目的:筛选叉头框转录因子F2(FOXF2)作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的候选靶基因并分析其生物学功能。方法:设置干扰FOXF2基因的最佳慢病毒转染获得的HT29细胞为沉默组，空载慢病毒转染获得的HT29细胞为对照组。对照组和沉默组各取三个样本行转录组测序分析；富集到Wnt/β-catenin信号通路，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证该通路的候选靶基因。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用 t检验。 结果:3组干扰慢病毒沉默HT29细胞中FOXF2的表达效果显著高于空载慢病毒[FOXF2基因信使RNA(mRNA)表达分别为0.29±0.02、0.28±0.05、0.26±0.01比1.00±0.13，FOXF2基因蛋白表达分别为0.20±0.02、0.16±0.01、0.12±0.01比1.00±0.01]，差异有统计学意义( F＝75.948、3 549.333，均 P<0.01)，第3组慢病毒沉默FOXF2效果最佳。HT29细胞沉默FOXF2后有389个差异表达基因(DEGs)；基因本体论(GO)功能富集分析显示，DEGs显著富集在免疫效应过程、细胞外区域、腺苷酸转移酶活性等功能集团；京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示，DEGs主要涉及EB病毒感染、NOD样受体信号通路及Wnt信号通路等；Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BAMBI)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体5(LGR5)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体6(LGR6)和MSTRG.14182(新基因)主要涉及正向调控Wnt信号通路、细胞增殖和迁移等生物学过程。沉默组中BAMBI、LGR5、LGR6 mRNA和蛋白表达显著高于对照组[mRNA表达分别为1.86±0.21比1.00±0.20、1.95±0.11比1.00±0.09、2.06±0.10比1.00±0.03，蛋白表达分别为1.88±0.02比1.00±0.06、2.08±0.12比1.00±0.04、1.80±0.03比1.00±0.08]，差异有统计学意义( t＝－5.066、－11.646、－17.584、－24.100、－14.820、－16.710，均 P<0.01)。 结论:沉默FOXF2基因的HT29细胞存在较多的差异表达基因，Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因可能参与正向调控Wnt信号通路、细胞增殖及迁移等生物学过程。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）FAM224A调控miRNA-590-3p（miR-590-3p）表达对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响。方法:选择人卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及人正常卵巢上皮细胞株IOSE80，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测FAM224A在各个细胞株中的相对表达水平，筛选FAM224A相对表达水平最低的细胞株进行后续实验。将细胞分为FAM224A组（转染FAM224A模拟质粒）和对照组（转染对照模拟质粒），分别采用CCK-8法和细胞划痕实验检测两组细胞增殖和迁移能力。采用生物信息学网站LncBase v.2预测FAM224A可能互补结合的靶基因为miR-590-3p。qRT-PCR检测miR-590-3p和叉头框蛋白A2（FOXA2）mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及正常卵巢上皮细胞株IOSE80中FAM224A的相对表达水平分别为0.23±0.04、0.65±0.05、0.45±0.03、0.63±0.08和1.02±0.11，差异有统计学意义（ F=14.78， P<0.01），其中FAM224A相对表达水平最低的细胞株是OC3。CCK-8法检测结果显示，培养第2、3、4、5天，FAM224A组OC3细胞增殖能力均低于对照组（均 P<0.05）。FAM224A组和对照组OC3细胞的划痕愈合率分别为（18.6±2.3）%和（71.7±7.2）%，差异有统计学意义（ t=6.99， P<0.01）。FAM224A组和对照组OC3细胞中FAM224A相对表达水平分别为12.36±1.45和1.14±0.24（ t=13.08， P<0.01）；miR-590-3p相对表达水平分别为0.19±0.06和1.04±0.20（ t=4.01， P<0.01）；FOXA2 mRNA相对表达水平分别为6.37±1.37和1.05±0.08（ t=3.86， P<0.01）。与对照组比较，FAM224A组OC3细胞FOXA2蛋白表达升高，细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、cyclin D3表达均降低，细胞迁移蛋白Snail表达降低。 结论:FAM224A在卵巢癌细胞株中低表达，FAM224A通过抑制miR-590-3p表达降低卵巢癌OC3细胞的增殖和迁移能力。

为了比较高盐和低盐胁迫对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏能量代谢和线粒体自噬的影响差异及其作用机制,将体质量为(53.46±1.47)g大黄鱼放入盐度为12、25或40的水体暴露1d、3d和7d,取其肝脏样本检测氧化损伤、能量代谢和线粒体自噬相关指标.结果显示,胁迫1d时,高盐组的大黄鱼肝脏三羧酸循环酶活力和线粒体自噬基因表达水平显著高于低盐组,表明鱼类在盐度胁迫初期需要消耗更多的能量,并提高线粒体自噬来应对高盐胁迫.胁迫7d时,高盐组的大黄鱼肝脏ATP合成酶活力和微管相关蛋白轻链3基因表达水平低于低盐组,活性氧簇和乳酸含量,乙酰辅酶A羧化酶活力高于低盐组,表明高盐组的大黄鱼在胁迫末期降低了有氧代谢和线粒体自噬,提高了无氧代谢,导致机体能量供应不足,线粒体自噬受到抑制,从而加重了鱼类氧化损伤.在盐度胁迫过程中,腺苷酸活化蛋白激酶和叉头框转录因子O亚型3分别在调控能量代谢酶活力和线粒体自噬基因表达方面发挥重要作用.研究结果揭示了高盐和低盐胁迫对大黄鱼能量代谢与线粒体自噬的影响差异及其初步机制,可为大黄鱼养殖水体的盐度调节方案制定及养殖水域选择提供基础资料.

目的 探讨宫腔粘连患者宫腔镜手术联合激素治疗后子宫内膜厚度和相关因子表达情况变化.方法 选取2020 年 1 月至 12 月湖南省株洲市妇幼保健院收治的 100 例中重度宫腔粘连患者作为研究对象.所有患者在宫腔镜下粘连分离术后给予人工周期治疗.连续治疗 3 个月.统计治疗前、治疗3 个月后经量改善情况及子宫内膜形态变化,统计治疗前、治疗 3 个月后血清及宫腔粘连组织周围的内膜中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(HAb18G)、转录调节因子叉头框F2(FoxF2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、雌激素受体(ER)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平变化.结果 与治疗前比较,治疗 3 个月后,患者月经量、子宫内膜腺体数增多,子宫内膜厚度增厚,子宫内膜纤维化面积比、血清及宫腔粘连组织周围的内膜中HAb18G、FoxF2、TGF-β1、CTGF、VEGF及IGF-1 表达降低,ER升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 宫腔粘连患者子宫内膜状态及月经量异常,伴有子宫内膜纤维化的发生,而宫腔粘连的发生发展可能与HAb18G、FoxF2、ER、TGF-β1、CTGF、VEGF及IGF-1 的异常表达有关,临床可据此对宫腔粘连进行早期预测及预防,并评估其临床治疗效果.

目的:研究特异性siRNA沉默转录因子叉头框M1 (forkhead box M1,FOXM1)基因表达对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响,并探讨其相关的分子机制.方法:将特异性靶向FOXM1基因的siRNA(FOXM1-siRNA)转染至鼻咽癌5-8F细胞后,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测FOXM1基因表达沉默效果.然后采用MTT法、FCM法、Annexin V-FITC/PI双染法和蛋白质印迹法分别检测OXM1基因表达沉默后鼻咽癌细胞增殖、周期分布、凋亡和紫杉醇敏感性的变化,以及相关蛋白的表达.结果:FOXM1-siRNA转染后5-8F细胞中FOXM1 mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P值均＜ 0.01).FOXM1基因表达沉默后,5-8F细胞的增殖活性明显降低(P＜0.05),增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达水平明显降低(P＜0.01);同时,G1期细胞所占比例明显升高(P＜0.01),S期细胞所占比例降低(P＜0.05),CyclinD1表达下调(P＜0.01);细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),Bcl-2表达下调(P＜0.01),Bax表达上调(P＜0.01);细胞对紫杉醇的敏感性明显增强(P＜0.01),多药耐药相关蛋白1 (multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)表达水平降低(P＜0.01).结论:特异性siRNA沉默FOXM1基因表达可抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并提高细胞对紫杉醇的敏感性;其机制可能与下调PCNA、Cyclin D1、MRP1和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关.

目的 观察Krüppel样因子4(KLF4)对转化生长因子(TGF)-β1诱导的入骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的影响.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测TGF-β1诱导BMSCs 7d和14d对KLF4 mRNA和蛋白表达的影响;建立KLF4过表达BMSC细胞株,用TGF-β1诱导7d或14 d,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,Real-timePCR和Western blot分析髓核细胞相关蛋白聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白α1链(Col2A1)、性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、角蛋白19(KRT19)和叉头蛋白(FOXF1)表达.结果 与对照组比较,TGF-β1诱导后KLF4 mRNA和蛋白表达均显著降低(第7天mRNA:0.653 ±0.083比1.027 ±0.068,t =6.012,P ＜0.01;第14天mRNA:0.453 ±0.065比1.063 ±0.096,t =9.105,P＜0.01;第7天蛋白,0.601 ±0.112比0.873 ±0.051,t =3.874,P ＜0.05;第14天蛋白:0.251 ±0.087比0.893 ±0.078,t =9.543,P ＜0.01),细胞增殖增加(第7天,166.355±11.132比99.647±6.220,t =9.064,P ＜0.01;第14天:195.333±10.512比124.667±9.609,t=8.598,P ＜0.01),Aggrecan、Col2A1 、SOX9 、KRT19 、FOXF1 mRNA (Aggrecan:2.600 ±0.255比1.017 ±0.095,t=10.07,P ＜0.01;Col2A1:3.441 ±0.259比1.010 ±0.076,t=15.58,P ＜0.01;SOX9:2.767 ±0.139比1.033 ±0.111,t=16.92,P＜0.01;KRT19:3.710±0.210比1.005±0.076,t 20.95,P＜0.01;FOXF1:2.783±0.174比1.035 ±0.132,t=13.88,P ＜0.01)和蛋白(Aggrecan:0.760±0.072比0.233 ±0.055,t=10.05,P ＜0.01;Col2A1:0.941 ±0.046比0.190 ±0.040,t =21.36,P ＜0.01;SOX9:1.237 ±0.140比0.317 ±0.065,t=10.31,P＜0.01;KRT19:0.897 ±0.072比0.137 ±0.051,t=14.84,P＜ 0.01;FOXF1:1.033 ±0.191比0.181 ±0.056,t=7.434,P ＜0.01)表达升高.与TGF-β1单独处理比较,过表达KLF4抑制了细胞增殖(第7天:125.750±10.386比166.355±11.132,t =4.620,P＜0.05;第14天:148.526±13.449比195.333±10.512,t=4.702,P＜0.01),降低了Aggrecan、Col2A1、SOX9、KRT19、FOXF1 mRNA (Aggrecan:1.510 ±0.187比2.600 ±0.255,t=5.970,P ＜0.01;Col2A1:1.727±0.254比3.441±0.259,t=8.176,P＜ 0.01:SOX9:1.493 ±0.169比2.767 ±0.139,t10.08,P ＜0.01;KRT19:2.117 ±0.387比3.710 ±0.210,t=6.273,P ＜0.01;FOXF1:1.550 ±0.125比2.783 ±0.174,t =9.978,P ＜0.01)和蛋白(Aggrecan:0.423 ±0.093比0.760 ±0.072,t =4.958,P ＜0.01;Col2A1:0.490 ±0.079比0.941±0.046,t=8.504,P＜0.01;SO X9:0.560±0.096比1.237±0.140,t =6.890,P ＜0.01;KRT19:0.375±0.047比0.897±0.072,t=10.49,P ＜0.01;FOXF1:0.537±0.097比1.033 ±0.191,t =4.017,P ＜0.05)表达.结论 KLF4过表达可抑制BMSC细胞增殖和向髓核样细胞分化.

目的:探讨慢病毒介导叉头框转录因子F2(FoxF2)过表达对子宫内膜癌RL95-2细胞增殖与迁移的影响.方法:将体外培养的RL95-2细胞随机分为3组:Con-trol、Lv-NC组和Lv-expFoxF2组.分别采用FoxF2过表达的慢病毒颗粒(Lv-expFoxF2组)和空载体对照慢病毒颗粒(Lv-NC组)感染RL95-2细胞,检测各组细胞FoxF2的mRNA和蛋白表达水平和各组细胞的增殖活性、细胞周期及体外迁移能力.结果:与Control组比较,Lv-expFoxF2组RL95-2细胞中FoxF2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.001).与Control组比较,Lv-expFoxF2组的细胞存活率显著降低(P<0.05),G0/G1期细胞百分比明显增加,S期细胞百分比明显减少(P<0.05),体外迁移细胞数显著降低(P<0.05).结论:慢病毒介导的FoxF2过表达可抑制子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖和迁移,诱导细胞发生G0/G1期阻滞.

目的 探讨在呼吸道合胞病毒(RSV)感染人支气管上皮(HBE)细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-叉头转录因子A2(forkhead transcription factor A2,FOXA2)通路参与黏液分泌的机制,以及过氧化物酶增殖激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮、拮抗剂(GW9662)和EGFR抑制剂(AG1478)对该通路的干预作用.方法 建立HBE细胞RSV体外感染模型,随机分成6组:A组(AG1478+RSV)、B组(罗格列酮+RSV)、C组(GW9662+RSV)、D组(RSV)、E组(0.1％DMSO+HBE细胞)、F组(HBE细胞对照).RSV感染HBE细胞造模前2 h,A、B、C组分别予10μmol/L的AG1478、罗格列酮、GW9662预处理.A～D组以RSV感染吸附HBE细胞2 h后加维持液继续培养,各组分别培养至12 h、24 h、48 h收获细胞及上清液.应用RT-PCR检测各组EGFR、PPARγ、FOXA2 mRNA表达情况,Western blot检测p-EGFR及EGFR蛋白水平,ELISA检测上清液中黏蛋白5AC(MUC5AC)水平.结果 与F组相比,3个时间点A、B、C、D组的EGFR mRNA、p-EGFR/EGFR蛋白比值、MUC5AC蛋白表达量均明显增加,随时间增加表达量增加,在48 h达到最高;PPARγmRNA均有所增加,其中A和B组表达量随时间逐渐增加,于48 h达到高峰,但D组逐渐减少;FOXA2 mRNA均有降低,其中D组表达量最低.与D组相比,A组和B组EGFR mRNA、p-EGFR/EGFR蛋白比值、MUC5AC蛋白表达量明显降低,FOXA2 mRNA明显升高.结论 RSV感染导致MUC5AC蛋白表达增加,PPARγ和EGFR-FOXA2信号通路参与RSV感染后气道黏液高分泌过程.

目的 探讨叉头框转录因子F2(FoxF2)对小梁网细胞外基质表达的调控作用. 方法 将培养人眼小梁网细胞(HTMCs)分为Scramble对照组和FoxF2小发夹RNA(shRNA)组,构建FoxF2重组干扰载体FoxF2 shRNA,应用FoxF2 shRNA慢病毒颗粒感染HTMCs,采用Western blot法检测FoxF2 shRNA的敲低效果及细胞外基质(ECM)蛋白的表达变化,利用Transwell计数实验分析HTMCs的迁移能力. 结果 体外培养的HTMCs呈长梭形,生长状态良好,形态符合HTMCs形态学特征.FoxF2 shRNA组FoxF2蛋白相对表达量为0.72±0.02,显著低于Scramble对照组的1.27±0.05,差异有统计学意义(t=16.68,P＜0.01).FoxF2shRNA组纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达量分别为0.43±0.03、0.53±0.08和0.86±0.15,显著低于Scramble对照组的0.87±0.04、1.66±0.06和1.73±0.13,差异均有统计学意义(t=15.08、18.81、7.50,均P＜0.01).FoxF2 shRNA组HTMCs的迁移数量为117.30±11.41,显著低于Scramble对照组的251.00±10.37,差异有统计学意义(t=8.72,P＜0.01).结论 成功制备可特异性敲低HTMCs内源性FoxF2表达的FoxF2 shRNA病毒,并证实FoxF2干扰对HTMCs中ECM的表达及细胞迁移具有抑制作用.

目的 研究甲状腺转录因子-1 (NKX2-1)和叉头框蛋白A2 (FOXA2)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及临床意义,为EOC的早期诊断和预后评估提供参考.方法 选取2011年1月-2013年1月在长治医学院附属和济医院行手术切除的56例EOC患者和42例良性卵巢肿瘤患者为研究对象,术中分别切取EOC患者的癌变组织(卵巢癌组)及癌旁正常组织(癌旁组织组),切取良性卵巢肿瘤患者的良性卵巢上皮组织(良性组),在液氮中速冻后超低温保存.检测各组织中NKX2-1和FOXA2 mRNA及蛋白表达量,分析癌变组织中NKX2-1和FOXA2表达量与临床病理特征及预后的关系.结果 卵巢癌组NKX2-1 mRNA相对表达量及蛋白阳性表达率均显著高于良性组和癌旁组织组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),FOXA2mRNA相对表达量及蛋白阳性表达率均显著低于良性组和癌旁组织组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);良性组和癌旁组织组NKX2-1、FOXA2 mRNA相对表达量及蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).EOC组织中NKX2-1和FOXA2呈负相关关系(r=-0.682,P=0.000).EOC组织中NKX2-1与肿瘤大小、组织分化程度、F1GO分期有关(P＜0.05),FOXA2与组织分化程度和FIGO分期有关(P＜0.05);其中NKX2-1阳性表达患者5年死亡率显著高于阴性表达患者(P＜0.05),FOXA2阳性表达患者5年死亡率显著低于阴性表达患者(P＜0.05).COX回归分析结果表明,FIGO分期、NKX2-1阳性表达和FOXA2阴性表达是影响EOC患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 EOC组织中NKX2-1表达上调、FOXA2表达下调,与组织分化程度、FIGO分期和患者5年死亡率密切相关,可作为EOC预后预测的生物学指标.