目的 探讨腺相关病毒感染上调体内生长和分化因子11(GDF11)表达水平对2型糖尿病大鼠(T2DM)主动脉损伤的影响.方法 随机选取9周龄雄性SD大鼠,采用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)联合诱导,建立T2DM模型.正常大鼠和糖尿病模型大鼠随机分为5组:空白对照组(Control组)、阴性病毒对照组(NC组)、GDF11腺相关病毒组(GDF11组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+GDF11腺相关病毒组(DM+GDF11组).喂养8周后,检测大鼠血清中胰岛素(INS)、晚期糖基化终末产物(AGES)、重组生长转化因子11(GDF11)、总胆固醇(T-CHO)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、不对称二甲基精氨酸(ADMA)、丙二醛(MDA)浓度;采用过碘酸雪夫氏染色(PAS染色)观察糖原沉积部位,苏木精-伊红染色(HE)观察血管损伤情况,扫描电镜观察血管内皮细胞和血管弹性纤维损伤情况,蛋白印迹和免疫组化检测血管损伤相关蛋白的表达水平.结果 在动物实验中与Con-trol组相比,生化指标提示:DM组大鼠血清中AGES、T-CHO、TG、LDL-C和MDA浓度升高(P<0.05),INS、GDF11、HDL-C、ADMA显著低于Control组(P<0.05),DM+GDF11组AGES和HDL-C与DM组无明显差异,T-CHO、TG、LDL-C和MDA相比较DM组降低(P<0.05),INS、GDF11和ADMA相比较DM组升高(P<0.05).病理染色提示:DM组PAS染色提示糖原颗粒在主动脉内皮及内皮下沉积,HE染色观察到主动脉中膜增厚,内皮细胞及弹性纤维断裂走形不规则,电镜观察到DM组血管内皮损伤,弹性纤维断裂,DM+GDF11组这些变化有所减轻.蛋白印迹和免疫组化表示内皮细胞相关蛋白在DM组中表达下降(P<0.05),间充质标志物在DM组中表达升高(P<0.05),DM+GDF11组中这些蛋白有所回调,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 提高体内GDF11表达水平可以改善糖尿病导致的主动脉血管损伤,推断可能与其抑制内皮间充质转化保护血管内皮细胞的功能从而改善血管损伤有关.

目的:探讨重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)联合磺胺嘧啶银治疗面部深Ⅱ度烧伤的疗效.方法:选择2016年6月-2021年11月笔者医院收治的96例面部深Ⅱ度烧伤患者,采用随机数表法分为观察组和对照组各48例,对照组给予磺胺嘧啶银霜治疗,观察组给予磺胺嘧啶银霜+rhGM-CSF凝胶治疗,比较两组创面愈合相关指标及美学效果.结果:观察组创面结痂时间、痂皮基本溶解时间及创面完全愈合时间均短于对照组(P＜0.05),治疗后各时间点疼痛评分均低于对照组(P＜0.05);治疗后,两组创面细菌培养阳性率均降低,但组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后1、2周,两组血清血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平均高于治疗前,且观察组高于对照组(P＜0.05);治疗3周后,观察组创面美学效果各评分及总分均明显高于对照组(P＜0.05);两组并发症发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:对面部深Ⅱ度烧伤患者采用rhGM-CSF凝胶与磺胺嘧啶银联合治疗,可有效促进患者创面愈合、降低疼痛程度,提高血管生长因子水平,美学效果好,值得在临床推广应用.

目的 探讨沉默肝激酶B1/丝氨酸-苏氨酸激酶11(liver kinase B1/serine-threonine kinase 11,LKB1/STK11),基因对前列腺癌细胞株RWPE-1中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的调控作用.方法 构建3个shRNA LKB1重组载体,转染至高表达LKB1的前列腺癌细胞株RWPE-1中,RT-PCR、Western blot法分别检测LKB1及TGF-1 mRNA及蛋白表达水平;ELISA法检测细胞培养液上清中TGF-β1的分泌水平.结果 构建获得的3种shRNA LKB1表达载体,均能抑制LKB1基因的表达,其中以LKB1-shRNA1沉默效果最强,其对LKB1 mRNA水平的抑制率为74.20％,对蛋白水平的抑制率为71.66％;转染重组质粒LKB1-shRNA1后,TGF-β1的mRNA、蛋白表达及分泌水平均明显增加(P＜0.05).结论 LKB1基因沉默后,TGF-β1的表达明显增高,LKB1参与调节前列腺癌细胞中TGF-β1的表达,提示LKB1基因可作为研究前列腺癌发生发展的分子机制的新靶点.

目的:拟通过检测分析局部联合应用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rhGM-CSF)和胰岛素对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面中转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor-2,FGF-2)以及CD34表达的影响,初步探讨局部联合应用rhGM-CSF和胰岛素促进糖尿病难愈性创面愈合的可能作用机制.方法:雄性SD大鼠制备糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,随机分为糖尿病对照组、胰岛素用药组、rhGM-CSF用药组以及联合用药组,同时建立正常对照组.分别于伤后1、3、7、11、15、21d计算创面愈合率,观察创面组织形态学情况,并检测创面中TGF-β1、FGF-2以及CD34的表达情况.结果:伤后7、11、15、21d,正常对照组、联合用药组创面愈合率均高于其余各组,糖尿病对照组创面愈合率均低于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05).伤后3~21d,正常对照组、联合用药组TGF-β1、FGF-2表达均显著高于其余各组,糖尿病对照组最低,差异有统计学意义(P<0.05).伤后7~21d,正常对照组、联合用药组CD34表达均高于其余各组,各时间点糖尿病对照组最低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:局部联合应用rhGM-CSF和胰岛素可通过促进糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面血管化、纤维化和上皮化,明显促进创面愈合,提高创面愈合质量,其机制可能与二者联合上调创面中TGF-β1、FGF-2以及CD34的表达有关.

目的 构建及表达人生长分化因子11 (growth differentiation factor 11,GDF11)基因原核表达质粒,并对重组表达蛋白进行纯化.方法 PCR法扩增人源GDF11 cDNA全长序列,插入至载体pCold-I,构建重组质粒pCold-GDF11,转化感受态Rosetta(DE3)菌株,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,超声破碎获得GDF 11包涵体,添加8 mol/L尿素溶解,与Ni2+NTA Agarose充分混匀后装柱,用含谷胱甘肽(glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的复性液进行复性,经含咪唑的洗脱液洗脱获得目的蛋白,进行Western blot检测.结果 重组质粒pCold-GDF11经双酶切及测序鉴定,构建正确;诱导表达蛋白的相对分子质量约45 000,主要以包涵体形式存在;GDF11蛋白纯化产物纯度达85％以上,每升菌液获得2.5mg的目的蛋白,且可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合.结论 成功构建了GDF11基因原核表达质粒,且表达产物经纯化后可获得纯度较高的目的蛋白.

目的 探讨生长分化因子-11(GDF-11)对高糖诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞(BM-EPC)增殖与凋亡的影响及可能机制.方法 在体外不同葡萄糖浓度下培养BM-EPC,分别加入重组GDF-11蛋白(rGDF-11)、转化生长因子β(TGF-β)受体Ⅰ抑制剂SB431542等干预因素.根据实验目的及干预因素不同将细胞随机分组为:正常对照组、高糖组、高糖+rGDF-11组、高糖+rGDF-11+SB431542组.采用MTT测定增殖功能;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)双标记检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Bcl-2、Bax,以及活性半胱天冬酶(Cleaved-caspase)3等凋亡蛋白表达水平.免疫荧光染色法检测各组细胞p-Smad2/3表达水平.多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较选用最小显著差异t检验.结果 高糖可明显减弱增殖功能(吸光度值0.23±0.03比0.12±0.01,t=12.98,P<0.01),降低Bcl-2/Bax比例,升高凋亡关键酶Cleaved-caspase 3,细胞凋亡率增加[分别为0.45±0.09比1.21±0.23、0.28±0.02比0.07±0.00、(18.63±3.02)％比(2.82±0.46)％,t=3.04、-68.06、-7.60,均P<0.05].而rGDF-11干预可上调Bcl-2/Bax比例,减少Cleaved-caspase 3表达,抑制细胞凋亡.SB431542与细胞共培养后GDF-11的抗凋亡作用均明显减弱(0.56±0.11比1.14±0.07,t=4.33,P<0.05).高糖显著降低p-Smad2/3水平(荧光强度表示),GDF-11预处理可恢复细胞内p-Smad2/3水平,而SB431542明显抑制GDF-11诱导的细胞p-Smad2/3表达增加(0.89±0.12比1.21±0.12,t=-3.20,P<0.05).结论 GDF-11可能通过激活TGF-β/Smad2/3通路减少高糖诱导的 β 细胞凋亡.

目的:研究血清生化指标水平与冠脉粥样硬化严重程度的关系,为临床诊断及治疗提供参考.方法:选择本院2012年4月至2016年11月期间收治的冠脉粥样硬化患者160例,根据斑块性质,患者被分为稳定斑块组(80例)和不稳定斑块组(80例) ,另选择同期健康体检者60例作为健康对照组.测量比较三组血清生化指标水平,分析其与冠脉粥样硬化严重程度的关系.结果:随着冠状动脉粥样硬化程度的加重,血清转化生长因子(TGF)-β 、肿瘤坏死因子(TNF)-α 、核转录因子(NF)-κB 、血管内皮细胞生长因子(VEGF ) 、重组牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1 、基质细胞衍生因子(SDF)-1 、趋化因子受体CXCR-4 、趋化因子受体(CCR)-2 、参与TGF-β超家族蛋白信号传导的相关蛋白(Smad)-1 、 Smad-2 、 Smad-3 、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ 、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1 、 TIMP-2 、 TIMP-3水平逐渐升高,健康对照组＜稳定斑块组＜不稳定斑块组,两两比较均有显著差异, P均＝0-001 .与健康对照组比较,稳定斑块组和不稳定斑块组血清半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-3 、 Caspase-6 、 BCL-2相关 X蛋白(Bax)水平均显著升高, Bcl2水平显著降低, P均＝0-001 .结论: TGF-β 、 MCP-1及CXCR-4蛋白等生化指标与冠状动脉粥样硬化的严重程度密切相关,可作为临床治疗的重要指标.

目的 探究利拉鲁肽(Li)联合生长分化因子(GDF)-11重组蛋白对db/db糖尿病小鼠的心肌保护作用及对转化生长因子(TGF)-β1、过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR)γ和Caspase-3的影响.方法 选择db/db糖尿病小鼠48只,随机取12只作为模型组,其余36只分别腹腔注射Li(Li组)、GDF-11(Li+GDF-11组)及Li联合GDF-11,db/m小鼠作为对照组.检测各组空腹血糖(FBG),使用HE和Masson染色分析心肌组织损伤情况及纤维化情况.检测血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)反映心肌损伤水平.Western印迹和qPCR分别检测TGF-β1、PPARγ、Caspase-3蛋白和mRNA水平.结果 药物干预后小鼠FBG显著低于模型组(P<0.05),并且Li+GDF-11组FBG显著低于Li组和GDF-11组(P<0.05).HE染色结果显示,Li组和GDF-11组细胞损伤程度较模型组降低,Li+GDF-11组小鼠的心肌细胞结构接近正常,结构趋紧整齐,细胞肥大显著缓解.Li组和GDF-11组心肌纤维化程度显著低于模型组(P<0.05),Li+GDF-11组纤维化程度显著低于Li组和GDF-11组(P<0.05).Li组和GDF-11组LDH和CK-MB水平显著低于模型组(P<0.05),而Li+GDF-11组的LDH和CK-MB水平显著低于Li组和GDF-11组(P<0.05).Li组和GDF-11组TGF-β1和Caspase-3显著低于模型组而PPARγ显著高于模型组(P<0.05),Li+GDF-11组TGF-β1和Caspase-3显著低于Li组和GDF-11组而PPARγ显著高于Li组和GDF-11组(P<0.05).结论 Li与GDF-11联合使用可进一步控制血糖,并通过促进PPARγ和TGF-β1的表达调节代谢,抑制心肌细胞纤维化和凋亡,缓解糖尿病心肌细胞损伤.

目的 检测免疫性血小板减少症(rrP)患者外周血中CD8+ CD28-调节性T细胞(Treg)、血小板特异性自身抗体、细胞因子的表达水平,分析其在ITP发病机制以及临床治疗中的意义.方法 73例ITP患者分为激素治疗组(n=42)、重组人粒血小板生成素(rhTPO)治疗组(n=31),并根据治疗效果分为有效组和无效组.流式细胞术检测患者治疗前后外周血CD8+ CD28-Treg的表达,流式微球技术检测患者外周血血小板特异性自身抗体的表达.ELISA法检测患者治疗前后转化生长因子(TGF)-β1、白介素(IL)-10和干扰素(IFN)-γ表达水平.以30例健康体检者作为正常对照组.结果 ①73例ITP患者治疗前CD8+ CD28-Treg及细胞因子IL-10、TGF-β1的表达低于正常对照组,IFN-γ表达高于正常对照组(P＜0.05),激素及rhTPO治疗后有效组CD8+ CD28-Treg、IL-10、TGF-β1的表达均比治疗前显著上升,IFN-γ的表达较治疗前显著降低(P＜0.05).无效组CD8+ CD28-Treg、IFN-γ、IL-10、TGF-β1的表达和治疗前相比均未有明显变化.②根据受试者工作特征曲线(ROC),激素组治疗前CD8+ CD28-Treg的临界值为14.35,此时预测激素疗效的敏感性和特异性分别为66.7％和73.3％.27例有效者中小于14.35的有18例(66.7％),15例无效者中大于14.35的有11例(73.3％).rhTPO组治疗前CD8+CD28-Treg的临界值为15.45,此时预测rhTPO疗效的敏感性和特异性分别为63.6％和88.9％.22例有效者中大于15.45的有14例(63.6％),9例无效者中小于15.45的有8例(88.9％).③激素组抗血小板膜糖蛋白Ib (GPIb)抗体阳性患者18例,治疗后有效率44.4％,抗GPIb抗体阴性24例,有效率79.1％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CD8+ CD28-Treg及相关细胞因子的表达异常参与了ITP的发病,激素和rhTPO可能通过改变这种异常发挥作用.治疗前检测CD8+ CD28-Treg有助于预测激素及rhTPO的疗效.抗GPIb抗体阳性可能是激素治疗不敏感的影响因素之一.

目的 探讨转化生长因子-β诱导蛋白(TGFBI)在胶质母细胞瘤中的异质性表达及其促进胶质瘤干细胞恶性行为的作用机制.方法 检索肿瘤基因组学图谱计划(TCGA)、中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)、脑肿瘤分子数据库(REMBRANDT)、Oncomine数据库中TGFBI在不同级别胶质瘤、不同亚型胶质母细胞瘤中的表达水平,以及TGFBI表达变化与患者生存期、胶质瘤相关巨噬细胞(TAMs)标志物CD11b和CD163的相关性.体外诱导人外周血单核细胞系U937分化为Primed-U937细胞和M2型巨噬细胞样细胞,实时定量聚合酶链反应检测诱导过程中TGFBI,M1型TAMs标志物CD80、白细胞介素-6(IL-6),以及M2型TAMs标志物CC趋化因子配体18(CCL18)、血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达变化.免疫荧光染色和免疫组织化学染色观察胶质母细胞瘤细胞TGFBI与TAMs标志物CD163和胶质瘤干细胞标志物SOX2的分布情况.体外培养人原代胶质瘤干细胞系NCH-421K,测定重组人TGFBI (rhTGFBI)对细胞成球能力和侵袭能力的影响.结果 (1)来自TCGA、CCGA、REMBRANDT、Oncomine数据库的数据分析显示,TGFBI表达变化与胶质瘤分级和恶性程度呈正相关,与患者生存期呈负相关,与TAMs标志物CD11b和CD163表达水平呈正相关.(2)在U937细胞诱导分化为M2型TAMs过程中,M1型TAMs标志物CD80(P=0.000)和IL-6(P=0.001)表达水平降低,M2型TAMs标志物CCL18(P=0.000)和VEGFA(P=0.002)表达水平升高,TGFBI表达水平亦升高(P=0.001).(3)免疫荧光染色和免疫组织化学染色显示,胶质母细胞瘤细胞中TGFBI与TAMs标志物CD163和胶质瘤干细胞标志物SOX2均存在共定位.(4)体外成球实验和侵袭实验显示,经rhTGFBI处理后,NCH-421K细胞成球数目多于(P=0.000)、细胞球侵袭能力强于(P=0.001)对照组.结论 胶质母细胞瘤TGFBI可由M2型TAMs分泌并促进胶质瘤干细胞成球、侵袭等恶性行为.