脓毒症导致循环中腺苷增加。细胞外腺苷通过A2a受体触发免疫抑制信号。脓毒症幸存者出现持续的免疫抑制，感染复发的风险随之升高。作者利用盲肠结扎穿刺模型模拟脓毒症和继发感染的状态，以此评估腺苷在脓毒症后的免疫抑制作用。A2a受体缺陷的小鼠对脓毒症后感染的抵抗力增强。脓毒症时高表达CD39的B细胞亚群增加，细胞外腺苷水平升高，而在缺乏CD39表达的B细胞的小鼠中并不存在细胞外腺苷。在脓毒症中存活的B细胞缺陷的小鼠对继发感染更有抵抗力。从机制上看，脓毒症时B细胞的代谢重整导致ATP产生增加，并通过CD39在成浆细胞中转化为腺苷，腺苷通过A2a受体信号通路损伤巨噬细胞的杀菌活性，并增加IL-10的生成。脓毒症患者表现为CD39高表达的成浆细胞群体增加和腺苷堆积。该研究表明，高表达CD39的成浆细胞和腺苷是脓毒症诱导的免疫抑制的重要驱动因素，与人类的疾病密切相关。

目的:探讨基于二氢卟吩e6（chlorin e6，Ce6）的光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）联合抗生素替硝唑（tinidazole，TNZ）对牙周炎大鼠的体内外抑制作用。方法:采用正畸钢丝结扎法对18只SD大鼠建立牙周炎模型，建模成功后按随机数字表法随机分为以下6组（每组3只）：阳性对照组、Ce6 组、TNZ 组、混合物Ce6/TNZ 组、Ce6加光照（Ce6+L）组、Ce6/TNZ加光照（Ce6/TNZ+L）组；采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）实验考察Ce6（质量浓度为0~20 mg/L）、TNZ（质量浓度为0~16.6 mg/L）及其混合物Ce6/TNZ对成纤维细胞L929的毒性；采用荧光探针法检测Ce6、TNZ和Ce6/TNZ及结合635 nm激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min）对牙周炎大鼠牙菌斑生物膜中活性氧生成的触发效应，评价Ce6的光动力性能；采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验和活菌/死菌染色法考察各种治疗的体外抗菌性能，并计算Ce6介导的PDT联合TNZ的合用指数（combination index，CI）。采用凋亡试剂盒流式检测各种治疗对鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的诱导效应。各组大鼠局部给药后行激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min），治疗结束后用显微CT评价PDT联合TNZ对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的抑制效应。 结果:Ce6、TNZ、Ce6/TNZ在预设浓度范围内L929细胞存活率均在90%以上。激光照射后，Ce6与Ce6/TNZ的牙菌斑生物膜中呈现出非常显著的绿色荧光，触发了菌斑内活性氧大量生成；但在不同浓度下，Ce6/TNZ的牙菌斑存活率分别为（85.4±5.5）%、（76.0±8.9）%、（61.7±0.6）%、（56.3±2.6）%、（43.5±0.6）%，均显著低于Ce6和TNZ组（ P<0.01），且各药物浓度点对应的CI<1.0，具有显著的协同效应。Ce6+L与Ce6/TNZ+L具有显著强于Ce6与Ce6/TNZ的细胞凋亡诱导活性（ P<0.01）。牙周炎大鼠体内，Ce6/TNZ联合激光照射能有效抑制牙槽骨的吸收，牙槽骨体积、骨体积分数分别为（1.49±0.07）mm 3和（47.08±0.71）%，颊、腭侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶距离分别减小至（2.13±0.07）和（1.94±0.10）mm。 结论:基于Ce6的PDT联合抗生素TNZ对牙周炎大鼠有协同治疗作用，能有效杀伤牙菌斑，诱导巨噬细胞凋亡，抑制牙槽骨吸收。

目的:开发一种新型递送策略，利用金属有机框架（MOF）负载针对整合素αv（ITGAV）的小干扰RNA siITGAV，以克服基质屏障，进而增强乳腺癌内药物递送及免疫可及性。方法:构建MOF@siITGAV颗粒，对其进行材料表征。通过细胞摄取实验观察乳腺癌4T1细胞对MOF@siITGAV的摄取情况，细胞计数试剂盒8法检测MOF@siITGAV的细胞毒性。设空白对照组、游离siITGAV组和MOF@siITGAV组，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组4T1细胞中ITGAV mRNA的表达，采用Western blot检测ITGAV蛋白的表达，采用酶联免疫吸附试验检测TGF-β1的含量。采用3D球体穿透实验观察MOF@siITGAV穿透4T1细胞球的能力。建立三阴性乳腺癌小鼠模型，观察MOF@siITGAV对移植瘤生长及小鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏器的影响，采用免疫组化染色检测肿瘤组织中Ⅰ型胶原蛋白和CD8的表达。结果:成功构建MOF@siITGAV颗粒，粒径为（198.0±3.3）nm，电位为-（20.2±0.4）mV。4T1细胞能有效摄取MOF@siITGAV，并触发siRNA的有效释放，MOF@siITGAV组细胞中ITGAV mRNA和蛋白表达水平、TGF-β1的表达水平均显著下调［相对于空白对照组，游离siITGAV组和MOF@siITGAV组4T1细胞中ITGAV mRNA相对表达水平分别为（109.9±19.0）%和（46.5±11.3）%；空白对照组、MOF@siNC组和MOF@siITGAV组TGF-β1浓度分别为（474.5±34.4）pg/ml、（437.2±16.5）pg/ml和（388.4±14.4）pg/ml］。MOF@siITGAV在4T1细胞球中的穿透能力更强，对4T1细胞无明显杀伤效应，0、10、20、40、80和160 μg/ml MOF@siITGAV分别处理4T1细胞24 h，细胞活性分别为（99.7±3.5）%、（98.2±5.2）%、（97.3±6.6）%、（92.1±8.1）%和（92.4±4.1）%。MOF@siITGAV能有效抑制小鼠乳腺癌移植瘤的生长，给药15 d后，空白对照组、MOF@siNC组和MOF@siITGAV组小鼠的肿瘤体积分别为（691.1±193.0）mm 3、（652.7±306.5）mm 3和（135.3±41.9）mm 3，MOF@siITGAV组小鼠的肿瘤体积小于空白对照组（ P=0.025）。与空白对照组和MOF@siNC组相比，MOF@siITGAV组小鼠肿瘤组织中Ⅰ型胶原蛋白的含量明显减少，CD8阳性细胞明显增多，心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见明显异常。 结论:ITGAV可以破坏乳腺癌的ECM，改善药物瘤内递送，促进免疫细胞浸润。

目的:观察肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎（SBP）患者外周血和腹水中CD100水平，并在体外检测CD100对腹水中CD4 +和CD8 +T淋巴细胞活性的影响。 方法:入组肝硬化患者77例（肝硬化合并单纯腹水患者49例、肝硬化合并SBP患者28例），采集外周血和腹水，入组22例对照者采集外周血。酶联免疫吸附试验检测外周血和腹水中可溶型CD100（sCD100），流式细胞术检测CD4 +和CD8 +T淋巴细胞表面膜结合型CD100（mCD100）。分选腹水中CD4 +和CD8 +T淋巴细胞，CD100刺激后检测CD4 +T淋巴细胞增殖、关键转录因子mRNA和分泌细胞因子变化，检测CD8 +T淋巴细胞增殖、重要毒性分子mRNA和分泌细胞因子变化，利用直接接触和间接接触培养系统检测CD8 +T细胞的杀伤活性。符合正态分布的数据使用单因素方差分析、Student t检验或配对 t检验进行比较。不符合正态分布的数据使用Krusal-Willis检验或Mann-Whitney检验进行比较。 结果:血浆sCD100水平在肝硬化合并单纯腹水患者（1 415.0±434.1）pg/ml、肝硬化合并SBP患者（1 465.0±386.8）pg/ml和对照者（1 355.0±428.0）pg/ml之间的差异无统计学意义（ P = 0.655）。肝硬化合并SBP患者腹水sCD100水平低于合并单纯腹水患者[（2 409.0±743.0）pg/ml比（2 825.0±664.2）pg/ml， P = 0.014]。外周血CD4 +和CD8 +T淋巴细胞中mCD100水平在3组间的差异无统计学意义（ P > 0.05）。肝硬化合并SBP患者腹水CD4 +和CD8 +T淋巴细胞中mCD100水平高于合并单纯腹水患者（ P < 0.05）。CD100刺激对肝硬化合并SBP患者腹水中CD4 +和CD8 +T淋巴细胞的增殖无明显影响（ P > 0.05），对效应性CD4 +T淋巴细胞中转录因子（T-bet、维甲酸相关孤独核受体γt、芳香烃受体）表达和细胞因子（干扰素-γ、白细胞介素-17、白细胞介素-22）分泌均无显著影响（ P > 0.05）。CD100刺激可增加肝硬化合并SBP患者腹水CD8 +T淋巴细胞穿孔素、颗粒酶B、颗粒溶素mRNA相对表达量及其分泌干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α的水平（ P < 0.05），亦可增加CD8 +T淋巴细胞的杀伤活性。 结论:CD100的活性形式是sCD100而非mCD100，肝硬化合并SBP患者腹水中存在sCD100和mCD100表达失衡，sCD100可增强肝硬化合并SBP患者腹水CD8 +T淋巴细胞的功能，是潜在治疗靶点之一。

目的:观察脓毒症患者外周血Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）表达谱变化，分析活化TLR7对脓毒症患者CD8+T细胞杀伤活性的影响。方法:采用横断面研究方法，纳入2020年6月至2021年6月在新乡医学院第一附属医院就诊的脓毒症患者和对照者，于就诊本院后1 h内采血，分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs），逆转录实时定量PCR法检测PBMCs中TLR1~10 mRNA，流式细胞术检测CD8 +T细胞中TLR7和TLR9，分析TLR对预后的诊断价值。分选CD8 +T细胞，使用TLR7激动剂CL097刺激CD8 +T细胞，CD8 +T细胞与人脐静脉内皮细胞直接接触或间接接触共培养，检测免疫检查点受体表达、靶细胞死亡比例、毒性分子和细胞因子分泌。组间比较采用 t检验或Mann-Whitney检验，刺激前后比较采用配对 t检验或配对Wilcoxon秩和检验。 结果:纳入58例脓毒症患者和24例对照者。PBMCs中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8和TLR10 mRNA在脓毒症患者和对照者之间的差异无统计学意义（均 P>0.05）。脓毒症患者PBMCs中TLR9 mRNA低于对照者[0.94(0.81, 1.15) vs. 1.14(0.82, 2.12)， P=0.046]，但CD8 +T细胞中TLR9平均荧光强度与对照者差异无统计学意义[(23.83±7.44) vs. (24.95±7.97)， P=0.548]。脓毒症患者PBMCs中TLR7 mRNA[1.01 (0.88, 1.15) vs. 1.61(1.04, 2.63)， P<0.001]和CD8 +T细胞中TLR7平均荧光强度[(130.0±45.07) vs. (250.9±79.09)， P<0.001）均低于对照者。对脓毒症患者存活组和死亡组TLR7水平进行ROC曲线分析，TLR7 mRNA和TLR7 MFI曲线下面积分别为0.70和0.73（均 P<0.05），预测价值较好。脓毒症患者CD8 +T细胞中免疫检查点受体mRNA表达升高、直接接触杀伤功能及分泌毒性分子、细胞因子水平降低（均 P<0.05）。在直接接触共培养体系中，CL097刺激可增加脓毒症患者CD8 +T细胞诱导靶细胞死亡比例[(11.92±2.81)% vs. (9.28±2.03)%， P=0.008]，促进毒性分子和细胞因子分泌。在间接接触共培养体系中，CD8 +T细胞诱导靶细胞死亡比例和毒性分子分泌在经CL097刺激和无CL097刺激之间的差异无统计学意义。 结论:TLR7水平降低对脓毒症患者预后不佳有提示意义。脓毒症患者存在CD8+T细胞功能衰竭，TLR7激动剂可增强脓毒症患者CD8+T细胞杀伤功能。

目的:观察白细胞介素（interleukin，IL）-37在糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease，DKD）患者中的表达，并评估外源性IL-37对DKD患者CD8 +T细胞功能的调控作用。 方法:采用横断面研究方法，纳入20例健康对照者、36例2型糖尿病（diabetes mellitus type 2，T2DM）患者及47例DKD患者。采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞。酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血浆IL-37、可溶型IL-1受体8（IL-1 receptor 8，IL-1R8）水平。流式细胞术检测CD8 +T细胞中IL-18受体α链（IL-18 receptor α chain，IL-18Rα）、IL-1R8水平和免疫检查点分子水平。纯化CD8 +T细胞，使用重组IL-37刺激培养，与人胚胎肾293（human embryonic kidney 293，HEK293）细胞直接接触或间接接触共培养。ELISA法检测穿孔素（perforin）、颗粒酶B（granzyme B）、干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。通过检测乳酸脱氢酶水平计算靶细胞死亡比例。 结果:DKD患者血浆IL-37水平［（63.42±23.30）ng/L］低于健康对照者［（143.02±50.67）ng/L］和TD2M患者［（87.88±40.62）ng/L］（ t=8.848， P<0.001； t=3.456， P<0.001）。血浆IL-37对个体发生T2DM、T2DM患者发生DKD的预测效能较好［曲线下面积分别为0.797（95% CI 0.676～0.917， P<0.001）和0.691（95% CI 0.576～0.807， P=0.003）］。DKD患者血浆IL-37水平与血尿素氮（ r=-0.313， P=0.032）和血肌酐水平（ r=-0.477， P<0.001）呈负相关，与估算肾小球滤过率呈正相关（ r s=0.478， P<0.001）。DKD患者IL-1R8 + CD8 +细胞比例显著高于健康对照者和T2DM患者（33.60%±9.47%比16.29%±5.97%、17.13%±4.85%， t=7.545、9.516，均 P<0.001），且与空腹血糖、血尿素氮、血肌酐、估算肾小球滤过率无相关性（均 P>0.05）。IL-18Rα + CD8 +细胞比例、可溶型IL-1R8水平、免疫检查点分子占CD8 +T细胞比例在健康对照者、T2DM患者、DKD患者之间的差异无统计学意义（均 P>0.05）。DKD患者CD8 +T细胞分泌穿孔素和颗粒酶B水平均显著高于健康对照者［（108.78±12.42）ng/L比（94.60±10.07）ng/L， t=3.096， P=0.005；（261.34±48.79）ng/L比（166.28±30.80）ng/L， t=3.387， P=0.002］和T2DM患者［（108.78±12.42）ng/L比（92.58±14.71）ng/L， t=3.263， P=0.003；（261.34±48.79）ng/L比（170.66±39.24）ng/L， t=2.627， P=0.014］，但CD8 +T细胞分泌IFN-γ和TNF-α水平在健康对照者、T2DM患者、DKD患者间的差异无统计学意义（均 P>0.05）。在直接接触共培养中，IL-37刺激后CD8 +T细胞诱导HEK293细胞死亡比例降低（13.03%±4.97%比17.88%±5.19%， t=2.235， P=0.037），上清中穿孔素［（222.02±25.79）ng/L比（294.30±25.58）ng/L， t=6.603， P<0.001］、颗粒酶B［（416.27±90.24）ng/L比（524.71±115.53）ng/L， t=2.454， P=0.023］、IFN-γ［（23.66±4.20）ng/L比（35.18±8.51）ng/L， t=4.026， P<0.001］和TNF-α［（1.62±0.29）μg/L比（2.09±0.57）μg/L， t=2.302， P=0.034］水平均降低。在间接接触共培养中，CD8 +T细胞诱导HEK293细胞死亡比例、穿孔素、颗粒酶B水平在无刺激和IL-37刺激之间的差异均无统计学意义（均 P>0.05），但IL-37刺激后上清中IFN-γ［（23.56±6.24）ng/L比（32.56±9.90）ng/L， t=2.550， P=0.019］和TNF-α［（1.41±0.31）μg/L比（2.10±0.44）μg/L， t=4.011， P<0.001］水平降低。 结论:DKD患者外周血IL-37水平降低，外源性IL-37可抑制DKD患者CD8 +T细胞的杀伤活性。

Ⅵ型分泌系统(Type Ⅵ Secretion System,T6SS)是细菌中新发现的一种以直接接触方式释放毒性效应蛋白杀死真核"捕食者"或原核"竞争对手"的蛋白分泌装置,被喻为细菌的"分子武器",在细菌环境适应性、致病性和基因的水平转移等方面都发挥重要作用.约25％的革兰氏阴性细菌基因组中存在T6SS编码基因簇,存在广泛,越来越多的研究支持T6SS是细菌间生态位竞争的关键因素.T6SS发挥生物学功能的效应蛋白具有高度多样性,并不具有保守的特征序列,涉及的调控机制复杂,因此是T6SS研究领域的热点和难点.河弧菌(V.fluvialis)作为一种新发的食源性病原菌,T6SS的数量、组成和生理功能具有独特性,与其广泛的环境适应性及致病性有关.本文综述了河弧菌T6SS的组成结构、功能活性及调控机制等.

[背景]在不同的环境空气中存在着多种微生物,一旦易感人群与环境中的致病微生物接触,很容易被感染.为避免致病菌的传播,采取消毒的方式将环境中的致病菌杀死以阻断致病菌与人类接触,是目前最简单有效的办法.次氯酸钠(NaClO)是目前应用最广泛的消毒剂,然而NaClO应用于环境空气消毒的安全性尚不明确.[目的]建立NaClO诱导支气管上皮细胞(BEAS-2B)损伤模型,探讨NaClO消毒剂对BEAS-2B细胞的毒性作用机制.[方法]将 100 mmol·L-1 NaClO 标准溶液用 0.9%NaCl溶液梯度稀释至 0、25、50、100、200、400 μmol·L-1 处理细胞,分别在 15、30 min后细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性,选择0、25、50 μmol·L-1 NaClO处理的细胞在倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞术 Annexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,确定最终实验浓度.透射电镜观察线粒体等细胞器的形态,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,Fluo-4 AM荧光探针法检测细胞内Ca2+浓度,2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测细胞总活性氧(ROS),二氢乙锭(DHE)荧光探针检测细胞线粒体ROS,试剂盒检测脂质过氧化中间产物丙二醛(MDA).[结果]与 0 μmol·L-1 NaClO处理组细胞相比,25 μmol·L-1 NaClO处理 30 min后细胞形态变化不大,50 μmol·L-1 NaClO处理 30 min后细胞活力下降至正常细胞活力的 70%(P＜0.01),细胞形态开始皱缩变圆,最终选择 50 μmol·L-1 NaClO处理 30 min作为后期实验浓度.实验结果发现,与 0 μmol·L-1 NaClO处理组细胞相比,NaClO处理组凋亡细胞数量增加(P＜0.05),线粒体膜电位降低(P＜0.01),细胞内Ca2+浓度升高(P＜0.05),细胞ROS水平升高(P＜0.05),线粒体ROS水平升高(P＜0.01),MDA含量升高(P＜0.01).[结论]本研究成功建立了NaClO诱导BEAS-2B细胞损伤模型,并发现NaClO可通过诱导BEAS-2B细胞凋亡和氧化应激导致细胞损伤.根据结果推测可能的原因有 2种,一是NaClO溶于水形成次氯酸(HClO),HClO具有氧化性,进入细胞后使细胞内ROS水平升高,导致细胞氧化应激.二是HClO进入细胞直接攻击线粒体膜,导致线粒体膜内外电位失衡,Ca2+外流引起细胞凋亡.

光动力治疗(PDT)是控制恶性肿瘤的一种有前景的替代治疗方法.其作用机制是光敏剂在肿瘤组织中的选择性富集,通过激光触发光敏剂将氧气转化为对细胞具有杀伤作用的活性氧分子,氧化损伤周边的细胞器和生物分子,诱导肿瘤细胞坏死、凋亡、自噬和铁死亡.此外,PDT可诱发肿瘤局部急性炎症,产生免疫反应进一步杀伤肿瘤.PDT联合其他治疗可克服肿瘤细胞对传统治疗的抵抗,增强治疗效果.

[目的]探究芫荽Coriandrum sativum精油对桃蚜Myzus persicae的生物活性和对吡虫啉的增效作用,以及桃蚜对芫荽精油胁迫的响应机制.[方法]分别测定芜荽籽精油和芜荽叶精油对桃蚜成蚜的24 h熏蒸活性(精油浓度为200,100,50,25,12.5和6.25 μL/mL)和触杀活性(精油浓度为 12.5,6.25,3.125,1.563 和 0.781 μL/mL)半致死浓度(median lethal concentration,LC50)值;配制浓度为4.0,2.0,1.0,0.5和0.25 mg/L的吡虫啉,分别添加体积分数为0.05％的芫荽叶精油和芫荽籽精油,采用浸叶法处理桃蚜成蚜,48 h时检测芫荽叶精油和芜荽籽精油对吡虫啉的增效作用;检测LC50浓度芫荽叶精油和芫荽籽精油触杀处理桃蚜成蚜48 h时保护酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和过氧化物酶(peroxidase,POD),解毒酶羧酸酯酶(carboxylesterase,CarE)和谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)及乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的活性.[结果]芫荽籽精油和芫荽叶精油对桃蚜成蚜的24 h触杀LC50值分别为1.63和3.72μL/mL,24h熏蒸LC50值分别为14.69和34.15 μL/mL.增效试验结果表明,添加体积分数0.05％芫荽籽精油和芫荽叶精油后,吡虫啉对桃蚜成蚜的LC50值分别为0.99和1.51 mg/L,增效比分别为4.78和3.13.与空白对照组相比,LC50浓度芫荽籽精油和芫荽叶精油触杀处理桃蚜成蚜48 h时,保护酶SOD和CAT活性均显著增强,但POD活性没有明显变化;解毒酶CarE和GST及AChE活性均显著增强,其中,芫荽籽精油处理组桃蚜成蚜SOD,GST和AChE活性分别是芫荽叶精油处理组的1.58,1.20和1.34倍.[结论]芫荽籽精油和芫荽叶精油对桃蚜均具有触杀和熏蒸活性,且均对吡虫啉表现出增效作用,其中芫荽籽精油效果更强;桃蚜可通过升高体内保护酶SOD,CAT活性和解毒酶CarE,GST及AChE活性来应对芫荽精油杀虫成分的胁迫.