目的:制备靶向成纤维细胞激活蛋白(FAP)的四聚体探针1，4，7，10－四氮杂环十二烷－1，4，7，10－四乙酸(DOTA)－4P[FAP抑制剂(FAPI)] 4，评价其在FAP表达阳性荷瘤裸鼠模型中的生物分布和PET显像，并探讨其用于FAP阳性肿瘤治疗的可行性。 方法:基于FAPI－46单体结构在4个FAPI活性基团之间各加入4个微型聚乙二醇(PEG)(PEG 3)，构建靶向FAP的四聚体探针4P(FAPI) 4，并经螯合剂DOTA偶联完成四聚体探针的 68Ga和 177Lu标记。通过体外细胞实验鉴定四聚体在体外对FAP结合性能。在FAP表达阳性的HT－1080－FAP荷瘤裸鼠模型中进行小动物PET显像和生物分布实验，并行核素靶向内照射治疗的实验研究(共39只)。肿瘤摄取数据比较行两独立样本 t检验分析；核素治疗中肿瘤体积数据的比较采用重复测量方差分析。 结果:细胞体外实验显示，DOTA－4P(FAPI) 4和单体FAPI－46的半数抑制浓度值相似(3.29和2.15 nmol/L)。PET显像及生物分布数据显示， 68Ga/ 177Lu标记的FAPI四聚体具有高度靶向FAP的特异性，且较其单体FAPI－46具有更高的肿瘤摄取及更持久的瘤内滞留时间：注射后48 h 177Lu－DOTA－4P(FAPI) 4和 177Lu－FAPI－46肿瘤摄取分别为(18.72±1.32)与(2.72±1.20)每克组织百分注射剂量率(%ID/g)( t＝15.55, P<0.001)。在核素治疗实验中， 177Lu－DOTA－4P(FAPI) 4较 177Lu－FAPI－46和对照组(100 μl生理盐水注射)显示出更好的抗肿瘤治疗效果：在治疗开始后第2天，四聚体治疗组肿瘤体积明显小于对照组(平均值差值67.19 mm 3， P＝0.049)；在治疗开始后第14天，四聚体治疗组肿瘤体积明显小于单体治疗组(平均值差值414.33 mm 3， P＝0.005)。 结论:与FAPI－46相比，FAPI四聚体DOTA－4P(FAPI) 4在肿瘤摄取和滞留方面均有较大幅度的提升， 177Lu－DOTA－4P(FAPI) 4有望成为一种有前景的放射性药物应用于FAP阳性肿瘤的核素内照射治疗。

二苯并氮杂?类化合物是一种重要的含氮杂环类化合物.结构修饰不仅可对二苯并氮杂?类化合物中心七元环环上氮原子进行改造,也可在两边的苯环上连接不同基团,不同取代基对其活性影响也不同.二苯并氮杂?类化合物具有心脏保护作用、血管性认知障碍保护作用、抗抑郁作用、抗焦虑作用、抗癫痫作用、降糖作用、抗癌作用、抗炎作用、抗氧化作用和镇痛作用.总结了二苯并氮杂?类化合物的药理作用研究进展,以期为设计合成二苯并氮杂?类药物及其潜在药理活性提供参考.

2023年11月29日,浙江大学医学院基础医学院杜艺岭研究员和中国科学院深圳先进技术研究院周佳海研究员合作在《美国化学会志》(Journal of the American Chemical Society)上发表了最新研究成果论文"Conserved enzymatic cascade for bacterial azoxy biosynthesis"(DOI:10.1021/jacs.3c12018).该研究以微生物来源的多种氧化偶氮类(azoxy)药源分子为研究对象,揭示了生物合成代谢产物中氧化偶氮基这种重要的功能基团形成的生物化学机制.

目的 寻找以 AMPA(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid)受体为靶点的新型抗疲劳化合物.方法 以胡椒酸、3,4,5-三甲氧基苯甲酸、3,4-二甲氧基苯甲酸,这3个化合物分别作为母体结构,对苯甲酰胺的酰胺氮原子引入基团进行结构修饰,设计合成43个化合物,结构经1 H-NMR确认.采用 MTT法评价新化合物的细胞毒性,通过戊巴比妥钠镇静催眠实验进行中枢兴奋性筛选,最后采用小鼠负重游泳实验评价目标新化合物抗疲劳活性.结果化合物2j细胞毒性低,具有一定的中枢兴奋性与抗疲劳活性.结论 化合物2j具有较好的抗疲劳作用,具有进一步开发潜力.

在甾体的甾核或者支链上引入不同的官能团后可以得到不同生理活性的化合物,它们有可能会成为人类治疗不同疾病的药物.甾体药物除了作为传统激素类药物使用外,在抗肿瘤药物中的应用也成为甾体的重要研究内容之一.含有氮杂环官能团的甾体化合物是一类具有显著生理活性的化合物.本文按照氮杂环基团在甾体母核中的不同取代位置而具备不同的抗肿瘤活性进行讨论,概述了近5年来新合成及新发现的氮杂环甾体化合物的设计、筛选,以及在抑制肿瘤细胞生长增殖活性方面的研究,并对其发展趋势和应用前景进行了展望.

目的 制备粒径均一、超顺磁性强、性质稳定、免疫活性强并可识别乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞的免疫磁性纳米粒(immunomagnetic nanoparticles,IMNP).方法 多元醇法合成含有活性羧基基团的超顺磁氧化铁纳米粒(superparamagnetic oxide iron nanoparticles containing reactive carboxyl groups,SMNP-COOH),热重分析法测定SMNP-COOH表面羧基含量,邻二氮菲测定铁含量.在1-甲基-3-乙基碳二亚胺(EDC),N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化下,采用碳二亚胺偶联法将鼠抗人乳腺珠蛋白(anti human mammaglobin,anti-hMAM)单克隆抗体共价修饰结合至SMNP-COOH表面合成IMNP.透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、X射线衍射仪(X-ray powder diffraction XRD)、振动样品磁强计(vibrating sample magnetometer,VSM)、激光散射粒径电位测定仪和邻二氮菲法测定铁含量等方法分别对SMNP-COOH和IMNP进行表征,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定IMNP表面抗体活力.结果 X-射线粉末衍射检测表明,SMNP-COOH和IMNP两者特征峰与标准Fe3O4的特征峰一致.SMNP-COOH和IMNP的铁含量分别0.205和0.164 mol·L-1;透射电镜检查提示,SMNP-COOH和IMNP均呈球形或椭球形,透射电镜测定粒径为(13.7±3.6)和(15.4±4.5)nm;流体粒径测定结果表明,SMNP-COOH和IMNP强均粒径和多分散系数分别为23.4,71.2 nm,0.303和0.175;磁学性能研究表明,SMNP-COOH和IMNP均具有超顺磁性,抗体结合可以降低SMNP-COOH的磁性,两者质量饱和磁化强度分别为71.37和67.68 emu·g-1 Fe.ELISA法测定IMNP表面的抗体活力表明,IMNP表面结合的抗体量为93 μg·mg-1 IMNP.抗-hMAM抗体修饰的IMNP能与乳腺癌细胞株MDA-MB-415具有强的选择性和特异性.结论 成功合成超顺磁性强,能与乳腺癌细胞株发生特异性结合的免疫磁性纳米粒,可用于免疫磁性分离富集乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTCs),从而为乳腺癌CTCs的特异性检测提供更有利的武器.

代谢激活是药物性肝损伤和上市药物被撤销的主要原因.代谢激活过程中产生的具有亲电活性的代谢中间体,一方面能够和细胞内的生物大分子,如蛋白质或核酸,发生共价结合而诱发肝毒性、肾毒性及致癌性等毒性作用;另一方面还会共价修饰药物代谢酶,使其产生不可逆性抑制,从而诱发严重的药物-药物相互作用.中药成分的代谢激活已经成为了国内外中草药毒性研究领域的热点.本文针对易被细胞色素P450酶代谢激活的不同结构与关键基团,如芳香胺、芳香硝基物、含氮杂环化合物、对苯二酚、亚甲二氧基苯、呋喃等,各类型的代表性中药成分,以及所涉及的P450亚型酶与相关毒性进行了综述,并对该领域进行了研究展望.

S-亚硝基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式,是指一氧化氮(NO)基团共价连接至靶蛋白特定半胱氨酸残基的自由巯基,从而形成S-亚硝基硫醇(SNO)的过程.S-亚硝基化修饰广泛存在于各有机体中,通过改变蛋白质生化活性、稳定性、亚细胞定位以及蛋白质-蛋白质相互作用等机制而调控不同的生物学过程或信号通路.在蛋白质S-亚硝基化检测分析方法中,最为广泛使用的是生物素转化法(biotin switch assay),其基本原理是首先封闭未被修饰的自由巯基,进而将被修饰的SNO基团特异地还原为自由巯基并使用生物素将其特异标记.被生物素标记的半胱氨酸残基(即被修饰位点)可进一步通过蛋白质免疫印迹和/或质谱等方法进行检测分析.该文详细描述了植物蛋白质样品的体内和体外生物素转化法的实验流程,并对实验过程中的注意事项进行了讨论.

目的 制备共轭亚油酸-紫杉醇自组装纳米粒(conjugated linoleic acid-paclitaxel conjugate self-assembled nanoparticles,CLA-PTX NPs).方法 本实验采用纳米沉淀法制备,通过动态光散射、核磁共振氢谱、拉曼光谱、傅里叶变换红外光谱及氮元素分布分析等方法对所制备的CLA-PTX NPs的表面和内部基团进行表征,确定CLA-PTX NPs的表面基团和内部基团,为阐述其自组装机制提供依据.结果 PTX中C-1位和C-7位的羟基、C-4位和C-10位的乙酰基位于CLA-PTX NPs的表面,CLA碳链、PTX中C-2位和C-3’位的苯环及C-3’位的酰胺键位于CLA-PTX NPs的内部.据此推测CLA-PTX的自组装方式是非极性的CLA碳链因疏水作用而自发向内聚集,PTX中亲水的含氧基团羟基、羰基等在纳米粒表面从而形成纳米粒.结论 CLA-PTX NPs表面基团的确定也为其可能的表面修饰提供参考和依据.更为重要的是,本实验还为其他自组装纳米粒结构的表征提供了相关可行的方法.

醌那霉素是由Ⅱ型聚酮合酶系统产生的一类角蒽环类聚酮化合物.从结构上看,其具有三个显著的特征:苯并芴核、高度氧化的A环以及芴环上的重氮基团.醌那霉素因其特殊的苯并芴结构以及良好的生物活性,引起了科研人员广泛的研究兴趣.但是迄今醌那霉素的生物合成途径并没有得到完全的解析,尤其是对重氮基团的形成.前期研究因缺少醌那霉素完整的生物合成基因簇信息而受到阻碍.本课题组最近确证了醌那霉素的完整生物合成基因簇,共包含62个基因,其中有8个基因并没有被报道过.通过生物信息学分析,本研究发现其中alp2F和alp2G基因与cremeomycin生物合成中的creE和creD具有高度的同源性.creE和creD基因产物通过催化天冬氨酸生成亚硝酸,其后亚硝酸在酸性条件下自发加载到化合物的碳骨架上,实现重氮基团的加载.本研究通过体外酶催化反应证实了Alp2F和Alp2G同样可以催化天冬氨酸生成亚硝酸.亚硝酸钠喂养实验进一步确证了亚硝酸盐参与醌那霉素的合成.alp2F和alp2G基因功能体外和体内的确证,不仅是对醌那霉素生物合成基因簇中未知基因功能的表征,也对阐明醌那霉素家族天然产物中重氮基团的形成有启发意义.