目的:基于中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)和癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库分析非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶12基因( PTPN12)在脑胶质瘤中的表达和意义。 方法:回顾性分析CGGA数据库(325例)和TCGA数据库(636例)中脑胶质瘤患者的临床资料和RNA测序数据。分析不同世界卫生组织(WHO)肿瘤级别、四分型亚型、异柠檬酸脱氢酶( IDH)突变状态、O 6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶( MGMT)启动子甲基化状态的患者 PTPN12表达量的差异。根据 PTPN12的表达量将患者分为 PTPN12高表达组和 PTPN12低表达组，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较两组患者的生存差异。采用单因素和多因素Cox回归分析法判断 PTPN12对脑胶质瘤患者的预后作用。进一步通过基因本体(GO)功能富集分析及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析获得基因相关的功能以及有关的通路。 结果:两数据库中， PTPN12的表达量均随脑胶质瘤病理级别的升高而升高(均 P<0.01)；与 IDH突变型比较， IDH野生型中 PTPN12表达量升高(均 P<0.01)； MGMT启动子非甲基化者 PTPN12表达量高于 MGMT启动子甲基化者(均 P<0.01)； PTPN12在经典型、间质型、神经元型以及前神经元型中表达量的差异均具有统计学意义，间质型中表达量最高(均 P<0.01)。两数据库中， PTPN12高表达者均比低表达者的生存期短(均 P<0.01)。两个数据库中，多因素Cox回归分析结果均显示， PTPN12表达量为脑胶质瘤患者生存期的独立影响因素(CGGA数据库中， HR＝1.433，95% CI：1.094～1.876， P＝0.009；TCGA数据库中， HR＝1.588，95% CI：1.018～2.477， P＝0.042)。GO分析结果显示， PTPN12表达量正相关的基因更多地富集在增殖、凋亡、黏附、蛋白水解、免疫反应、血管生成、药物反应、缺氧反应、肿瘤细胞G 2/M期的转化、肿瘤细胞G 1/S期的转化等多个与脑胶质瘤恶性进展相关的功能上。KEGG分析结果显示，与 PTPN12表达量呈正相关的基因更多地富集在肿瘤相关通路、PI3K-Akt通路、丝裂原活化蛋白激酶通路、肿瘤坏死因子通路、缺氧诱导因子1通路、p53通路、凋亡通路以及细胞周期通路上。 结论:不同WHO肿瘤级别的脑胶质瘤患者 PTPN12表达量不同， PTPN12表达量可独立用于脑胶质瘤患者的预后判断，且与多个脑胶质瘤恶性进展相关的功能和通路有关。

目的 探究靶向沉默野生型p53诱导的磷酸酶1(Wip1)对卵巢癌细胞紫杉醇(PTX)化疗敏感性的影响.方法 以卵巢癌A2780细胞为研究对象,通过慢病毒感染A2780细胞,构建Wip1低表达的稳定细胞株 Wip1-sgRNA(Wip1-sgRNA组),对照细胞株为NC-sgRNA(NC-sgRNA组),并适时以PTX处理细胞(设为Wip1-sgRNA+PTX组和NC-sgRNA+PTX组);采用CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 与NC-sgRNA组比较,Wip1-sgRNA组细胞 Wip1 mR-NA及蛋白表达水平明显下调(P＜0.001);在PTX梯度处理相同时间的条件下,Wip1-sgRNA组细胞存活率均明显低于NC-sgRNA组(P＜0.05);PTX对 Wip1-sgRNA组细胞的48 h时半抑制浓度(IC50)明显低于NC-sgRNA 组(P＜0.001).与NC-sgRNA组比较,Wip1-sgRNA组细胞增殖能力明显减弱(P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),穿膜细胞数明显减少(P＜0.001);PTX处理后,细胞增殖能力均较各自对照组减弱,细胞凋亡率均升高,穿膜细胞数均减少,并且与NC-sgRNA+PTX组比较,Wip1-sgRNA+PTX组细胞增殖能力明显减弱(P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),穿膜细胞数明显减少(P＜0.001).结论 Wip1基因沉默可能提高人卵巢癌A2780细胞对PTX的化疗敏感性.

目的 观察野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wild-type p53-induced phosphatase 1,Wip1)在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达并探讨Wip1与卵巢浆液性囊腺癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学、实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot方法检测卵巢浆液性囊腺癌50例、交界性卵巢浆液性囊腺瘤20例、正常卵巢组织10例中Wip1表达阳性率、Wip1 mRNA和Wip1蛋白的表达水平.结果 卵巢浆液性囊腺癌组织和交界性卵巢浆液性囊腺瘤中Wip1的表达阳性率明显高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢浆液性囊腺癌与交界性卵巢浆液性囊腺瘤组织中Wip1表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05);卵巢浆液性囊腺癌组和交界性卵巢浆液性囊腺瘤组中Wip1 mRNA的表达明显高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢浆液性囊腺癌组和交界性卵巢浆液性囊腺瘤组中Wip1蛋白的表达明显高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢浆液性囊腺癌组中病理分期Ⅲ+Ⅳ期患者较Ⅰ+Ⅱ期患者Wip1表达阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移者较无淋巴结转移者Wip1表达阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05);不同组织分级患者Wip1表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论 Wip1在卵巢浆液性囊腺癌组织中高表达,与淋巴结转移、临床分期、组织学分级密切相关.Wip1参与了卵巢浆液性囊腺癌的发生发展过程.

为进一步探讨莪术醇的诱导细胞衰老的机制,该研究采用荧光定量PCR技术对莪术醇处理后细胞中81个细胞衰老相关基因差异表达谱进行分析,结果发现TP53及其下游基因p16Ink4a、p21Waf1/Cip1和p27Kip1等的表达水平显著升高,伴随ABL1、ALDH1A3、CHEK2、HRAS、PTEN等多个衰老信号通路启动与效应关联基因的转录显著增强,而Cyclin A2、IGFBP3、SIRT1以及TERT等细胞周期进程与衰老信号通路的负性调控基因的表达水平则显著降低.Western印迹检测结果显示,p53及其下游周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CKI)分子p21WAF1和p16INK4水平升高,Cyclin A2水平降低,与PCR结果一致,并伴野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)水平显著增高,提示莪术醇可能通过激活p53信号通路诱导HepG2细胞衰老.该研究进一步发现莪术醇能够诱导HepG2细胞发生衰老表型改变,伴G0/G1期周期阻滞.

野生型p53诱导的磷酸酶1属于丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶家族,被证实为一种原癌基因,参与DNA损伤修复通路的负调控和其通路中的关键蛋白去磷酸化.越来越多的证据表明,野生型p53诱导的磷酸酶1在多种肿瘤的发生、发展、侵袭、转移、化疗抵抗中发挥促进作用.因此,其有望成为一种肿瘤标志物和治疗靶点.本文结合最新进展对野生型p53诱导的磷酸酶1在肿瘤中的研究进行综述.

背景 由高龄引起的心脏功能不全是心脏衰老的显著特征.热休克蛋白27(HSP27)对缺血以及化学物质引起的心肌损伤有保护作用,但其对心脏衰老的作用尚未明确.目的 探讨HSP27是否可以延缓心脏衰老,及其延缓衰老的可能机制.方法 以心脏特异性表达HSP27的转基因小鼠(Tg)和野生型小鼠(WT)作为实验对象,采用蛋白免疫印迹、心脏超声心动图等方法探究HSP27在心脏衰老中的作用.结果 野生高龄鼠心功能下降,心肌特异性过表达HSP27可明显改善高龄引起的心功能不全.高龄Tg组心脏组织衰老标志物p16、p53和p-p53的水平较WT组分别降低了46.5％、49.4％和53.0％ (P＜0.01).高龄Tg组心脏组织的自噬标记物微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和多聚蛋白62(p62)蛋白水平较WT组分别降低了38.7％和59.0％(P＜0.01),而线粒体自噬相关的磷酸和张力素同源物诱导假定激酶1 (PINK1)和Parkin蛋白的水平较WT组分别增加了57.1％和60.5％(P＜0.01).结论 适当提高HSP27的表达可以延缓心脏衰老,可能与激活线粒体自噬有关.

目的 研究槲皮素对肿瘤细胞的增殖、周期和凋亡的影响.方法 用槲皮素12.5,25,50和100μmol·L-1,分别作用于人肝癌HepG2和Hep3B细胞、人乳腺癌MDA-MA-231细胞、人结肠癌HCT116 p53野生型(HCT116 p53WT)和p53敲除型(HCT116 p53KO)细胞12,24和48 h.荧光显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞存活率;采用Hoechst33258染色观察细胞核染色质的变化;采用流式细胞术检测细胞周期的变化;Western印迹法检测胱天蛋白酶3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白水平的变化.结果槲皮素对肿瘤细胞增殖的抑制作用显著且呈浓度(rHepG2=0.972,P<0.01;rHep3B=0.959,P<0.01;rMDA-MB-231=0.979,P<0.01;rHCT116p53WT=0.983,P<0.01;rHCT116p53KO=0.980,P<0.01)和时间(rHepG2=0.974,P<0.01;rHep3B=0.956,P<0.01;rMDA-MB-231=0.959,P<0.01;rHCT116p53WT=0.971,P<0.01;rHCT116p53KO=0.988,P<0.01)依赖性,与细胞对照组相比,槲皮素处理组细胞数量明显减少.槲皮素诱导G2/M周期阻滞(P<0.01);镜下观察见核染色质浓缩和碎裂等典型的凋亡特性(P<0.01).Western印迹法结果显示,胱天蛋白酶3蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),活化的胱天蛋白酶3表达水平无显著变化,PARP表达水平明显降低(P<0.01),活化的PARP明显升高(P<0.01);在加入泛胱天蛋白酶抑制剂后,与槲皮素单独作用相比,胱天蛋白酶3和PARP蛋白表达水平升高,活化的PARP表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05).结论 槲皮素能通过诱导P53非依赖性的G2/M细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而实现对肿瘤细胞增殖的抑制作用.

目的:探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)与卵巢癌细胞SKOV3侵袭力的关系,揭示Wip1对SK-OV3细胞的侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响.方法:采用划痕实验、Transwell小室法测定Wip1沉默后SKOV3细胞体外侵袭能力.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测SKOV3细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达.结果:细胞迁移距离Wip1-siRNA组(30.33±3.67)短于Control组(59.33±7.69),细胞侵袭到Tr-answell小室滤膜下细胞数Wip1-siRNA组(17.17±1.84)低于Control组(30.17±3.43),RT-PCR和Western blot检测Wip1-siRNA组MMP-2(0.51±0.01)和MMP-9(0.40±0.03)的表达较Control组(1.00±0.00)降低(均P＜0.01);Wip1-siRNA组TIMP-1和TIMP-2的表达与Control组未见差异(P＞0.05).结论:沉默Wip1能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力,可能是通过抑制MMP-2、MMP-9的表达实现的.

目的:研究野生型p53诱导的磷酸酶1(Wip1)基因在人类精子中的表达情况及其与精子浓度及活力的相关性.方法:收集正常对照组、少精子症组、弱精子症组和少弱精子症组精液样本,每组20例.检测4组精子DNA碎片指数(DFI)、精子存活率.分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)法和免疫荧光技术检测精子Wip1基因和蛋白的表达.结果:少精子症组、弱精子症组、少弱精子症组DFI均较正常对照组显著升高(均P<0.05).少精子症组与正常对照组精子存活率无明显差异(P>0.05),弱精子症组、少弱精子症组较正常对照组显著降低(P<0.05).DFI≥25％组精子存活率和活力均较DFI<25％组显著降低(P<0.05),而两组精子浓度无明显差异(P>0.05).正常对照组与少精子症组Wip1基因和蛋白表达水平均无明显差异(P>0.05),弱精子症组、少弱精子症组Wip1基因和蛋白表达水平均较正常对照组显著升高(均P<0.05).Pearson相关分析显示:Wip1基因表达与精子浓度和DFI呈正相关关系,与精子活力呈负相关关系(均P<0.05).结论:Wip1在人类精子中有表达,且其可能负调控精子DNA损伤修复进程,Wip1表达上调可导致精子活力降低,DFI升高,并影响精子浓度.

目的 探讨肝内胆管癌(ICC)中野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平及临床意义.方法 选取38例ICC患者肝内胆管癌组织标本为研究对象,同期选取36例正常胆管组织标本为对照,采用免疫组织化学(S-P)方法检测组织中Wip1、MMP-2蛋白表达水平,分析二者与ICC临床病理特征之间的关系.结果 ICC组织中Wip1蛋白阳性表达率为78.95％,明显高于正常胆管组织中Wip1蛋白阳性表达率8.33％,差异有统计学意义(P<0.05);ICC组织中MMP-2蛋白阳性表达率为73.68％,明显高于正常胆管组织中MMP-2蛋白阳性表达率5.56％(P<0.05).Wip1蛋白表达与ICC患者年龄、性别、临床分期、有无肝炎、组织学分级无明显相关性(P>0.05),与患者门静脉浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.05);MMP-2蛋白与ICC患者年龄、性别、有无肝炎、组织学分级无明显相关性(P>0.05);与患者临床分期、门静脉浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.05).Wip1与MMP-2在ICC组织中表达呈较强正相关(γs=0.683,P<0.05).结论 Wip1、MMP-2在ICC中明显高表达,二者参与ICC发生及发展.