95％CI:1.01 ～ 2.02)分娩VitA边缘性缺乏新生儿的风险显著升高,但多因素调整后,上述效应不再有统计学意义;VitA缺乏组孕妇分娩VitA相对缺乏新生儿的风险在调整多因素前后均显著增加(crude OR=3.02,95％ CI:1.21～ 7.50;adjusted OR=2.76,95％CI:1.05～7.22).孕妇VitA水平与VitA胎盘转运系数间呈非线性负向剂量-反应关系(幂参数=-0.5,P＜0.05),调整后Spearman相关系数为-0.82(P ＜0.001).结论:孕晚期妇女与新生儿血浆VitA水平呈正向线性剂量-反应关系,提示孕妇VitA营养状态影响新生儿VitA储存水平.

目的 探讨胎盘组织中的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)表达与妊娠糖尿病(GDM)的关系.方法 采用前瞻性研究方法,选取2015年1月至2019年11月安徽理工大学第一附属医院淮南市第一人民医院产科就诊的GDM患者100例(GDM组)、正常妊娠分娩的产妇100例(对照组),采用Western blotting法检测两组胎盘组织中的GLUT4、RBP4表达情况,并采用Pearson相关法分析GLUT4、RBP4表达强度与GDM妇女胰岛素抵抗程度的相关性.结果 GDM组的空腹血糖(FPG)(5.82±0.55)mmol/L、餐后2h血糖(2hPG)(8.84±1.24)mmol/L、空腹胰岛素(Fins)(16.83±2.67)mIU/L、胰岛抵抗指数(HOMA-IR)(3.97±1.26)水平均高于对照组[FPG(4.81±0.48)mmol/L、2hPG(6.38±1.10)mmol/L、Fins(11.48±1.81)mIU/L、HOMA-IR(2.04±0.85)],差异具有统计学意义(P<0.05);GDM组的GLUT4蛋白表达强度(1.228±0.297)、RBP4蛋白表达强度(1.417±0.306)高于对照组(0.771±0.203)、(0.904±0.168),差异具有统计学意义(P<0.05);GDM组胎盘组织中GLUT4、RBP4蛋白表达强度与HO-MA-IR、FPG均呈显著的正相关关系(r值分别为0.663、0.592、0.624、0.606,P<0.05).结论 GDM患者胎盘组织中的GLUT4蛋白、RBP4蛋白表达强度增高,并且与胰岛素抵抗具有一定的相关性.