细支气管腺瘤（bronchiolar adenomas）是新近报道的一种肺部肿瘤，该文报道1例55岁女性病例，左肺下叶单发病灶，界不清；镜下观察肿瘤由平滑的双层支气管型上皮发生结节状增生变化，包括连续的基底细胞层，有乳头状结构，含有黏液细胞、纤毛细胞，肿瘤以完全贴壁生长的方式生长。免疫表型：血管内皮细胞（CD34）、肌上皮（p40/p63）、细胞角蛋白（CK）7、甲状腺转录因子1（TTF1）、CK5/6均阳性，Napsin A部分阳性，Ki-67阳性指数2%~3%；SP-A、S-100蛋白阴性。细支气管腺瘤具有一定的组织学特征，诊断主要依靠病理形态学及免疫组织化学标记。

目的:研究不同浓度锌离子喂养孕鼠对其子代胚胎腭突融合期细胞增殖和细胞凋亡的影响，进一步筛选参与该过程的腭突组织之间锌指蛋白Sp家族相关差异候选基因，探索锌在腭裂发生过程中的作用机制。方法:C57BL/6J雌雄小鼠合笼，将144只孕鼠按随机数字表法分为4组，每组36只，按饲料的锌离子浓度不进行喂养，常锌组含锌30 mg/kg、缺锌组为Flanagan缺锌饲料（0 mg/kg）、低锌组含锌5 mg/kg、富锌组含锌100 mg/kg。HE染色观察ED14.5、ED16.5胎鼠腭部发育状况和形态学变化，PCNA染色观察ED14.5胎鼠腭胚突融合期细胞增殖情况，TUNEL染色观察ED14.5胎鼠腭胚突融合期细胞凋亡情况；通过mRNA表达谱芯片杂交技术，收集富锌组、常锌组、缺锌组腭突组织基因表达情况并相互比较组间差异表达，采用2倍表达差异倍数对差异基因进行筛选并分析锌指蛋白Sp家族基因表达是否有差异，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证差异表达基因。结果:ED14.5时，常锌组、富锌组、低锌组和缺锌组的腭裂发生率分别为8%（3/36）、2%（1/39）、29%（12/41）和39%（15/38）。ED14.5时的HE染色结果显示，常锌组左右腭突均已上抬，相互接触、贯通；缺锌组左右侧腭突仍位于舌体两侧垂直向下最终形成腭裂；低锌组左右侧腭突上抬但并未接触，最终形成腭裂；富锌组与常锌组无明显差异。ED14.5时，常锌组和富锌组的胎鼠腭突增殖细胞阳性率（80.29%±7.39%和87.69%±6.62%）均显著高于缺锌组（56.05%±16.13%）和低锌组（56.22%±9.61%）（ t=4.32， P<0.05）；缺锌组和低锌组胎鼠腭突细胞凋亡指数（38.80%±3.10%和28.80%±6.19%）均显著高于常锌组（16.80%±1.82%）（ t=19.35， P<0.001； t=5.81， P<0.001）。富锌组与缺锌组的2倍差异表达基因为663个，其中表达上调基因为513个，表达下调基因150个，并发现Sp5位于其中。qRT-PCR结果显示，与常锌组（2.22±0.36）相比，缺锌组的腭突组织中Sp5mRNA的表达水平（1.23±0.38）显著升高，富锌组（3.68±0.90）显著降低（ P<0.05）。 结论:母鼠孕期缺锌可抑制胚胎腭突间充质细胞增殖，促进细胞凋亡，致使腭突形态变异，上抬动力减弱，且使腭中缝上皮细胞持续存在，最终形成腭裂。缺锌可致子代胚胎融合期Sp5表达升高，富锌对可致子代胚胎融合期Sp5表达下降，推测Sp5在调控缺锌导致腭裂腭突融合的过程中起负性调节作用。

目的:探讨氟暴露对小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法:自C57BL/6小鼠（6 ~ 8周）股骨分离、培养得到BMSCs，取第3代细胞采用流式细胞术分析干细胞表面标志物。用氟终浓度分别为0.0、0.1、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0 mg/L的培养基培养BMSCs，检测不同浓度氟对BMSCs细胞增殖（CCK8法）、凋亡（流式细胞术分析）、成骨分化能力[茜素红及碱性磷酸酶（ALP）染色]的影响；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白[聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）]、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路成员蛋白[细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2），c-Jun氨基末端激酶（JNK），p38及磷酸化ERK、JNK、p38（p-ERK、p-JNK、p-p38）]，成骨分化相关蛋白[Runt相关转录因子2（Runx2）、ALP]与Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路成员蛋白[糖原合成酶激酶-3β（GSK3β）、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）及β-catenin]的表达水平；并采用免疫荧光染色分析p-GSK3β及β-catenin的表达情况；使用SP600125及DKK-1分别阻断MAPK和Wnt/β-catenin 2个信号通路后，分析细胞凋亡及成骨分化等的变化。结果:成功分离、培养出小鼠BMSCs，流式细胞术分析显示，间充质干细胞表面标志分子CD73、CD90、CD105均呈阳性。各浓度组3个时间点（24、48、72 h）细胞增殖情况比较差异均有统计学意义（ F = 65.36、160.04、365.32， P均< 0.001），各浓度组细胞早期凋亡情况（24 h）比较差异有统计学意义（ F = 214.04， P < 0.001）；与0.0 mg/L氟浓度组比较，15.0、20.0、40.0 mg/L氟浓度组细胞增殖水平均降低，10.0、15.0、20.0 mg/L氟浓度组细胞早期凋亡率均增高（ P均< 0.05）。15.0 mg/L氟处理细胞0 ~ 24 h，p-JNK/JNK比例在2、4、8、12、18、24 h时间点均高于0 min（ P均< 0.05）；与单独氟处理组（15.0 mg/L）比较，SP600125阻断后细胞早期凋亡率降低（ P < 0.05），PARP及p-JNK蛋白表达水平均降低（ P均< 0.05）。成骨诱导后，与0.0 mg/L氟浓度组比较，0.1、1.0 mg/L氟浓度组ALP染色增强、矿化结节数量增多；且0.1、1.0 mg/L氟浓度组Runx2及ALP蛋白表达水平均较高（ P均< 0.05）。成骨诱导后，与0.0 mg/L氟浓度组比较，0.1、1.0 mg/L氟浓度组p-GSK3β/GSK3β比例及β-catenin蛋白表达水平均较高（ P均< 0.05）；与单独氟处理组（1.0 mg/L）比较，DKK-1阻断后p-GSK3β及β-catenin蛋白表达水平均较低（ P均< 0.05），β-catenin入核减少，ALP染色减弱，矿化结节数目减少。 结论:高浓度氟（> 10.0 mg/L）抑制BMSCs增殖、促进凋亡，而低浓度氟（0.1、1.0 mg/L）促进细胞成骨分化。MAPK/JNK通路与Wnt经典通路分别参与了上述细胞过程。

目的:探讨红景天苷(salidroside，SAL)是否通过介导Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路改善重症肺炎(severe pneumonia，SP)大鼠肺组织损伤。方法:Wistar大鼠75只，随机选择15只作为假手术组，其余60只通过气管内滴注肺炎克雷伯菌( Klebsiella pneumoniae， Kp)悬液诱导构建SP大鼠模型。建模成功大鼠随机分为模型组、SAL低剂量组(30 mg/kg)、SAL高剂量组(60 mg/kg)和地塞米松(dexamethasone, DXMS)组(15 mg/kg)，每组15只，假手术组和模型组均灌服等量生理盐水，连续7 d。检测肺组织湿干重比(Wet/Dry，W/D)；HE和TUNEL染色观察各组大鼠肺脏组织形态及细胞凋亡情况；ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及IL-10水平；Western blot检测肺组织中TLR4、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88，MyD88)、NF-κBp65、磷酸化NF-κBp65(phosphorylated NF-κBp65，p-NF-κBp65)、NLRP3蛋白相对表达水平。 结果:经气管滴注 Kp悬液成功构建SP大鼠模型；与假手术组比较，模型组大鼠肺组织水肿严重，W/D值升高( P<0.05)，肺泡结构松散不完整，肺泡壁水肿增厚，大量炎性细胞浸润，细胞凋亡率升高，BALF中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-18水平升高，IL-10水平降低，肺组织中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-NF-κBp65及NLRP3蛋白相对表达水平升高( P<0.05)；与模型组比较，SAL低、高剂量组及DXMS组大鼠肺组织病理损伤情况均逐渐改善，W/D值降低( P<0.05)，肺泡结构逐渐完整，肺泡壁水肿程度逐渐减轻，细胞凋亡率降低，BALF中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-18水平降低，IL-10水平升高，肺组织中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-NF-κBp65及NLRP3蛋白相对表达水平降低( P<0.05)；低、高剂量SAL及DXMS改善SP大鼠肺组织损伤的作用效果表现为逐渐增强( P<0.05)。 结论:SAL可减少细胞凋亡，改善由 Kp诱导的大鼠肺组织病理损伤，其作用机制可能与阻断TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活，抑制炎性因子表达有关。

目的:评价异丙酚对小鼠神经干细胞增殖的影响及转录因子特异性蛋白1(Sp1)-表皮生长因子受体(EGFR)-蛋白激酶B(Akt)信号通路在其中的作用。方法:分离和培养C57BL/6小鼠原代神经干细胞，稳定传代后使用免疫荧光染色鉴定。取第3~6代神经干细胞，采用随机数字表法分为3组( n＝21)：生理盐水对照组(C组)、异丙酚组(P组)和异丙酚+Sp1抑制剂光神霉素组(PP组)。P组加入终浓度10 μmol/L异丙酚，PP组加入终浓度10 μmol/L异丙酚、终浓度100 nmol/L光神霉素，C组加入等容量生理盐水，孵育6 h后更换培养基，继续培养。于药物处理结束后24、36、48、60和72 h时使用细胞计数法观察神经干细胞增殖情况；于药物处理结束后6 h时，采用实时荧光定量PCR法检测Sp1 mRNA和EGFR mRNA的表达，采用Western blot法检测EGFR、Sp1和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。 结果:与C组比较，P组药物处理结束后48、60和72 h时神经干细胞计数增多，EGFR及其mRNA、Sp1及其mRNA和p-Akt表达上调( P<0.05或0.01)，PP组各指标差异无统计学意义( P>0.05)。与P组比较，PP组药物处理结束后48和60 h时神经干细胞计数减少，EGFR及其mRNA、p-Akt表达下调( P<0.05或0.01)。 结论:异丙酚可促进小鼠神经干细胞增殖，机制可能与激活Sp1-EGFR-Akt信号通路有关。

目的:探索高原性肺高血压（HAPH）患者外周血单个核细胞基因表达特征，挖掘可能的发病机制和潜在的治疗药物。方法:本研究为现况性病例对照研究，从世居云南省丽江市的纳西人群中，采用超声心动图筛选出6例HAPH受试者及4例正常对照，作为HAPH组和对照组。收集两组受试者的一般临床资料并采集肺动脉压力相关指标。采集受试者的外周血单个核细胞进行RNA测序，对比两组间基因表达差异，进行富集分析、转录因子基因表达调控网络构建及药物相似性分析；并与特发性肺高血压（IPAH）公共数据进行对比、分析两种亚型的疾病在生物学过程及信号通路上的相似性。结果:6例HAPH患者年龄（68.1±8.3）岁，男性2例（2/6）；4例对照组受试者年龄（62.3±10.9）岁，男性2例（2/4）。HAPH组三尖瓣反流速度、三尖瓣压力梯度及肺动脉收缩压较对照组明显升高（ P<0.05）。RNA测序结果示，与对照组相比，HAPH组外周血单个核细胞中显著高表达基因有174个，显著低表达基因有169个，这些差异表达的基因与220个生物学过程、52个分子功能和23个细胞组分相关。筛选到HAPH与IPAH共同的生物学过程21个、信号通路2条，多数与炎症和免疫反应相关。经转录因子基因表达调控网络构建筛选到ZNF384、SP1、STAT3等与HAPH高相关性的转录因子。药物相似性分析筛选出了曲古菌素A和伏立诺他两种潜在的治疗HAPH的药物。 结论:HAPH患者与正常人群外周血单核细胞基因表达上存在较大的差异，炎症和免疫功能紊乱是主要致病因素。曲古菌素A和伏立诺他是治疗HAPH的潜在药物。

目的:探讨在肺泡上皮细胞模型中甲型H1N1流感病毒（H1N1病毒）诱导低氧诱导因子-1α（HIF-1α）核转位的分子机制。方法:体外培养人肺腺癌上皮细胞（A549细胞），选取对数生长期细胞用于实验。①实验1：采用感染复数（MOI）1.0的H1N1病毒感染细胞24 h，建立H1N1病毒感染的A549细胞模型（H1N1病毒感染组）；并设立空白对照组。采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞中核转运受体蛋白（Importin 4、Importin 7）表达，探讨HIF-1α核转位是否依赖Importin 4、Importin 7。②实验2：采用不同MOI（0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0）的H1N1病毒感染细胞24 h；采用MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞0、3、6、12、18、24、36 h。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中胞裂蛋白9基因变异剪接体1（SEPT9_i1）mRNA表达，探讨不同MOI和感染时间对SEPT9_i1表达的影响。③实验3：采用小干扰RNA（siRNA）转染细胞24 h抑制SEPT9_i1，建立沉默SEPT9_i1的A549细胞模型（siRNA-SEPT9_i1组）；并设立空白对照组和空白载体对照组（siControl组）。3组细胞转染24 h后均给予MOI 1.0的H1N1病毒感染24 h，采用实时荧光定量RT-PCR检测细胞中SEPT9_i1 mRNA表达，以探讨siRNA对SEPT9_i1的干扰效率。④实验4：将细胞分为siControl组和siRNA-SEPT9_i1组，两组细胞转染方法同实验3。转染24 h后，两组均以MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞，于24 h采用免疫荧光法观察细胞中HIF-1α核内外分布情况；于6、12、24、36、48 h采用实时荧光定量RT-PCR检测病毒M基因表达，以明确SEPT9_i1对HIF-1α核转位和病毒复制的影响。⑤实验5：将细胞分为空白对照组（完全培养基）、SP600125组〔100 μmol/L的c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路抑制剂SP600125处理细胞2 h〕、H1N1病毒感染组（MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞24 h）和H1N1病毒+ SP600125组（100 μmol/L的SP600125预处理2 h后，再加入MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞24 h）。采用实时荧光定量RT-PCR检测细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达，探讨JNK信号通路对SEPT9_i1表达及病毒复制的影响。结果:①实验1：与空白对照组相比，H1N1病毒感染组A549细胞中Importin 4和Importin 7蛋白表达差异均无统计学意义〔Importin 4蛋白（Importin 4/GAPDH）：1.08±0.03比1.05±0.03，Importin 7蛋白（Importin 7/GAPDH）：0.87±0.11比0.78±0.03，均 P>0.05〕。说明H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位可能不依赖Importin 4和Importin 7。②实验2：A549细胞中SEPT9_i1 mRNA表达随H1N1病毒MOI增加及感染时间延长呈升高趋势，分别于MOI 2.0和感染18 h达峰值，与MOI为0或感染0 h比较差异均有统计学意义（2 -ΔΔCT：MOI 2.0为1.39±0.05比1.00±0.00，18 h为1.47±0.04比1.00±0.00，均 P<0.01）。说明H1N1病毒感染A549细胞中SEPT9_i1表达与病毒MOI及感染时间相关。③实验3：与空白对照组比较，siRNA-SEPT9_i1组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA表达明显下调（2 -ΔΔCT：0.38±0.11比1.00±0.00， P<0.01），而siControl组与空白对照组比较差异无统计学意义（2 -ΔΔCT：1.03±0.16比1.00±0.00， P>0.05）。说明沉默SEPT9_i1可抑制H1N1病毒感染A549细胞中SEPT9_i1表达。④实验4：siRNA-SEPT9_i1组H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位较siControl组明显减少。siControl组感染H1N1病毒后细胞中病毒M基因表达逐渐升高，48 h达峰值；siRNA-SEPT9_i1组A549细胞中病毒M基因表达明显下调，48 h与siControl组比较差异有统计学意义（2 -ΔΔCT：3.47±0.66比8.17±0.38， P<0.05）。说明沉默SEPT9_i1后可以抑制H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位和病毒复制。⑤实验5：H1N1病毒感染组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达较空白对照组明显升高；而H1N1病毒+ SP600125组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达均明显低于H1N1病毒感染组（2 -ΔΔCT：SEPT9_i1 mRNA为0.12±0.10比1.53±0.14，病毒M基因为2.13±0.10比4.66±0.14，均 P<0.05）；SP600125组上述指标与空白对照组比较差异均无统计学意义。说明H1N1病毒感染A549细胞中JNK信号通路可以调控SEPT9_i1的表达，而抑制JNK信号通路可以下调SEPT9_i1的表达及抑制病毒复制。 结论:H1N1病毒通过激活JNK信号通路调控SEPT9_i1的表达，从而提高HIF-1α转运效率以及促进病毒复制。

目的:探讨卵泡抑素样蛋白1(follistatin-like 1，FSTL1)对先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia，CDH)大鼠模型中肺泡上皮细胞分化的影响及意义。方法:选取成年SPF级SD大鼠15只，10只受孕后按随机数字表法分为模型组(6只)及空白组(4只)。应用除草醚建立CDH大鼠模型，模型组中解剖发现膈疝的胎鼠定为CDH组，空白组中解剖未发现膈疝的胎鼠定为对照组。取CDH组及对照组左肺进行研究。通过HE染色比较两组肺组织形态学差异；应用免疫组织化学、蛋白质印迹法及qRT-PCR检测FSTL1、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1，TTF1)及水通道蛋白5(aquaporin 5，AQP5)在两组肺组织中的表达变化；应用蛋白质印迹法检测两组肺组织中表面活性蛋白B(surfactant protein B，SP-B)和表面活性蛋白C(surfactant protein C，SP-C)及其前体蛋白的表达水平。两组均数的比较采用独立样本 t检验。 结果:成功建立CDH大鼠模型，获得CDH胎鼠21只。CDH组辐射状肺泡计数低于对照组[(2.88±0.19)比(5.68±0.24)， P<0.001]；免疫组织化学检测显示FSTL1、TTF1、AQP5在两组肺组织中均有表达，且在不同组别肺组织中表达强度不同。CDH组中FSTL1的mRNA及蛋白表达[(0.555 0±0.046 2)和(0.694 9±0.025 0)]低于对照组[(1.009 2±0.163 6)和(1.006 2±0.106 7)]，差异有统计学意义( P<0.05)。CDH组中AQP5的mRNA及蛋白表达[(0.552 4±0.147 4)和(0.489 2±0.140 7)]低于对照组[(1.010 3±0.182 2)和(0.835 2±0.114 9)]，差异有统计学意义( P<0.05)。相反，CDH组中TTF1的mRNA及蛋白表达[(2.807 3±0.571 0)和(0.738 9±0.066 0)]高于对照组[(1.017 2±0.222 5)和(0.327 8±0.035 3)]，差异有统计学意义( P<0.05)。此外，CDH组中表面活性物质前体蛋白Pro-SP-B及Pro-SP-C的表达[(1.157 0±0.135 4)和(0.958 8±0.024 9)]较对照组[(0.911 3±0.034 9)和(0.499 9±0.067 2)]增高，而SP-B及SP-C的表达[(0.458 7±0.026 4)和(0.134 4±0.065 8)]较对照组[(0.711 2±0.066 8)和(0.329 6±0.029 6)]降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:FSTL1可能通过影响肺泡上皮细胞分化及表面活性蛋白的成熟而参与CDH肺发育不良的过程。

目的:探究E2F2基因在子宫内膜癌中的表达及与生物学行为的相关性。方法:选择2015年3月至2018年4月本院妇科获取的30例正常子宫内膜标本、25例子宫内膜增生标本及73例子宫内膜癌组织纳入研究。采用RT-PCR及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法测定3种组织E2F2 mRNA表达情况，并分析子宫内膜癌组织E2F2蛋白表达与临床病理参数之间的关系。结果:子宫内膜癌组织E2F2 mRNA表达量高于子宫内膜增生组织及正常子宫内膜组织，差异有统计学意义( P<0.05)；正常子宫内膜、子宫内膜增生及子宫内膜癌组织E2F2蛋白阳性表达率分别为10.00%、16.00%及52.05%，组间比较差异有统计学意义( P<0.05)；国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ～Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移及肌层浸润≥1/2的子宫内膜癌患者E2F2蛋白阳性表达程度显著高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移及肌层浸润<1/2的患者( P<0.05)。 结论:子宫内膜癌组织E2F2表达上调，其表达程度与患者FIGO分期、分化程度、淋巴结转移及肌层浸润相关。

目的:探讨可诱导神经生长因子(VGF)过表达在进展期前列腺癌(PCa)患者组织中的作用及其可能的分子生物学机制。方法:应用肿瘤基因组图谱(TCGA)和GEO数据库下载PCa中VGF芯片数据进行分析；根据不同的临床病理参数评估VGF在PCa患者中的表达和甲基化水平；TCGA和GSE21032数据库下载VGF芯片数据并用Kaplan-Meier生存曲线分析其与PCa患者生存期的相关性；应用David及京都基金及基因组百科全书(KEGG)通路富集分析VGF在PCa中的作用机制，并用String系统构建PPI网络，应用Mcode plugin分析识别关键模块；PROMO系统预测VGF的潜在转录因子并进行回归分析。采用 t检验。 结果:分析发现VGF mRNA在PCa中的表达上调，在GSE55945数据库中，PCa与正常组织中VGF相对表达水平分别为29.8、24.5 ( t＝7.612， P<0.05)，TCGA数据库中PCa与正常组织中VGF相对表达水平分别为25.5、15.6( t＝4.712， P<0.05)，而且VGF表达与其甲基化水平呈显著负相关；VGF在晚期PCa中明显高表达，其甲基化水平在晚期PCa中明显降低；分析显示VGF低表达PCa患者无进展生存期明显延长，VGF低甲基化患者无进展生存期明显缩短；分析显示VGF在PCa中通过GnRH、RIG-I样受体和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等多种途径发挥调控作用；回归分析显示SP1、MAZ、NR3C1和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)是PCa中VGF表达的调节因子。 结论:VGF在PCa组织中高表达且表达强度与PCa进展明显相关。