-
基于SIRT1/FoxO1信号通路探讨高压氧对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的影响
编辑人员丨4天前
目的:基于沉默信息调节因子1/叉头转录因子O1(SIRT1/FoxO1)信号通路探讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注(CIR)大鼠血脑屏障(BBB)的保护作用。方法:选取雄性Wistar大鼠40只,按照随机数字表法将其分成假手术组(Sham组)、模型组(CIR组)、CIR+HBO组、CIR+HBO+ SIRT1抑制剂(EX527)组,每组10只。采用改良线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉栓塞模型,Sham组大鼠不进行结扎和线栓导入,CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组予以HBO干预,CIR+HBO+EX527组在此基础上再予以EX527处理。CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组于再灌注1 h、9 h、21 h、45 h、69 h进入HBO舱,期间行HBO治疗5次。在处死动物前1 h,经尾静脉注射2%伊文思兰(EB),采用比色法、逆转录-聚合酶链(RT-PCR)和Western blot法分别检测再灌注72 h大鼠海马区脑组织EB含量,SIRT1、FoxO1、ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA及蛋白表达变化。结果:CIR 72 h,CIR组、CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组大鼠海马区脑组织EB含量均较Sham组明显增加( P<0.05),CIR+HBO+XE527组大鼠海马区脑组织EB的含量较CIR+HBO组显著增加( P<0.05)。CIR 72 h,CIR组、CIR+HBO组和CIR+HBO+EX527组大鼠海马区脑组织SIRT1、FoxO1、ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA表达及其相应蛋白表达较Sham组均显著降低( P<0.05),CIR+HBO+EX527组大鼠海马区脑组织SIRT1、FoxO1、ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA表达及其相应蛋白表达较CIR+HBO组显著降低( P<0.05)。 结论:HBO可以通过SIRT1/FoxO1通路增加紧密连接蛋白的表达,从而在CIR损伤中对BBB起到保护作用。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
转录因子EB调控机制及其对血液肿瘤的影响及靶向治疗研究现状
编辑人员丨4天前
转录因子(TF)EB是小眼畸形(MiT)/TFE家族的成员之一,参与调控机体多种生理、病理过程,其活性及亚细胞定位受到多个环节的调控,如转录调控、转录后调控、翻译水平调控及翻译后修饰(PTM)等。TFEB可以以自噬溶酶体依赖或非依赖途径影响多种血液肿瘤的发生、发展,TFEB的靶向调控已成为血液肿瘤的治疗策略之一。笔者就近年来TFEB调控机制及其对血液肿瘤的影响及靶向治疗方法的研究现状进行阐述,旨在为血液肿瘤治疗的潜在靶点选择提供参考。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
叉头框转录因子F2作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白信号通路候选靶基因的研究
编辑人员丨4天前
目的:筛选叉头框转录因子F2(FOXF2)作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的候选靶基因并分析其生物学功能。方法:设置干扰FOXF2基因的最佳慢病毒转染获得的HT29细胞为沉默组,空载慢病毒转染获得的HT29细胞为对照组。对照组和沉默组各取三个样本行转录组测序分析;富集到Wnt/β-catenin信号通路,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证该通路的候选靶基因。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用 t检验。 结果:3组干扰慢病毒沉默HT29细胞中FOXF2的表达效果显著高于空载慢病毒[FOXF2基因信使RNA(mRNA)表达分别为0.29±0.02、0.28±0.05、0.26±0.01比1.00±0.13,FOXF2基因蛋白表达分别为0.20±0.02、0.16±0.01、0.12±0.01比1.00±0.01],差异有统计学意义( F=75.948、3 549.333,均 P<0.01),第3组慢病毒沉默FOXF2效果最佳。HT29细胞沉默FOXF2后有389个差异表达基因(DEGs);基因本体论(GO)功能富集分析显示,DEGs显著富集在免疫效应过程、细胞外区域、腺苷酸转移酶活性等功能集团;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,DEGs主要涉及EB病毒感染、NOD样受体信号通路及Wnt信号通路等;Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BAMBI)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体5(LGR5)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体6(LGR6)和MSTRG.14182(新基因)主要涉及正向调控Wnt信号通路、细胞增殖和迁移等生物学过程。沉默组中BAMBI、LGR5、LGR6 mRNA和蛋白表达显著高于对照组[mRNA表达分别为1.86±0.21比1.00±0.20、1.95±0.11比1.00±0.09、2.06±0.10比1.00±0.03,蛋白表达分别为1.88±0.02比1.00±0.06、2.08±0.12比1.00±0.04、1.80±0.03比1.00±0.08],差异有统计学意义( t=-5.066、-11.646、-17.584、-24.100、-14.820、-16.710,均 P<0.01)。 结论:沉默FOXF2基因的HT29细胞存在较多的差异表达基因,Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因可能参与正向调控Wnt信号通路、细胞增殖及迁移等生物学过程。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
骨髓增生异常综合征RAS基因突变的分子学特征及预后意义
编辑人员丨4天前
目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)RAS基因突变的分子学特征及其对预后的影响。方法:收集2011年12月至2018年12月新诊断且完成二代测序的776例MDS患者病例资料,回顾性分析RAS基因突变患者的临床及分子学特征,并比较不同突变状态对总生存(OS)的影响。结果:共52例(6.7%)患者伴有RAS基因突变,NRAS突变38例(4.9%),KRAS突变18例(2.3%),4例(0.5%)同时伴NRAS及KRAS突变,全部NRAS突变及65%的KRAS突变位于第12、13及61号密码子。RAS基因突变与PTPN11、FLT3、U2AF1、RUNX1、WT1、ETV6及NPM1突变呈显著正相关( Q<0.05),且常为亚克隆突变。伴RAS基因突变的患者中诊断为MDS伴原始细胞增多(MDS-EB)的比例(82.7%)明显高于无RAS突变患者(35.2%)( P<0.001)。与无RAS基因突变患者相比,伴RAS基因突变患者的外周血白细胞水平和中性粒细胞水平明显升高[WBC:4.33(0.98~20.42)×10 9/L对2.71(0.61~21.17)×10 9/L, P<0.001;ANC:2.13(0.18~17.37)×10 9/L对1.12(0~16.00)×10 9/L, P<0.001],血小板水平明显减低[48(2~430)×10 9/L对62(2~694)×10 9/L, P=0.048],骨髓粒系比例有升高的趋势(47%对40%, P=0.085),骨髓原始细胞比例明显升高(7%对2%, P<0.001)。按照修订的国际预后积分系统(IPSS-R)进行预后分层,RAS基因突变患者中较高危分组(高危和极高危组)的比例显著增高(71.1%对37.9%, P<0.001)。单因素分析中,NRAS突变与更短的OS显著相关( P=0.011),经多因素校正后,NRAS突变对OS的影响失去显著性,突变基因中仅PTPN11及SETBP1为独立的不良OS因素。 结论:RAS基因突变常作为亚克隆发生在MDS疾病晚期且常与转录因子及信号转导相关的突变伴随发生。RAS通路相关的PTPN11突变在MDS中为独立不良预后因素。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
转录因子EB调控自噬溶酶体通路减轻脑缺血后神经元损伤
编辑人员丨4天前
自噬溶酶体途径(autophagy-lysosomal pathway, ALP)紊乱是脑缺血后神经元损伤的重要发病机制,而恢复ALP有可能减轻脑缺血后神经元损伤。作为调节ALP的主要转录因子,转录因子EB(transcription factor EB, TFEB)可调控自噬基因和溶酶体基因表达,直接调节自噬体生成、自噬体溶酶体融合和自噬通量。因此,通过调控TFEB能够缓解ALP功能障碍,进而减轻脑缺血损伤。文章对TFEB的结构、生物学功能及其调控ALP减轻脑缺血后神经元损伤的作用进行了综述。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
转录因子EB相关自噬在多发性骨髓瘤治疗中的作用及其机制研究
编辑人员丨4天前
目的:明确硼替佐米和(或)西拉美新作用于多发性骨髓瘤(MM)细胞株后细胞增殖、转录因子EB(TFEB)核转位表达变化及自噬水平,为进一步探讨TFEB对自噬的调控机制提供依据。方法:体外培养MM细胞株RPMI8226及U266,并以一定浓度的硼替佐米和西拉美新处理MM细胞,CCK-8法检测细胞增殖,实时定量PCR和Western blot法检测TFEB、自噬相关因子LC3B、Beclin1、p62、LAMP1的mRNA和蛋白相对表达量。结果:随着硼替佐米浓度增加及作用时间延长,两个细胞系的增殖抑制率增高( P<0.05)。硼替佐米和西拉美新联用对上述MM细胞株的增殖有协同抑制作用( P<0.05)。空白对照组、单药组、联合用药组处理MM细胞株后,细胞质中TFEB的mRNA和蛋白相对表达量依次下降( P<0.05),细胞核中TFEB的mRNA和蛋白相对表达量依次上升( P<0.05),自噬相关因子LC3B、Beclin1、LAMP1的mRNA和蛋白相对表达量依次上升,p62的mRNA和蛋白相对表达量依次下降( P<0.05)。 结论:硼替佐米和西拉美新具有协同抑制MM细胞增殖作用,与其诱导MM细胞株自噬表达增强相关,发生核转位的TFEB表达亦增强。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
鼻咽部甲状腺样低级别乳头状腺癌临床病理学观察
编辑人员丨4天前
目的:探讨鼻咽部甲状腺样低级别乳头状腺癌(TL-LGNPPA)的临床和病理学特征、免疫表型及相关基因改变。方法:收集2011年11月至2020年8月浙江省肿瘤医院(5例)和浙江大学医学院附属第一医院(10例)的15例TL-LGNPPA病例,对其进行临床和病理学观察、免疫组织化学染色及二代测序,总结其临床病理和分子生物学特点,并进行相关文献复习。结果:15例患者中位年龄36岁(20~60岁),男性7例,女性8例。最常见的症状是鼻出血和鼻塞,肿瘤主要位于鼻咽顶和鼻中隔后缘。病理形态学特征包括:由单层或假复层立方、柱状细胞构成复杂的乳头状及腺样结构,瘤细胞轻-中度异型。部分病例瘤细胞梭形,并与上皮细胞移行;可见核沟、磨玻璃样核,鳞状上皮化生,或间质散在沙砾体。此外,部分病例存在核极性反转细胞、靴钉样细胞及微乳头状结构。免疫组织化学染色结果显示所有病例肿瘤细胞甲状腺转录因子1(TTF1)、细胞角蛋白(CK)7、波形蛋白和广谱细胞角蛋白弥漫阳性;少数病例p40、CK5/6和p16部分细胞阳性;甲状腺球蛋白、Napsin A、CK20、CDX2、S-100蛋白和PAX8均阴性。Ki-67阳性指数1%~20%,其中≤10%有13例。EB病毒编码的RNA(EBER)原位杂交均阴性。6例标本进行了DNA序列检测,结果发现存在不同的基因突变(EWSR1、SMAD2、ROS1、JAK3、GRIN2A、ERRCC5、STAT3、TET2),未找到热点基因改变;同时都为低肿瘤突变负荷,也未检出胚系基因突变、微卫星高度不稳定和DNA错配修复相关基因改变。所有患者行内镜手术治疗,其中1例术后加放疗,随访23~129个月均无瘤生存。结论:TL-LGNPPA是一种鼻咽部少见的惰性肿瘤,具有独特的形态学和免疫表型。TL-LGNPPA患者预后较好,内镜下完整切除是治疗该肿瘤的有效方法。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
海藻糖对小鼠放射性肠损伤的防护作用及机制研究
编辑人员丨4天前
目的:探讨海藻糖对小鼠放射性肠损伤的防护作用及分子机制。方法:采用简单随机抽样法将8周龄的雄性C57 BL/6 J小鼠分为4组:对照组(不给予任何处理)、海藻糖组(饮用2 g/100 ml海藻糖水)、照射组(以13 Gy剂量对小鼠腹部照射)、海藻糖+照射组(饮用2 g/100 ml海藻糖水+以13 Gy剂量对小鼠腹部照射),每组6只。经13 Gy照射和2 g/100 ml海藻糖饮水处理后,每天记录小鼠体重,14 d后处死小鼠并采集小鼠的血液、小肠和结肠,测量结肠长度。采用苏木精-伊红(HE)染色法和过碘酸-雪夫(PAS )染色法评估小鼠肠道损伤程度;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清和小肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平;小鼠小肠上皮MODE-K细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、细胞凋亡检测实验、活性氧测定实验和DNA损伤检测实验分别检测细胞活力、细胞克隆形成能力、细胞凋亡率、活性氧水平和DNA双链断裂数量;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法和Western blot法分别检测自噬相关基因mRNA和蛋白水平的表达情况。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:动物实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可显著缓解电离辐射(IR)后小鼠体重的下降,并可促进其恢复( t=4.064 , P<0.05 ),且小鼠结肠缩短程度较轻,2组间的差异有统计学意义( t=4.044 , P<0.05 )。HE和PAS染色法评估结果显示,海藻糖可缓解IR后小鼠小肠黏膜损伤,与照射组比较,海藻糖+照射组小鼠绒毛较长、隐窝较深、杯状细胞数量较多,2组间的差异有统计学意义( t=4.373、8.414、6.515,均 P<0.05 )。ELISA检测结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可显著降低IR后小鼠血清及小肠组织中TNF-α和IL-6的水平,且差异均有统计学意义( t= 4.475、8.686、3.993、6.007,均 P<0.05)。细胞增殖和克隆实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可促进IR后小鼠小肠上皮MODE-K细胞活性和克隆形成能力[(0.885±0.127)对(0.644±0.151)、(97.330±5.937)对(64.000±7.324)],且差异均有统计学意义( t=2.566、4.411,均 P<0.05 );细胞凋亡检测实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可抑制IR后小鼠小肠MODE-K细胞凋亡率[(15.270±0.647)%对(9.334±0.854)%],且差异有统计学意义( t=8.315 , P<0.05 );活性氧测定实验和DNA损伤检测实验结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组可降低IR后小鼠细胞内ROS水平和DNA双链断裂数量( t=8.884、4.802,均 P<0.05 )。qRT-PCR法和Western blot法检测结果显示,与照射组比较,海藻糖+照射组小鼠小肠组织和MODE-K细胞中自噬相关基因TFEB、MAP1LC3B的表达水平显著增加[(208.210±26.143)对(8.986±5.362)、(13.970±4.587)对(5.815±1.873)] ,且差异均有统计学意义( t=8.875 ,8.461,均 P<0.05 )。 结论:海藻糖通过调控转录因子EB介导的自噬反应激活缓解小鼠放射性肠损伤。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
EB病毒感染患儿T淋巴细胞miR-155、STAT1的表达及意义
编辑人员丨4天前
目的:探讨Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染患儿CD4 +、CD8 + T淋巴细胞中微小RNA-155(MicroRNA-155,miR-155)、信号转导与转录激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)表达及其与EBV脱氧核糖核酸(EBV-deoxyribo nucleic acid,EBV-DNA)载量关系。 方法:选取在洛阳市妇幼保健院儿科治疗的85例急性EBV感染患儿为EBV感染组,及同期90例健康体检儿童为对照组。收集外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用流式细胞仪检测PBMC中CD3 +、CD4 +及CD8 + T淋巴细胞水平,计算CD4 +/CD8 +值。PBMC用免疫磁珠法分选得到CD4 +、CD8 + T淋巴细胞,采用实时荧光定量PCR检测CD4 +、CD8 + T淋巴细胞中miR-155、STAT1 mRNA表达及PBMC中EBV-DNA载量。相关性分析用Pearson检验。 结果:EBV感染患儿PBMC中CD3 +、CD8 + T淋巴细胞水平均高于对照组,CD4 + T淋巴细胞水平及CD4 +/CD8 +值均低于对照组( P<0.05)。EBV感染患儿CD4 +、CD8 + T淋巴细胞中miR-155、STAT1 mRNA表达均高于对照组( P<0.05)。EBV感染患儿CD4 +、CD8 + T淋巴细胞中miR-155、STAT1 mRNA表达水平均与EBV-DNA载量呈正相关( P<0.05)。 结论:EBV感染患儿CD4 +、CD8 + T淋巴细胞中miR-155、STAT1 mRNA表达均升高,二者高表达可能与EBV感染程度有关。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
-
EB病毒感染所致肝脏损伤患者病毒特异性CD4 +T细胞和CD8 +T细胞功能分析
编辑人员丨4天前
目的:分析EB病毒(EBV)感染者中发生肝脏损伤和未发生肝脏损伤患者病毒特异性CD4 +T细胞和CD8 +T细胞功能的差异。 方法:入组45例EBV感染者,28例发生肝脏损伤,17例未发生肝脏损伤。分离外周血单个核细胞,纯化CD4 +T细胞和CD8 +T细胞,使用重组EBV核心抗原2(EBNA2)刺激培养96 h。细胞技术试剂盒法检测细胞增殖,流式细胞术检测CD4 +T细胞和CD8 +T细胞比例。酶联免疫吸附试验检测CD4 +T细胞分泌细胞因子和CD8 +T细胞分泌毒性分子水平,实时定量PCR法检测CD4 +T细胞亚群转录因子mRNA水平和CD8 +T细胞中毒性分子mRNA水平,流式细胞术检测CD8 +T细胞中免疫检查点分子水平。组间比较采用 t检验或Mann-Whitney检验。 结果:重组EBNA2刺激后外周血单个核细胞增殖、CD4 +T细胞和CD8 +T细胞比例在EBV感染无肝脏损伤组和EBV感染致肝脏损伤组之间的差异无统计学意义( P > 0.05)。重组EBNA2刺激后CD4 +T细胞分泌相关细胞因子比例和转录因子mRNA水平在EBV感染无肝脏损伤组和EBV感染致肝脏损伤组之间的差异无统计学意义( P > 0.05)。重组EBNA2刺激后EBV感染致肝脏损伤组CD8 +T细胞分泌穿孔素[(75.51±23.33) pg/ml对比(58.99±18.39) pg/ml, P = 0.017]和颗粒酶B[(117.8±44.55) pg/ml对比(90.22±34.21) pg/ml, P = 0.034]的水平高于无肝脏损伤组,EBV感染致肝脏损伤组CD8 +T细胞中Fas配体和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体mRNA水平较无肝脏损伤组分别升高约1.5倍和1.2倍,差异有统计学意义( P < 0.001),但CD8 +T细胞中程序性死亡分子-1和细胞毒性T淋巴细胞抗原-4表达比例在EBV感染无肝脏损伤组和EBV感染致肝脏损伤组之间的差异无统计学意义( P > 0.05)。 结论:EBV感染致肝脏损伤患者病毒特异性CD8 +T细胞毒性作用增强,可能介导EBV诱导的肝脏损伤。
...不再出现此类内容
编辑人员丨4天前
