目的:了解河南省漯河市2017—2022年急性呼吸道感染（ARIs）病例中鼻病毒（RV）的感染状况及其分子型别组成。方法:于2017年10月至2022年6月，收集河南省漯河市中心医院2 270例ARIs病例的临床和流行病学资料，并采集病例咽拭子标本，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）筛选RV阳性标本，随后对阳性标本使用巢式逆转录聚合酶链式反应（nested RT-PCR）扩增VP1区全长，并使用MEGA软件结合国际病毒分类委员会推荐的169条RV参考株序列构建系统进化树以确定RV分型。结果:2 270例ARIs病例中，男性病例1 283例（56.52%）；年龄 M（ Q 1， Q 3）为3（1，6）岁，5岁以下人群占68.59%（1 557/2 270）；137例病例（6.04%）检出RV，其中68例病例（49.64%）与其他病毒合并检出，与肠道病毒的合并检出最常见，占14.60%（20/137）。0~4岁、5~14岁、15~59岁和≥60岁年龄组中RV检出率分别为6.42%（100/1 557）、4.69%（21/448）、3.80%（6/158）和9.35%（10/107），差异无统计学意义（ χ2=5.310， P=0.150）。新型冠状病毒感染疫情前（2017—2019年）和期间（2020—2022年），RV总体检出率差异无统计学意义（ χ2=1.823， P=0.177）。共获得109条VP1序列，包含62个型别，其中RV-A、RV-B和RV-C三个种分别检出42、3和17个型别。 结论:RV为2017—2022年河南省漯河市ARIs病例中主要流行的病原体之一，存在多个RV型别共流行，无明显优势型别。

患者，女，30岁，因"双眼前暗点1周"于2022年12月26日来长沙爱尔眼科医院就诊。患者发病前1周有新冠病毒感染病史，出现发热、咳嗽等症状，SARS-CoV-2逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测结果呈阳性。裸眼视力：右眼0.1，左眼0.1；最佳矫正视力：右眼0.8，左眼0.3。双眼前节正常，瞳孔对光反射正常，眼压：右眼16 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），左眼15 mmHg。双眼黄斑彩色眼底照片示黄斑区暗红色病变和不规则斑点（图1）。双眼电脑视野检查显示右眼旁中心暗点，左眼生理盲点扩大（图2）。近红外图像显示黄斑区中心凹周围花瓣状病变（图3A和3C）。频域光学相干断层扫描（Spectral-domain optical coherence tomography，SD-OCT）显示外核层和外丛状层有1个高反射的局限性病灶（图3B和3D）。光学相干断层扫描血管成像（Optical coherence tomography angiography，OCTA）扫描显示双眼黄斑区视网膜深层毛细血管密度降低（图4）。双眼视觉诱发电位（VEP）显示P100波在1度大正方形的反应时间延迟，P100波在0.25度小正方形的反应时间正常；双眼P100波振幅下降，尤其是在左眼。根据病史和眼部检查评估，患者诊断为：急性黄斑区神经视网膜病变（Acute macular neuroretinopathy，AMN），严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型感染。给予七叶洋地黄双苷滴眼液滴双眼，3次/d；甲钴胺胶囊，0.5 mg，3次/d；和血明目片，1.55 g，3次/d等治疗。治疗1个月后患者症状消失，眼底恢复正常，OCT扫描显示黄斑区结构恢复正常。

目的:探讨胶质瘤组织中调节性T细胞(regulatory T cells，Tregs)、辅助性T细胞(helper T cell, Th)17及其细胞因子与病理特征的相关性。方法:收集2014年1月至2019年1月重庆市急救医疗中心收治的脑胶质瘤患者100例，术中获取脑胶质瘤组织和癌旁组织，采用免疫荧光染色及逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测组织中Tregs、Th17细胞、白细胞介素(interleukin, IL)-10、IL-17表达量，Pearson线性相关性分析Tregs、Th17细胞、IL-10、IL-17与脑胶质瘤患者病理特征的相关性。结果:脑胶质瘤组织中Tregs和IL-10 mRNA较癌旁组织显著增加，Th17细胞和IL-17 mRNA较癌旁组织显著减少，差异具有统计学意义[(9.45±3.28) ×10 6个比(5.73±2.26)×10 6个，(0.73±0.23)比(0.53±0.26)，(8.47±3.08)×10 6个比(10.75±2.91)×10 6个，(0.78±0.12)比(0.91±0.17)， t值分别为9.34，5.38，5.76和6.25， P值均<0.05)]。Pearson线性相关性分析显示Tregs、Th17细胞、IL-10、IL-17 mRNA与年龄无明显相关性( P>0.05)。男性与女性脑胶质瘤患者中Tregs、Th17细胞、IL-10、IL-17 mRNA表达量比较均无显著差异( P>0.05)。与世界卫生组织(World Health Organization，WHO)Ⅰ-Ⅱ级的脑胶质瘤患者比较，WHO Ⅲ-Ⅳ级的脑胶质瘤患者Tregs和IL-10 mRNA显著增高，而Th17细胞和IL-17 mRNA显著降低，差异具有统计学意义[(9.09±1.87)×10 6个比(9.86±1.76) ×10 6个，(0.63±0.21)比(0.84±0.19)，(8.98±1.80)×10 6个比(8.02±1.78)×10 6个，(0.87±0.18)比(0.70±0.22)， t值分别为2.11，5.22，2.68和4.20， P值均<0.05)]。脑胶质瘤组织中Tregs、IL-10mRNA与原发癌灶直径明显正相关，Th17细胞、IL-17 mRNA与原发癌灶直径呈明显负相关，差异有统计学意义( r值分别为0.34、0.32、-0.27、-0.43， P值均<0.05)。 结论:胶质瘤组织中Tregs及IL-10高表达，Th17细胞及IL-17低表达，且Tregs、IL-10 、Th17和IL-17表达量与脑胶质瘤WHO分级和肿瘤大小有关。

目的:了解2021—2022年间风疹流行病学及其病毒基因特征，为我国风疹防控提供基础科学数据。方法:自中国疾病预防控制信息系统中的传染病监测模块和监测报告管理模块获取2021—2022年间全国风疹发病数据；从全国麻疹/风疹实验室网络获得阳性风疹病毒(rubella virus，RuV)分离株，通过逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)扩增并测定位于E1基因的两个核苷酸(nucleotide，nt)片段[F1-480(8 633～9 112 nt)和F2-633(8 945～9 577 nt)]，整理拼接后获得靶基因序列(E1-739)，将其与已报道的基因型/亚型参考株构建系统发育树以鉴定基因型别，同时从GenBank数据库中下载我国2018—2020年间流行的RuV病毒株序列开展系统发育分析。结果:2021—2022年我国风疹发病率均为0.06/10万(2021年：840例；2022年：784例)，病例主要集中于西部和南部省份。病例年龄分布分析显示，2021—2022年风疹发病主要以<5岁儿童为主(2021年：34.17%，287/840；2022年：42.09%，330/784)，其中以0～2岁患儿占比最高。进一步分析病例免疫史发现，8～23月龄的病例中，仅接种了1剂次含风疹成分的疫苗(rubella containing vaccine，RCV)幼儿的发病比例较高；2～14岁年龄组病例主要分布在接种了2剂次或以上RCV的儿童中；然而，>15岁病例主要集中在未接种RCV或免疫史不详的人群中。全国病毒学监测数据显示，2021—2022年间从我国6个省市共获得22株RuV病毒分离株，分属于1E-L2(11株)和2B-L2c(11株)基因亚型，并与2018—2020年间流行的RuV病毒株具有很高的同源性。结论:2021—2022年间我国风疹发病维持在较低水平，流行的RuV为1E-L2和2B-L2c基因亚型。

目的:探讨肝细胞癌（HCC）在接受放射治疗后自然杀伤（NK）细胞在肿瘤组织中的浸润作用及其相关机制。方法:应用人肝癌细胞系SK-Hep-1构建HCC荷瘤小鼠模型，分为4组：对照组、放射治疗组、NK细胞清除组及NK清除联合放射治疗组，同时记录肿瘤生长情况。应用流式细胞术及免疫组织化学检测小鼠外周血NK细胞比率及肿瘤组织内NK细胞浸润情况。应用慢病毒构建Zeste同源增强子2（EZH2）过表达的SK-Hep-1细胞，并检测放射治疗后EZH2过表达细胞的CXC趋化因子配体10（CXCL10）的表达量及对NK细胞的趋化作用。应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白免疫印迹法（WB）及免疫组织化学检测评价SK-Hep-1细胞在体外、体内进行照射处理后EZH2、CXCL10 mRNA和蛋白的表达水平，通过趋化及阻断实验验证CXCL10对NK细胞的趋化作用。组间的比较采用独立样本 t检验。 P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果:HCC荷瘤小鼠模型实验提示，与放射治疗组相比，NK清除联合放射治疗组小鼠HCC肿瘤生长差异更显著（ P<0.05）；与对照组相比，放射治疗组小鼠外周血NK细胞数显著减少，而瘤内NK细胞浸润显著增加（ P<0.05）。流式细胞术及免疫组织化学检测体内体外的表达量实验提示，与对照组SK-Hep-1细胞及小鼠肿瘤组织相比，放射治疗组肝癌细胞系及肿瘤组织EZH2 mRNA和蛋白表达水平均下降（ P值均<0.05），CXCL10 mRNA和蛋白表达水平均升高（ P值均<0.05）。放射治疗后的细胞上清液对NK细胞趋化作用增强，中和CXCL10后抑制了NK细胞趋化作用。EZH2过表达体内外实验证实，放射治疗可通过下调EZH2表达上调CXCL10 mRNA及蛋白表达水平（ P值均<0.05）。放射治疗处理后，EZH2过表达对NK细胞趋化作用明显减弱。 结论:NK细胞作为免疫效应细胞直接参与放射治疗激活的抗HCC免疫过程。放射治疗通过抑制HCC中EZH2表达，上调CXCL10表达量从而增强NK细胞瘤内浸润。

目的:探讨小G蛋白二磷酸鸟苷解离刺激因子（SmgGDS）在肥胖发展中的作用及机制。方法:（1）8周龄C57BL/6J小鼠购自扬州大学比较医学中心，随机分为正常饮食组和高脂饮食组，每组6只，分别喂食普通饲料和含60%脂肪的高脂饲料4个月，Western印迹检测附睾脂肪组织（eWAT）、肝脏和骨骼肌中SmgGDS表达。（2）6周龄的野生型（WT）和SmgGDS敲低（KD）小鼠分为4组，分别给予高脂饮食 4个月（每组7只）和7个月（每组9只），进行葡萄糖耐量试验（GTT）和胰岛素耐受试验（ITT）；记录小鼠体重、脂肪组织和肝脏重量；苏木精-伊红（HE）染色分析脂肪组织的结构改变；Western印迹检测eWAT中细胞外信号调节激酶（ERK）1/2的磷酸化水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测eWAT中成脂分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）、C/EBPβ和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的mRNA水平。（3）提取WT和KD小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）并诱导分化，通过油红O染色检测脂滴形成情况；Western印迹检测SmgGDS和ERK磷酸化水平；RT-qPCR检测C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ的mRNA水平。（4）选取10周龄C57BL/6J小鼠随机分为2组，每组7只，分别腹腔注射SmgGDS过表达腺相关病毒（AAV-SmgGDS）和对照空载体，同时高脂饮食干预4周，进行GTT和ITT；记录小鼠体重、脂肪组织重量；HE染色分析eWAT结构改变；Western印迹检测eWAT中ERK磷酸化水平。结果:（1）高脂饮食组小鼠eWAT中SmgGDS表达明显上调（正常饮食组：0.218±0.037，高脂饮食组：0.439±0.072， t=2.74， P=0.034）。（2）在高脂饮食干预4个月时，KD小鼠的葡萄糖耐量［葡萄糖注射后60 min，WT组（528±21）mg/dl，KD组（435±17）mg/dl， t=3.47， P=0.030；90 min，WT组（463±24）mg/dl，KD组（366±18）mg/dl， t=3.23， P=0.047；120 min，WT组（416±21）mg/dl，KD组（297±16）mg/dl， t=4.49， P=0.005］和胰岛素敏感性（胰岛素注射后15 min，WT组77.79%±3.45%，KD组54.30%±2.92%， t=3.49， P=0.005；30 min，WT组62.27%±5.31%，KD组42.25%±1.85%， t=2.98， P=0.024；90 min，WT组85.69%±6.63%，KD组64.71%±5.41%， t=3.12， P=0.016）较WT组明显改善，eWAT重量比增加（WT组4.19%±0.18%，KD组5.12%±0.37%， t=2.28， P=0.042），但平均脂肪细胞面积减小［WT组（5 221±241）μm2，KD组（4 410±196）μm2， t=2.61， P=0.026］。高脂饮食干预7个月后，KD组eWAT重量比减小（WT组5.02%±0.20%，KD组3.88%±0.21%， t=3.92， P=0.001）、平均脂肪细胞面积减小［WT组（6 783±390）μm2，KD组（4 785±303）μm2， t=4.05， P=0.002］；eWAT中ERK1磷酸化水平升高（WT组0.174±0.056，KD组0.588±0.147， t=2.64， P=0.025），PPARγ的mRNA水平显著降低（WT组1.018±0.128，KD组0.029±0.015， t=7.70， P=0.015）。（3）在分化的MEF中SmgGDS表达显著增加（未分化：6.789±0.511，分化：10.170±0.523， t=4.63， P=0.010）；敲低SmgGDS抑制MEF的脂滴形成（WT组1.00±0.02，KD组0.88±0.02， t=5.05， P=0.007），增加ERK1（WT组0.600±0.179，KD组1.325±0.102， t=3.52， P=0.025）和ERK2（WT组2.179±0.687，KD组5.200±0.814， t=2.84， P=0.047）活性，该结果可被ERK1/2抑制剂逆转。（4）SmgGDS过表达使小鼠体重增加，eWAT重量增加（对照组3.29%±0.36%，AAV-SmgGDS组4.27%±0.26%， t=2.20， P=0.048）、脂肪细胞增大［对照组（3 525±454）μm2，AAV-SmgGDS组（5 326±655）μm2， t=2.26， P=0.047］，胰岛素敏感性受损（胰岛素注射后30 min，对照组44.03%±4.29%，AAV-SmgGDS组62.70%±2.81%， t=3.06， P=0.019），eWAT中ERK1（对照组0.829±0.077，AAV-SmgGDS组0.326±0.036， t=5.96， P=0.001）和ERK2（对照组5.748±0.287，AAV-SmgGDS组2.999±0.845， t=3.08， P=0.022）活性降低。 结论:SmgGDS敲低通过抑制成脂分化和脂肪细胞肥大改善肥胖相关的糖代谢紊乱，且与ERK活化有关。

目的:研究中性粒细胞外陷阱（NETs）在程序性细胞死亡受体-1（PD-1）抑制剂相关心肌炎中的作用，探索靶向NETs的免疫检查点抑制剂相关心肌炎（ICIAM）治疗靶点。方法:选6周龄健康雄性BALB/c小鼠30只，分别编号并随机分为对照组（ n=10）、模型组（ n=10）和治疗组（ n=10）。除对照组外，分别于第1和7天给小鼠皮下注射100 μl含有250 μg小鼠心肌肌钙蛋白I（TnI）肽段的弗氏完全佐剂（CFA）。第8天起每2天腹腔注射一次PD-1抑制剂（15 μg/只），共5次。PF-1355治疗组从造模开始前1天起连续16 d腹腔注射PF-1355（50 mg·kg -1·d -1）。观察各组小鼠一般状态，实时荧光定量聚合酶链式反应（RTFQ-PCR）评估中性粒细胞相关趋化因子、NETs和焦亡相关因子、促炎细胞因子的转录水平调控，免疫组化、免疫荧光检测和蛋白质印迹法反映焦亡相关分子的蛋白水平变化，超声心动图展示主要心功能指标改变，心肌病理对比炎性浸润程度。 结果:模型组小鼠较对照组小鼠心肌NETs免疫荧光强度明显增加（2.49±0.08和0.99±0.26， P<0.001）。模型组心肌组织焦亡相关NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cleaved-Caspase 1）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase 1）、剪切的Gasdermin-D（cleaved-GSDMD）、Gasdermin-D（GSDMD）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）的蛋白表达水平较对照组上调（均 P<0.05）。PF-1355治疗后，相比于模型组，治疗组小鼠左心室射血分数（LVEF）（73.58%±5.31%和58.12%±3.19%， P<0.001）、左室缩短分数（LVFS）（39.78%±4.31%和33.89%±2.19%， P<0.001）升高；苏木精-伊红染色结果显示与模型组相比，治疗组炎性浸润面积百分比减少（30.12%±3.57%和14.92%±2.46%， P<0.001）；治疗组免疫荧光NETs生成较模型组减少（2.52±0.04和1.03±0.05， P<0.001）；治疗组NLRP3等焦亡相关分子水平较模型组下调（均 P<0.05）。 结论:在PD-1抑制剂相关的心肌炎中，NETs通过激活NLRP3炎症小体导致心肌细胞焦亡。特异性髓过氧化物酶抑制剂PF-1355通过调控NETs来下调NLRP3炎症小体激活，可能进一步挽救和逆转NETs介导的心肌焦亡损伤。

目的:探讨间变性淋巴瘤激酶（ALK）易位性肾细胞癌的临床病理学、分子遗传学、鉴别诊断及预后。方法:回顾性分析解放军东部战区总医院2011年1月至2020年12月收集的2例ALK易位性肾细胞癌的组织形态学特征、免疫组织化学表达以及相关预后信息，采用荧光原位杂交（FISH）技术、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、高通量靶向测序等多项分子检测分析其分子病理特征。结果:男女各1例，年龄分别为59岁和57岁。形态学上，例1类似于肾集合管癌或髓质癌，呈小管状、微囊网状结构，具有显著的黏液背景及淋巴细胞浸润；例2则类似于Xp11.2易位性肾细胞癌或Ⅱ型乳头状肾细胞癌，呈管状乳头状、局部实性结构，肿瘤细胞胞质呈絮状，间质内见多量泡沫样组织细胞，未见黏液背景及淋巴细胞浸润。免疫表型方面，2例均强阳性表达ALK蛋白，此外细胞角蛋白7、E-cadherin、波形蛋白、PAX8和CD10呈现不同程度的表达，其余标志物均为阴性。多种分子检测技术均明确显示ALK基因易位，例1为罕见的VCL-ALK融合基因，融合位点为VCL基因的第16号外显子和ALK基因的第20号外显子；例2为EML4-ALK融合基因，融合位点为EML4基因的第2号外显子和ALK基因的第20号外显子。结论:ALK易位性肾细胞癌较为罕见，形态多样，容易漏诊和误诊。特征性的ALK蛋白表达和分子检测ALK基因重排有助于该类型肾癌的确诊。

目的:探究人源化膜金属蛋白酶——含有TRAB结构域的蛋白2A（TRABD2A）单克隆抗体对接受联合抗逆转录病毒疗法（cART）的人免疫缺陷病毒（HIV-1）感染者储存库细胞的作用效果，建立基于TRABD2A阻断抗体的全新HIV-1储存库检测方法。方法:2021年5—12月于中国医科大学附属第一医院收集研究对象51例。其中健康者2名，接受cART的HIV-1感染者（cART组）41例，未接受cART的HIV-1感染者（no-cART组）8例。采用噬菌体展示库技术构建人源化TRABD2A单克隆抗体，分别处理HIV-1感染者、未接受cART的HIV-1感染者及健康对照者的外周血单个核细胞（PBMC）和CD4+T淋巴细胞，利用荧光素酶报告系统、单分子免疫阵列检测技术等方法检测细胞培养上清中病毒含量，同时使用流式细胞术、荧光实时定量聚合酶链式反应检测处理后细胞的活化和病毒基因表达情况，比较不同处理组之间病毒释放量和表面活化标志CD25、CD69、HLA-DR（人类白细胞DR抗原）表达量的差异。结果:接受cART的HIV-1感染者的PBMC经人源化TRABD2A单克隆抗体处理后检测HIV-1产量，未处理组为0（0，440），使用负抗体所释放的病毒量为0（0，390），二者差异无统计学意义（ P>0.05），而使用正抗体所释放的病毒量为1 259（0，4 269）和3 142（1 292，5 060），与使用负抗体所释放的病毒量相比，差异均有统计学意义（ P<0.05）。利用健康对照者PBMC对感染者PBMC进行倍比稀释，经正抗体处理后病毒释放量等比例下降［未稀释、稀释5、25、125、625倍对应的HIV-1产量分别为4 670（3 339，7 697）、1 860（1 509，4 615）、1 550（1 150，2 680）、602（255，1 441）、2（0，37）］。且TRABD2A单抗处理后的细胞静息状态与未处理组差异无统计学意义（未处理组与正抗体-1处理组的CD25阳性细胞百分率分别为3.89±1.31、4.60±1.74，CD69阳性细胞百分率分别为2.50±1.27、2.18±0.51，HLA-DR阳性细胞百分率分别为7.66±3.78、8.79±3.42； P均>0.05），未处理与正抗体-1的病毒群抗原基因（Gag）表达量分别为1和0.82±0.55，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:人源化TRABD2A单克隆抗体能够有效阻断TRABD2A的蛋白活性，可在不改变细胞静息状态和全基因组转录水平的情况下，显著促进HIV-1感染者外周血中储存库细胞释放子代病毒，且通过此方式所引起的储存库病毒释放量与储存库细胞数量呈正相关。

目的:对一种国产丁型肝炎病毒核酸定量试剂（简称“国产HDV RNA试剂”）进行质量评估和初步临床应用探索。方法:基于Bio-Rad CFX Opus 96实时荧光定量PCR分析系统的国产HDV RNA试剂对WHO HDV RNA国际标准品系列稀释样本进行分析，对国产HDV RNA试剂的灵敏度和准确度进行评价，并将人工合成的假病毒或病毒培养物稀释后用于国产HDV RNA试剂线性范围评价；采用国产HDV RNA试剂对HAV、HBV、HCV感染的阳性样本以及HEV国家参考品进行分析，对其特异性进行评价；用国产HDV RNA试剂测试高、低两个水平的样本，进行精密度评价；用基于ABI 7500 FAST DX荧光定量PCR仪的RoboGene HDV RNA作为对比试剂与国产HDV RNA试剂平行检测30例丁型肝炎病毒抗体IgG（HDV IgG）阳性样本，采用Pearson相关系数（ r）评价2种试剂的相关性。 结果:国产HDV RNA试剂的灵敏度为6 IU/ml，与对比试剂宣称的灵敏度一致；对WHO HDV RNA标准品的标定曲线的斜率为-3.286，扩增效率为101.6%，对8种HDV基因型的线性检测范围为10~10 8 IU/ml；与HAV、HBV、HCV和HEV不发生交叉反应；对5个浓度水平样本的准确度评价符合要求，对高、低两个水平样本的批内精密度变异系数在1.20%~4.20%，批间精密度变异系数在1.20%~7.90%。对HDV IgG阳性样本的检测结果与对比试剂一致（ r=0.984， P<0.001），与测序结果比较准确率为100%。 结论:本研究中国产HDV RNA试剂表现出较好的特异性、准确度、精密度和较宽的线性范围，灵敏度达到国际同类型试剂的水平。