目的:探讨低氧肺癌细胞来源的外泌体微小RNA(miR)-1278对巨噬细胞M2极化的调节作用及其机制。方法:收集正常条件和缺氧肺癌细胞的培养上清液，差速离心法分离外泌体，透射电子显微镜观察并计数，实时定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-1278的表达水平。运用收集的外泌体(各10 μg)处理CD14+单核细胞(主要是巨噬细胞)，诱导细胞M2型分化，流式细胞术评估分化效果。miR-1278 mimic、miR-1278 inhibitor以及各自的阴性对照转染CD14+单核细胞，检测M2型巨噬细胞比例，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)、趋化因子CC配体18(CCL-18)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的分泌量。预测、筛选和验证miR-1278的靶基因，研究miR-1278对靶基因及其下游通路的调节作用。常氧和低氧CL1-5细胞外泌体分别与通路抑制剂WP1066或miR-1278 inhibitor处理CD14+单核细胞，检测M2型巨噬细胞比例，并研究巨噬细胞条件培养基对肺癌细胞迁移和内皮细胞血管形成的作用。采用Student′s t检验分析两组间差异，多组间数据差异采用方差分析进行比较。 结果:与常氧肺癌细胞比较，低氧肺癌细胞分泌的外泌体数量显著增加(0.8~1.5倍， P<0.05)。过表达和抑制miR-1278的水平分别促进常氧(12.06%比38.21%， P<0.05)和抑制低氧(30.55%比9.53%， P<0.05)巨噬细胞的M2极化，伴随IL-10、CCL-18和VEGF-A分泌量的变化。miR-1278靶向抑制磷酸酶SHP-1的表达(约70%， P<0.05)，进而促进信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路的活性。WP1066(STAT3抑制剂)处理可以抑制低氧肺癌细胞外泌体诱导的M2极化，WP1066和miR-1278 inhibitor均可抑制低氧肺癌外泌体诱生的巨噬细胞条件培养基对肿瘤细胞迁移和内皮细胞血管形成的诱导作用。 结论:低氧肺癌来源的外泌体携带的miR-1278通过靶向抑制SHP-1的表达，激活STAT3通路，从而诱导巨噬细胞的M2极化，有助于构建免疫抑制微环境，进而促进肿瘤迁移和血管形成。

目的:比较发热伴血小板减少综合征（SFTS）与恙虫病两种疾病患者病程中免疫损伤的差异。方法:采用前瞻性病例对照研究，选择2014年10月至2017年6月安徽医科大学第一附属医院收治的31例SFTS患者和16例恙虫病患者，另外以10例健康体检者作为对照。用流式细胞仪检测患者外周血CD4 +、CD8 + T淋巴细胞计数以及CD3 + T淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、B淋巴细胞及浆细胞的比例；同时用Luminex液相芯片平台技术检测外周血34个细胞因子水平。比较两组患者间淋巴细胞及细胞因子的差异。 结果:SFTS患者外周血CD3 + T淋巴细胞比例、CD4 +及CD8 + T淋巴细胞计数明显低于恙虫病患者（ t值分别为4.860、9.411和5.030，均 P<0.01），NK细胞及B淋巴细胞比例明显高于恙虫病患者（ t值分别为2.344和5.896，均 P<0.05）。SFTS患者病程中外周血浆细胞比例为（7.7±1.2）%，危重患者最高可达30%，都表现为λ单克隆型细胞群；而恙虫病患者外周血中未检测到浆细胞。检测34个细胞因子水平发现，SFTS与恙虫病患者白细胞介素- 1受体抗体（IL-1RA）、白细胞介素（IL-6、IL-15、IL-10、IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ -干扰素（IFN-γ）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）、IFN -γ诱导蛋白10（IP-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白（MIP-1α、MIP-1β）、血小板源生长因子（PDGF-AA、PDGF-AB/BB）及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）表达均异常，其中SFTS患者IL-1RA、IL-6、IL-15、IL-10、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、Eotaxin、IL-8、IP-10、MCP-1和MIP-1α水平明显高于恙虫病患者（ Z值分别为2.312、2.447、3.660、5.444、1.965、2.402、2.402、2.997、3.525、2.481、3.817和2.211，均 P<0.05），PDGF-AA、PDGF-AB/BB和RANTES分泌水平明显低于恙虫病患者（ Z值分别为3.728、2.514和2.649，均 P<0.05）。相关性分析发现，RANTES、PDGF-AA和PDGF-AB/BB水平均与SFTS、恙虫病患者血小板水平呈明显正相关（SFTS： r值分别为0.223、0.365、0.330，恙虫病： r值分别为0.263、0.632、0.407，均 P<0.05）。在SFTS患者中，与存活组（21例）比较，死亡组（10例）CD3 + T淋巴细胞比例、CD4 + T淋巴细胞计数明显降低，浆细胞比例明显升高（ t值分别为3.980、3.314和26.692，均 P<0.01），IL-1RA、IL-6、IL-15、IL-10、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、Eotaxin、IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β明显升高，PDGF-AA、PDGF-AB/BB和RANTES明显降低（ Z值分别为3.930、4.014、2.832、3.592、2.958、3.508、2.578、3.254、4.270、3.465、2.663、3.085、3.107、3.639、3.043和3.825，均 P<0.05）。 结论:SFTS患者较恙虫病患者免疫功能受损更严重；SFTS患者过强的体液免疫及T淋巴细胞凋亡程度与死亡发生密切相关。病程中检测CD4细胞、浆细胞及IL-6、IL-10为代表的促炎和抗炎细胞因子对SFTS与恙虫病的鉴别及病情评估有重要临床意义。

目的:探讨胰腺癌细胞对巨噬细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及核因子E2相关因子2(Nrf2)在其中的作用。方法:检测单一人胰腺癌细胞(PANC-1)培养组、单一巨噬细胞培养组、肿瘤细胞和巨噬细胞共培养组中各细胞VEGF表达。利用野生组、Nrf2过表达组、Nrf2敲减组中PANC-1的条件培养基刺激巨噬细胞，检测巨噬细胞VEGF的表达。将Nrf2过表达PANC-1条件培养基分为乳酸正常组，乳酸减低组和乳酸减低恢复组利用各组条件培养基刺激巨噬细胞，探究乳酸在抑制巨噬细胞VEGF表达中的作用，并且检测乳酸可能激活的巨噬细胞内的信号通路。两组间相关性采用费舍尔检验，两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:肿瘤细胞与巨噬细胞共培养组中巨噬细胞VEGF表达高于其他各组中各细胞，差异有统计学意义( F＝99.836， P<0.05)。Nrf2过表达的PANC-1条件培养基刺激组中巨噬细胞VEGF相对表达量为2.875±0.446，分泌水平为(326.744±27.507) ng/L，显著高于其他组，差异有统计学意义( F＝26.952、48.996， P<0.05)。Nrf2过表达组中PANC-1乳酸分泌高于对照组，差异有统计学意义( t＝5.974， P<0.05)。调节Nrf2过表达PANC-1条件培养基中乳酸浓度，利用条件培养基刺激巨噬细胞，乳酸减少组中巨噬细胞内活性氧物质(ROS)生成显著低于其他组，差异有统计学意义( F＝26.952， P<0.05)。抑制巨噬细胞内ROS，抑制组VEGF表达(0.582±0.063)和分泌量[(156.560±23.200) ng/L]显著减少，差异有统计学意义( t＝4.791、7.333， P<0.05)。 结论:Nrf2通过增加胰腺癌细胞乳酸分泌诱导巨噬细胞内ROS生成，从而促进巨噬细胞VEGF表达。

目的:研究卵巢滤泡激素（FLCN）在干扰素γ（IFN-γ）介导的黑素细胞凋亡及趋化因子分泌中发挥的作用。方法:从正常人包皮环切组织及白癜风移植患者正常部位的吸疱表皮分离正常原代黑素细胞及白癜风原代黑素细胞。采用Western印迹检测正常原代黑素细胞、白癜风原代黑素细胞及人原代黑素细胞系PIG1细胞中FLCN蛋白的表达。以10 ng/ml IFN-γ刺激48 h的PIG1细胞为诱导组，未经处理的PIG1细胞为对照组，采用qRT-PCR检测两组细胞FLCN及自噬相关微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ、Beclin基因mRNA表达，Western印迹检测FLCN、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平及腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的磷酸化水平。进一步对采用10 ng/ml IFN-γ刺激的黑素细胞感染FLCN抑制病毒进行不同的处理，分为阴性对照组、FLCN抑制组、抑制FLCN及添加mTOR抑制剂的自噬增强组和抑制FLCN及添加AMPK抑制剂的自噬抑制组。采用流式细胞仪检测各组PIG1细胞凋亡，酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清液中趋化因子CXCL10和CCL20的浓度。多组间计量资料比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD- t检验。 结果:正常原代黑素细胞（0.850 ± 0.120）、白癜风原代黑素细胞（1.507 ± 0.170）和PIG1细胞（0.697 ± 0.130）FLCN蛋白的相对表达差异有统计学意义（ F = 50.09， P < 0.001），白癜风原代黑素细胞高于正常原代黑素细胞和PIG1细胞（ t = 4.06、5.89，均 P < 0.01）。诱导组FLCN mRNA及蛋白相对表达均高于对照组（均 P < 0.01），LC3Ⅱ、Beclin mRNA及蛋白相对表达均低于对照组（均 P < 0.01）；诱导组PIG1细胞LC3Ⅱ/Ⅰ水平（0.72 ± 0.02）、AMPK磷酸化水平（0.714 ± 0.023）低于对照组（1.13 ± 0.02、1.176 ± 0.002， t = 7.34、6.67，均 P < 0.01），mTOR磷酸化水平（1.051 ± 0.023）高于对照组（0.451 ± 0.016， t = 3.81， P = 0.009）。对照组、诱导组及各处理组PIG1细胞凋亡率及CXCL10、CCL20浓度差异均有统计学意义（均 P < 0.001），诱导组高于对照组，FLCN抑制组低于阴性对照组，自噬增强组低于FLCN抑制组，自噬抑制组高于FLCN抑制组（均 P < 0.05）。 结论:白癜风黑素细胞中高表达FLCN，FLCN表达以及下游信号通路受IFN-γ调控，FLCN可通过调节自噬参与IFN-γ介导的黑素细胞凋亡和趋化因子分泌。

目的:通过研究蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus, TBEV)感染小鼠引起神经退行性疾病探讨中枢神经系统可能存在的致病机制。方法:小鼠颅内接种TBEV，8 d后处死取脑组织，HE染色观察脑组织病变以验证造模成功；免疫组化检测小鼠脑组织内神经元细胞核(neuronal nuclei, NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和调节激活正常T细胞表达和分泌因子(reduced upon activation, normal T cell expressed and secreted, RANTES)的表达，统计阳性细胞数量或分析灰度值计算评分；免疫荧光结合激光共聚焦观察NeuN、GFAP的阳性细胞分布和RANTES、PCNA的表达情况。结果:TBEV感染后小鼠脑组织NeuN阳性细胞数减少，GFAP阳性细胞数增加，星形胶质细胞增殖多于神经元，且RANTES主要由星形胶质细胞产生。结论:TBEV感染会引起脑组织的神经毒性反应，导致神经细胞死亡，星形胶质细胞活化并产生大量趋化因子RANTES。

目的:探讨仑伐替尼(lenvatinib,Len)增强免疫检查点抑制剂在小鼠肝细胞癌(hepatocellular carci-noma,HCC)中的疗效,并分析其在肿瘤微环境中的免疫调节机制.方法:分析不同浓度的Len对人脐静脉血管内皮细胞迁移和CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)分泌的影响并分析Len影响CXCL10分泌的机制.构建小鼠原位HCC模型,将荷瘤小鼠随机分为PBS组、BMS-202(PD-1/PD-L1抑制剂)组、Len组和Len/BMS-202组,通过小动物活体成像观察小鼠原位HCC的生长情况.治疗第13天处死小鼠取肿瘤组织,免疫荧光法检测肿瘤组织凋亡、血管结构和缺氧情况.免疫组化法检测肿瘤组织内增殖标志物Ki67和转化生长因子β(trans-forming growth factor-β,TGF-β)的表达水平,及CD4+T细胞、CD8+T细胞的浸润程度.ELISA检测小鼠血清中的免疫因子干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、CXCL10和TGF-α的分泌情况,进行统计学分析.结果:(1)Len在低剂量范围内可促进内皮细胞迁移,且Len通过阻断FGFR增强肿瘤细胞对IFN-γ的响应,进而促进肿瘤细胞分泌CXCL10.(2)与PBS组相比,各给药组肿瘤生长均较缓慢,其中以Len/BMS-202组荷瘤小鼠肿瘤生长受抑制为著(P<0.05).(3)与PBS组及单药组相比,Len/BMS-202组明显促进了肿瘤组织的凋亡和抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05).(4)与PBS组及BMS-202组相比,Len组及Len/BMS-202组肿瘤组织周细胞覆盖率明显提升(P<0.01),缺氧状态明显缓解(P<0.01).(5)与PBS组及单药组相比,Len/BMS-202组肿瘤内CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润明显增加(P<0.01),TGF-β的表达显著下降(P<0.01).(6)与PBS组相比,各治疗组不同程度促进了小鼠血清中IFN-γ、CXCL10和TGF-α的分泌(P<0.05),其中Len/BMS-202组效果最好(P<0.01).结论:Len可能通过促进肿瘤血管正常化、改善缺氧及促进CXCL10分泌,共同激活肿瘤免疫微环境,从而协同增强BMS-202对HCC的治疗效果.

目的 探讨难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)患儿血清白细胞介素-17A(IL-17A)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平变化及临床意义.方法 选取华北医疗健康集团邢台总医院2019年12月至2021年12月162例RMPP患儿作为研究组,另取同期120例普通肺炎支原体肺炎(GMPP)患儿作为对照组.收集两组一般资料,检测并比较两组血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平对RMPP患儿的诊断价值,采用单因素及多因素Logistic模型分析影响RMPP的因素.结果 研究组肺不张、肺实变、胸腔积液占比、FEV1、FVC、CRP及D-D均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,RMMP患儿FEV1、FVC均与血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平呈负相关(P<0.05);Pearson相关性分析显示,RMMP患儿血清IL-17A与RANTES、GM-CSF呈正相关,RANTES与GM-CSF呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,血清IL-17A、RANTES、GM-CSF水平联合诊断RMPP患儿的AUC为0.906,显著高于各自单独诊断的0.785、0.752和0.765(P<0.05);Logistic模型分析显示,存在肺不张(OR=2.052,P<0.001)、存在肺实变(OR=2.591)、存在胸腔积液(OR=2.309)、血清IL-17A≥10.77 pg/mL(OR=1.984)、RANTES≥32.95 μg/L(OR=1.833,P<0.001)、GM-CSF10.58 μg/L(OR=1.902)均为影响RMPP的独立危险因素.结论 IL-17A、RANTES、GM-CSF在RMPP患儿血清中呈高表达,三指标联合检测的诊断效能较高,可为临床尽早诊断、尽早干预RMPP提供一定的帮助.

目的 探讨宿主感染疟原虫后肺脏CD4+T细胞中程序性细胞死亡1蛋白(PD-1)的表达情况及功能.方法 将5～6周雌性C57BU6小鼠随机分为正常组和感染组,每组6只.采用流式细胞术检测疟原虫感染前后小鼠肺脏CD4+T细胞中PD-1的表达情况,并用流式检测肺脏PD-1+CD4+T细胞表型和细胞因子的分泌能力,之后采用qRT-PCR技术检测可能参与PD-1表达的相关转录因子B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp-1)、活化T细胞核因子(NFATc1)、信号转导及转录激活因子(STAT)3、STAT4、干扰素刺激基因因子3(ISGF3)、激活蛋白1(AP-1)、缺口基因Notch、叉头转录因子1(FoxO1)、核因子-κB(NF-κB)的表达情况.结果 疟原虫感染后,小鼠肺脏表达PD-1的CD4+T细胞的比例显著升高,由原来的11.66％升高到58.60％,差异有统计学意义(t=7.892,P＜0.01).感染组小鼠肺脏中PD-1+CD4+T细胞表达CD69分子高于PD-1CD4+T细胞,差异有统计学意义(t=9.856,P＜0.01).在感染组,与PD-1-CD4+T细胞相比,更多的PD-1+CD4+T细胞分泌IFN-γ、白细胞介素(IL)-2和IL-10,差异均有统计学意义(t=7.301、4.876、7.607,P均＜0.05).qRT-PCR检测结果发现与正常组相比,感染组脾脏中多种转录因子的表达量均改变,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 疟原虫感染后,小鼠肺脏中表达PD-1的CD4+T细胞参与了免疫应答,并通过分泌细胞因子,发挥免疫调节作用.

目的 观察促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)联合腹腔镜手术对卵巢子宫内膜异位囊肿(OEC)患者血清性激素和卵巢储备功能的影响.方法 选取2020 年 1 月至2022 年 3 月宜宾市第二人民医院收治的 150 例OEC患者作为研究对象.采用随机数字表分组法将其分为GnRH-a组(n = 75)与对照组(n =75).对照组仅接受腹腔镜手术治疗,GnRH-a组在接受腹腔镜手术治疗的基础上联合使用GnRH-a治疗.比较治疗后两组的治疗效果,观察治疗前、治疗后两组月经情况(经期、痛经程度)、性激素[黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)]、卵巢储备功能、细胞因子[血清调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)],随访 1 年,统计两组囊肿复发及妊娠情况.结果 治疗后,两组总有效率比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗后,GnRH-a组月经情况(经期、痛经视觉模拟评分法评分)、性激素(LH、FSH、P、E2)、血清 RANTES、HMGB1 水平均低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);GnRH-a组基础状态卵泡数与卵巢体积均高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 GnRH-a联合腹腔镜手术治疗OEC具有显著疗效,可有效改善患者的临床症状、性激素水平、卵巢储备功能,调节细胞因子,降低复发率,提高妊娠率.

目的:探讨格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分联合血清转位蛋白(TSPO)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)对重型颅脑损伤(sTBI)患者去骨瓣减压术(DC)后短期死亡的预测价值.方法:选取2019年1月～2022年7月新疆医科大学第四附属医院重症医学科收治的102例接受DC的sTBI患者,根据30 d(短期)预后情况分为死亡组和存活组.计算GCS评分和检测血清TSPO、RANTES水平.采用多因素Logistic回归分析sTBI患者DC后短期死亡的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析GCS评分和血清TSPO、RANTES水平对sTBI患者DC后短期死亡的预测价值.结果:102例sTBI患者DC后30 d死亡率为30.39％(31/102).与存活组比较,死亡组GCS评分降低,血清TSPO、RANTES水平升高(P＜0.05).死亡组合并多发伤、受伤至手术时间≥6h、瞳孔散大、颅内血肿量≥40mL、中线移位≥5 mm比例高于存活组(P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示,受伤至手术时间≥6h、瞳孔散大、中线移位≥5 mm、TSPO和RANTES升高为sTBI患者DC后短期死亡的独立危险因素,GCS评分增加为其独立保护因素(P＜0.05).ROC曲线分析显示,GCS评分联合血清TSPO、RANTES预测sTBI患者DC后短期死亡的曲线下面积大于GCS评分和血清TSPO、RANTES单独预测(P＜0.05).结论:GCS评分和血清TSPO、RANTES水平与sTBI患者DC后短期死亡独立相关,GCS评分联合血清TSPO、RANTES预测sTBI患者DC后短期死亡的价值较高,可能成为sTBI患者DC后短期死亡的辅助预测指标.