目的:探讨花旗松素（taxifolin，TAX）改善顺铂（cisplatin）致急性肾损伤的作用及机制。方法:（1）40只C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组、TAX组、顺铂组、顺铂+TAX组。测量各组小鼠体重情况。检测各组小鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平；通过HE染色观察小鼠肾组织病理学改变；通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定血清炎性因子白细胞介素（IL）-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平；通过试剂盒测定各组小鼠肾组织氧化应激指标[活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、还原型谷胱甘肽（GSH）]；实时荧光定量PCR法测定炎性因子 IL- 6、 TNF- α和 IL- 1β，抗氧化基因解耦联蛋白2（ UCP2）、 SOD2、 CAT以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（ PGC- 1α）mRNA表达情况；通过测定肾组织ATP水平和线粒体DNA（mtDNA）含量评价线粒体功能；通过Western印迹法测定腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和磷酸化（p）-AMPK蛋白表达情况。（2）通过建立Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型评价TAX对顺铂化疗效果的影响。 结果:与对照组比较，TAX组小鼠体重未明显降低，且未出现明显肾损伤（均 P>0.05），提示口服TAX具有良好的安全性。与顺铂组比较，TAX能够显著延缓顺铂引起的小鼠体重下降，降低小鼠血清Scr和BUN水平，并缓解肾组织病理学改变（均 P<0.05）。TAX能够显著下调顺铂诱导的小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α水平，以及肾脏炎性因子 IL- 6、 TNF- α、 IL- 1β mRNA表达（均 P<0.05）。TAX能够显著降低顺铂致急性肾损伤小鼠肾组织ROS和MDA水平，并提高SOD、CAT和GSH活性（均 P<0.01）。同时，TAX能够显著上调顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏抗氧化基因 UCP2、 SOD2、 CAT mRNA以及 PGC- 1α mRNA表达，并提高肾组织ATP和mtDNA水平（均 P<0.01）。Western印迹结果显示，TAX显著促进顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏AMPK磷酸化蛋白表达（ P<0.01）。此外，通过Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型证实，TAX对顺铂抗肿瘤疗效无显著影响。 结论:TAX能够改善顺铂引起的肾脏氧化损伤，其机制可能与激活AMPK/PGC-1α通路有关。

目的:评估肾周脂肪解耦连蛋白1（UCP1）表达对肾透明细胞癌（ccRCC）患者预后的影响。方法:选取2013年2月至10月及2015年3月至10月收治的行后腹腔镜根治性肾切除术的ccRCC患者共98例，通过术前CT图像评估肾周脂肪厚度及黏连度。术后RT-qPCR检测肿瘤周围肾周脂肪UCP1，依据肾周脂肪UCP1 mRNA值，将患者分成高UCP1表达组（42例）与低UCP1组表达组（56例）。比较两组患者的一般临床资料、肾周脂肪厚度及黏连度，进一步采用Kaplan-Meier曲线评估两组间无进展生存期（PFS）的差异。采用单变量和多变量Cox回归分析确定PFS的潜在独立预后因素。结果:高UCP1表达组的肾周脂肪厚度、肾周脂肪黏连比例、Fuhrman分级中Ⅲ~Ⅳ级比例和T分期中>T2期比例高于低UCP1表达组[（13.84±2.41）vs（10.75±1.99），42.86% vs 16.07%，28.57% vs 8.93%，21.43% vs 5.36%； P值分别为0.000，0.003，0.011，0.037]。随访期间（中位时间62.0个月），15例患者（12例高UCP1表达组，3例低UCP1表达组）发生肿瘤进展。Kaplan-Meier曲线显示，高UCP1表达组较低UCP1表达组PFS更差（71.43% vs 94.64%， P=0.001）。Cox回归分析显示，高UCP1表达和高T分期与低PFS显著相关（ β=1.334， RR=3.796，95% CI=1.009~14.280， P=0.048； β=2.886， RR=17.930，95% CI=5.538~58.047， P=0.000）。 结论:肾周脂肪UCP1表达增加可能为ccRCC患者肿瘤进展的独立危险因素。术后联合肾周脂肪棕色化评估可能有助于临床更好的判断ccRCC患者的预后。

目的:探索ω3-长链多不饱和脂肪酸(ω3-PUFA)膳食干预对早期过度营养大鼠成年期白色脂肪组织线粒体功能的影响和机制。方法:应用小窝鼠模型，形成营养过度组(SL组，3只/窝)或正常营养组(NL组，10只/窝)，断奶后给予正常饮食或ω3-PUFA饮食(SL-FO组)，喂养至13周。定期测量大鼠摄食量、体重和直肠温度，13周进行动物能量代谢监测；分别于3周、13周处死，收集皮下脂肪组织。分离小鼠腹股沟皮下前脂肪细胞诱导分化，并在分化晚期给予50 μmol/L二十碳五烯酸(EPA)干预48 h。检测脂肪组织和脂肪细胞线粒体相关基因的mRNA和蛋白表达水平，以及线粒体拷贝数和细胞耗氧率。结果:3周时，SL组大鼠体重、摄食量、脂肪细胞面积均大于NL组，体温低于NL组并持续到13周；13周时，SL组大鼠耗氧量、CO 2产出量、产热量均低于NL组；同时3周和13周脂肪组织的线粒体功能相关基因解耦联蛋白1(UCP1)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、沉默信息调节蛋白1(SIRT1)及线粒体生物合成调控基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)表达均显著降低( P<0.05)。断乳后ω3-PUFA膳食能减低SL大鼠体重增加，提高白色脂肪UCP1蛋白表达，恢复能量代谢水平和线粒体功能相关基因表达。体外EPA干预，脂肪细胞线粒体拷贝数增加，线粒体生物合成和功能相关基因mRNA和蛋白表达水平提高，线粒体基础耗氧率和质子漏增加( P<0.05)。 结论:ω3-PUFA能改善因早期过度营养而降低的大鼠皮下白色脂肪线粒体功能和生物合成，可能是鱼油膳食阻止早期过度营养程序化，恢复产热代谢的重要机制。

目的:探讨解耦联蛋白2（UCP2）过表达是否通过抑制活性氧（ROS）产生、降低炎症反应，发挥脓毒症心肌保护作用。方法:将40只SD大鼠按随机数字表法分为假转染假手术组（Sham组）、假转染盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症组（CLP组）、单纯腺相关病毒（AAV）转染手术组（AAV组）和UCP2过表达手术组（UCP2组）4组，每组10只。UCP2组心肌注射UCP2腺相关病毒（AAV-UCP2；滴度1×10 12 v.g/mL，每个点10 μL，共60 μL），3周后进行CLP；AAV组心肌转染AAV病毒，3周后进行CLP。制模后24 h评价模型是否制备成功并取材，荧光显微镜下观察心肌组织冰冻切片AAV病毒转染效果，蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测心肌组织UCP2蛋白表达，二氢乙啶（DHE）染色检测心肌细胞ROS产生情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清心肌标志物和炎性细胞因子水平。 结果:CLP术后24 h大鼠表现为立毛、眼鼻口分泌物增多，甚至出现脓尿、稀便及呼吸困难等症状；开腹后发现盲肠呈紫黑色，周围肠腔有脓性渗出；冰冻切片后荧光显微镜下可见病毒转染成功（转染部位呈绿色荧光）。进一步Western blotting检测显示，CLP组UCP2表达较Sham组增加（UCP2/β-tubulin：1.53±0.06比1， P<0.01）；与AAV组相比，UCP2组UCP2表达进一步增高（UCP2/β-tubulin：1.96±0.22比1.59±0.07， P<0.01）。荧光显微镜下观察CLP组和AAV组ROS产生较Sham组明显增加；当UCP2过表达后，ROS产生较CLP组和AAV组明显减少（ A值：1.03±0.10比1.81±0.13、1.67±0.08，均 P<0.01）。ELISA结果显示，与Sham组相比，CLP组和AAV组乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素- 6（IL-6）水平明显增加；当UCP2过表达后，以上心肌酶和炎性细胞因子分泌较CLP组和AAV组明显减少〔LDH（ng/L）：48.97±1.04比56.85±1.36、57.08±1.54，CK（ng/L）：235.23±20.33比306.34±25.93、304.76±25.29，cTnI（ng/L）：199.79±18.27比241.88±14.32、243.33±23.79，TNF-α（ng/L）：385.71±20.09比488.92±26.92、489.03±33.37，IL-6（ng/L）：121.12±7.61比159.07±17.65、157.61±15.13，均 P<0.01〕。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，CLP术后36 h大鼠存活率仅为30.0%；当UCP2过表达后，大鼠存活率较CLP组和AAV组明显提高（60.0%比30.0%、30.0%，均 P<0.05）。AAV组各指标与CLP组比较差异均无统计学意义。 结论:UCP2过表达可减少脓毒症心肌细胞产生ROS、抑制炎症反应，从而减轻心肌损伤，提高脓毒症大鼠存活率。

目的:H型血管是一种骨特异性微血管亚型(CD31hiEmcnhi),在成血管-成骨耦联机制中具有重要的调节作用.研究报道H和L型血管在骨骼生理和病理条件下发挥不同的作用,它们之间的遗传差异仍有待阐明.本研究旨在通过整合的生物信息学方法构建H和L型血管内皮细胞中关键差异表达(differential expression,DE)基因的竞争性内源 RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)网络.方法:从 ArrayExpress 和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载相关原始数据,通过Limma R-Bioconductor包筛选H和L型血管间的DElncRNAs、DE miRNAs和DEmRNAs,构建总ceRNA网络,随后根据蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络筛选出上调和下调的关键基因,以此精细化ceRNA网络并对关键基因进行富集分析.最后,通过流式细胞术和real time RT-PCR进行随机验证.结果:共鉴定出1761个DEmRNAs、187个DE lncRNAs和159个DE miRNAs,通过相互作用关系构建总ceRNA网络;通过PPI网络筛选出6个上调(Itga5、Kdr、Tjp1、Pecam1、Cdh5、Ptk2)和2个下调(Csf1r、Il10)的关键基因,并以此构建关键基因相关的ceRNA亚网络.上调的关键基因主要富集在血管生成与血管凋亡的负调控;流式细胞术和real-time RT-PCR的结果与生物信息学分析结果一致.结论:本研究根据所筛选的关键基因提出上调和下调的H型和L型血管内皮细胞相关的ceRNA网络,为H型和L型血管内皮细胞在骨代谢中的调控机制提供了新见解.

目的 探讨丙泊酚对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠解耦联蛋白(UCP)2 信号及小胶质细胞极化的影响.方法 60 只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,丙泊酚低、中、高(5、15、25 mg/kg)剂量组,每组 12 只.采用Longa线栓法缺血 2 h,再灌注24 h建立大鼠I/R模型,脑缺血期间腹腔注射丙泊酚治疗,再灌注24 h后评估大鼠神经功能.处死大鼠,取脑组织,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测大鼠脑脊液中炎性细胞因子含量;免疫组化染色分析大鼠小胶质细胞活化;实时荧光定量PCR检测M1/M2 型小胶质细胞标志物mRNA含量;Western印迹测定UCP2、p-核转录因子(NF)-κB、NOD样受体热蛋白结构域样蛋白(NLRP)3 含量.结果 与假手术组相比,模型组神经功能评分、脑梗死体积、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量、离子钙结合接头分子(iba)1 表达、促炎性M1 表型小胶质细胞标志物mRNA、p-NF-κB、NLRP3 含量均明显增加(P<0.05),但UCP2 表达明显减少(P<0.05).与模型组相比,丙泊酚低、中、高剂量组神经功能评分、脑梗死体积、IL-1β、IL-6、TNF-α含量,iba1 表达、促炎性M1 表型小胶质细胞标志物mRNA、p-NF-κB、NLRP3 含量呈剂量依赖性减少(P<0.05),IL-10 含量、抗炎性M2 表型小胶质细胞标志物mRNA与UCP2含量呈剂量依赖性增加(P<0.05).结论 丙泊酚可通过调节UCP2 表达,抑制小胶质细胞M1 表型极化,促进M2 表型极化,减少炎性细胞因子的释放与脑梗死体积,改善神经功能损伤.

为探讨超氧化物歧化酶(superoxide dismutasc,SOD)基因在玉米抗逆反应中的作用,研究选用2个抗旱性有明显差别的玉米品种为试验材料,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及二维凝胶电泳(2-DE)耦联的基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI-TOF)法,对ZmSOD基因的序列结构及其在干旱胁迫下的表达特性进行分析.结果表明:(1)从干旱敏感品种'登海605'(DH605)和抗旱品种'蠡玉35'(LY35)玉米叶片中分别成功克隆出ZmSOD1和ZmSOD2基因.DH605中ZmSOD1开放阅读框(ORF)全长456 bp,编码151个氨基酸,编码的蛋白等电点为5.76,分子量为15.05 kD.LY35中ZmSOD2ORF全长459 bp,编码152个氨基酸,编码的蛋白等电点为5.65,分子量为15.11 kD;ZmSOD1和ZmSOD2是亲水性稳定蛋白,都含有Cu/Zn-SOD结构域,蛋白序列N端无信号肽及无跨膜结构域.同源性和系统进化分析表明,玉米ZmSOD和谷子Cu/Zn-SOD2的亲缘关系最近,相似性高达96.05％.(2)在干旱条件下,ZmSOD1在DH605中转录水平明显降低,LY35中ZmSOD2转录水平显著升高;2-DE耦联的质谱分析显示:ZmSOD1在DH605中表达量明显降低,LY35中ZmSOD2表达量无显著性变化,却检测到Mn-SOD蛋白表达量显著增加.(3)相关分析显示,干旱条件下,DH605叶片中ZmSOD1转录水平和其蛋白丰度及SOD酶活性呈极显著性正相关,LY35叶片中ZmSOD2转录水平与SOD酶活性呈显著性正相关.研究结果为进一步探索SOD基因在调节玉米抗性以及逆境胁迫应答过程中的作用机制提供了基础.

目的 探讨阿托伐他汀联合银杏叶提取物治疗颅内动脉狡窄患者轻度认知功能障碍的疗效.方法 将90例颅内动脉狭窄伴有轻度认知功能障碍患者分为研究组和对照组,每组45例.对照组采用银杏叶提取物治疗.研究组采用阿托伐他汀联合银杏叶提取物治疗.治疗前后采用简易智力状况检查法(mini-mental state examination,MMSE)及蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)评估患者认知功能变化,检测患者治疗前后血脂及解耦联蛋白2(UCP2)、神经营养因子(BDNF)、激酶A(PKA)、同型半胱氨酸(Hcy)的水平.结果 2组治疗后的三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均较治疗前明显降低(P均＜0.05);治疗后,研究组的TG、TC、LDL-C水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05);2组治疗后的UCP2、BDNF、PKA水平均明显升高,Hcy水平明显降低(P均＜0.05),且研究组的UCP2、BDNF、PKA水平明显高于对照组,Hcy水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.05);2组治疗后的MMSE评分、MoCA评分、ADL评分均较治疗前明显升高(P均＜0.05),且研究组的MMSE评分、MoCA评分、ADL评分明显高于对照组(P均＜0.05).结论 阿托伐他汀联合银杏叶提取物能显著改善颅内动脉狭窄伴有轻度认知功能障碍患者的认知功能.

丁酸可以预防高脂日粮诱导的小鼠肥胖和胰岛素抵抗,但是否有治疗作用尚不清楚.本研究证明,高脂日粮诱导小鼠肥胖模型后,用80 mg/mL丁酸钠水溶液灌胃能够缓解肥胖.表观指标检测发现,丁酸钠显著降低肥胖小鼠的肝重(1.24 g±0.03 g至1.08 g±0.04 g)、体重(32.46 g±0.50 g至28.35 g±0.58 g)和附睾脂重(1.33 g土0.13g至0.81 g±0.08 g)及其与体重的比(4.06％±0.37％至2.83％±0.22％).葡萄糖耐受实验和血液激素含量检测表明,丁酸钠部分缓解由高脂引起的葡萄糖不耐受,并显著降低血液中瘦素(3.71 ng/mL±0.62 ng/mL至1.50ng/mL±0.26 ng/mL)和胰岛素(2.39 ng/mL±0.30 ng/mL至1.25 ng/mL±0.09 ng/mL)的水平.肝中脂质和糖原的生化检测表明,丁酸钠对肝中的甘油三酯、胆固醇和糖原的含量没有显著影响.通过RT-PCR实验发现,丁酸钠显著上调线粒体β氧化和解耦联相关的关键基因以及线粒体自身编码的8个基因的mRNA水平的表达,Western印迹检测表明,丁酸钠显著升高肝葡萄糖转运蛋白GLUT2和调控线粒体功能的关键蛋白PGC-1α的表达.上述结果提示,丁酸钠可能通过增强肝线粒体功能缓解食源性小鼠肥胖.

目的 对解耦联蛋白2 (UCP2)转基因(UCP2+/+)和UCP2敲除(UCP2-/-)小鼠进行鉴定及表型初步分析.方法 采用PCR法鉴定UCP2+/+和野生型(C57BL/6J)小鼠UCP2基因的表达.采用Western blot法检测UCP2+/+、UCP2-/-和C57BL/6J小鼠肝脏UCP2蛋白的表达.绘制0～12周龄UCP2+/+、UCP2-/-和C57BL/6J小鼠生长曲线,并肉眼观察UCP2+/+和UCP2-/-小鼠在外观和行为上有无异常.分别采用高脂饮食和普通饮食饲喂UCP2+/+、UCP2-/-和C57BL/6J小鼠12周,检测其空腹血糖和胰岛素水平.结果 UCP2+/+小鼠UCP2基因片段为280 bp,且肝脏表达相对分子量约为32 kD的UCP2蛋白.与C57BL/6J小鼠相比,UCP2+/+小鼠肝脏UCP2表达量升高(P＜0.05),而UCP2-小鼠肝脏未见UCP2蛋白表达.UCP2+/+和UCP2-/-小鼠与C57BL/6J小鼠相比,在外观和行为上未见异常.与C57BL/6J小鼠相比,饲喂普通饲料对UCP2+/+和UCP2-/-小鼠空腹血糖和胰岛素水平影响差异无统计学意义(P＞0.05).与饲喂普通饲料相比,高脂饲料能升高C57BL/6J和UCP2+/+小鼠空腹血糖水平(P＜0.05),提高UCP2-/-小鼠胰岛素的分泌(P＜0.05).结论 成功鉴定了小鼠UCP2+/+和UCP2-/-基因型;高脂饮食下,UCP2与小鼠血糖水平和胰岛素分泌相关.