目的:探究两色金鸡菊提取物马里苷对高糖诱导的视网膜上皮细胞(ARPE-19)上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation，EMT)的影响。方法:利用高糖诱导ARPE-19细胞建立EMT模型，设control对照组，不通过浓度高糖干预组及马里苷高中低剂量组。CCK-8细胞活性实验观察高糖对细胞的影响。镜下观测细胞形态结构变化。Western blot实验观察间质标志物Fibronectin(纤维连接蛋白FN)以及上皮标志物E-cadherin(E-钙素)的表达情况。结果:随着高糖浓度的依次递增，ARPE-19细胞的凋亡愈加明显，高糖干预24 h对照组[(97.97±1.56)%]与不同浓度高糖干预组[(88.31±3.34)%，(82.54±3.92)%，(77.35±6.14)%，(81.19±3.83)%，(53.17±5.71)%，(40.57±7.37)%，(31.27±8.92)%]相比差异有统计学意义( F＝64.13， P<0.05)；高糖干预48 h对照组[(100.00±2.06)%]与不同浓度高糖干预组[(85.09±7.87)%，(86.54±8.58)%，(74.48±3.21)%，(64.07±8.65)%，(58.64±8.45)%，(25.14±8.88)%，(7.665±7.91)%相比差异有统计学意义( F＝48.83， P<0.05)。伴随着明显的结构形态的改变，ARPE-19细胞中E-钙素表达降低、FN表达升高。高糖干预48 h E-钙素的表达对照组(96.7±1.05)与不同浓度高糖干预组[(87.9±5.46)，(62.71±2.01)，(70.73±6.13)，(67.97±8.05)，(58.41±5.24)]相比差异有统计学意义， F＝24.61， P<0.05)；高糖干预48 h FN的表达对照组(100.00±0.01)与不同浓度高糖干预组(153.10±17.47)，(137.7±25.24)，(152.00±26.00)相比有显著差异， F＝3.088， P<0.05)]。马里苷干预后，上皮标记物E-钙素恢复，间质标志物FN降低，马里苷干预48 h对照组E-钙素的表达量为(0.43±0.08)，与马里苷高中低剂量组[(0.25±0.004)，(0.36±0.01)，(0.38±0.04)，(0.31±0.01)]相比差异有统计学意义( F＝7.865， P值均<0.05))，马里苷干预48 h FN的表达对照组为(102.20±2.10)，与马里苷高中低剂量组[(188.30±13.01)，(95.41±12.50)，(136.10±9.49)，(199.60±19.93)]相比差异有统计学意义( F＝42.31， P<0.05)。 结论:高糖可以促进ARPE-19细胞发生上皮间质转化，造成其纤维化趋势，而马里苷可以改善其纤维化。

目的 基于肠道菌群探讨黄诺玛苷对脾虚泄泻小鼠肠道功能的影响.方法 将小鼠随机分为空白组和造模组,造模组采用大黄水煎液灌服结合潮湿环境法建立脾虚泄泻模型;随后造模组随机分为模型组、黄诺玛苷组、阳性对照组,空白组和模型组灌服蒸馏水,给药组分别灌服相应药物.观察小鼠一般体征指标和结肠组织病理学变化,测定炎症因子水平,16S基因测序技术分析肠道菌群,利用1H-NMR技术检测小鼠粪便短链脂肪酸(SCFA)水平.结果 黄诺玛苷会上调脾虚泄泻小鼠 Bacteroidota、Muribaculaceae、Eubacterium-coprostanoligenes-group等肠道优势有益菌群的丰度及肠道菌群多样性和丰富度,下调Firmicutes、Proteobacteria、Campilobacterota、Helicobacter、Ruminococcus-torques-group、Colidextribacter等肠道优势有害菌群的丰度,使肠道优势菌群丰度趋于空白组小鼠.肠道优势有益菌群跟脾虚泄泻小鼠血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管活性肠肽(VIP)成负相关,与白细胞介素10(IL-10)、胃泌素(GAS)成正相关;肠道优势有害菌群跟之相反.结论 黄诺玛苷可能是通过调节脾虚泄泻小鼠肠道微生态平衡,发挥抑制血清和肠道炎症、保护及修复肠黏膜、提升免疫功能、改变肠道SCFA水平作用,有效抑制小鼠脾虚泄泻的发生与恶化.

目的 构建胰岛素抵抗(IR)小鼠小肠类器官模型,研究两色金鸡菊黄酮类成分黄诺玛苷对肠黏膜屏障的保护作用.方法 ①构建C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官模型,3D免疫荧光染色观察小肠类器官细胞核核抗原(Ki-67)、上皮细胞E钙黏蛋白(E-cad)、溶菌酶(Lyz)和黏蛋白2(MUC-2)表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测纤连蛋白(Fn)、胰高血糖素样肽1(GLP-1)和肽YY(PYY)mRNA表达;Western印迹法检测Fn,GLP-1和PYY蛋白表达;ELISA检测Lyz分泌水平.② 将构建的小鼠小肠类器官分为5组:以C57BL/6J小鼠小肠类器官为正常对照组,db/db小鼠小肠类器官为IR模型组,db/db小鼠小肠类器官用黄诺玛苷25,50和100 μmol·L-1处理48h为IR模型+黄诺玛苷组,RT-qPCR检测各组类器官Lyz mRNA表达,Western印迹法检测Lyz蛋白表达.结果 ①C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官培养第6天形成管腔结构清晰的环状结构,IR小鼠小肠类器官模型建立成功.3D免疫荧光检测结果显示,建立的小肠类器官均表达Ki-67,E-cad,Lyz和MUC-2;RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Fn mRNA表达显著升高(P<0.05),GLP-1和PYY mRNA表达显著降低(P<0.05);Western印迹法结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Fn蛋白表达显著升高(P<0.01),GLP-1(P<0.01)和PYY(P<0.05)蛋白表达显著降低;ELISA结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Lyz分泌量显著降低(P<0.01).②RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Lyz mRNA表达水平显著降低(P<0.01);与IR模型组相比,IR模型+黄诺玛苷50和100 μmol·L-1组Lyz mRNA表达水平显著增加(P<0.05,P<0.01);Western印迹法结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Lyz蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与IR模型组相比,IR模型+黄诺玛苷50和100 μmol·L-1组Lyz蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01).结论 构建的IR小鼠小肠类器官模型为探讨药物干预修复肠黏膜屏障的病理生理机制提供了更完善的体外研究模型.黄诺玛苷可能通过逆转IR小鼠Lyz表达水平的降低维护肠黏膜屏障,进而发挥改善IR作用.

目的 对雪菊进行生药学研究,为雪菊的基原鉴定提供理论基础.方法 通过对雪菊性状以及组织构造和粉末显微特征进行观察,采用高效液相色谱对雪菊的主要成分进行分析,并建立其指纹图谱,从药材性状、显微、理化方面对雪菊进行生药学研究.结果 雪菊性状特征,头状花序符合菊科共有特征,舌状花两色,上半部黄色,基部约1/2处紫褐色;粉末显微特征,黄色具刺的球形花粉粒、淡黄色至棕红色的分泌道碎片、乳头状突起的单细胞毛、花药基部细胞和花粉囊内壁细胞为其较明显的特征;建立了雪菊HPLC指纹图谱.结论 雪菊性状特征符合菊科共有特征,与其同属植物剑叶金鸡菊和大花金鸡菊相比特征明显;研究补充雪菊生药学研究的不足,为雪菊系统的基原鉴定提供了参考.

目的 研究昆仑雪菊的遗传毒性,为其食用安全性提供科学依据.方法 试验受试物为昆仑雪菊浸泡浓缩液,每毫升相当于1 g昆仑雪菊干品.Ames试验和体外哺乳类细胞染色体畸变试验分别设昆仑雪菊浸泡浓缩液0.008、0.04、0.2、1、5 mg/皿组和1.25、2.5、5 mg/ml组,直接计数培养基上各菌株的回变菌落数和染色体畸变细胞数.微核试验、精子畸形试验和小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验均设昆仑雪菊浸泡浓缩液低、中、高剂量组(5、10、20 g/kg),各试验分别镜检计数每只动物1 000个嗜多染红细胞(PCE)、1 000个完整精子、100个中期分裂相细胞,记录有微核的嗜多染红细胞数量、畸变精子类型和数目、染色体畸变细胞数.结果 昆仑雪菊遗传毒性试验结果均为阴性.结论 本研究未发现昆仑雪菊有遗传毒性.

目的 观察两色金鸡菊黄酮类化合物黄诺玛苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激及血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达的影响.方法 将HUVEC细胞分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及不同浓度黄诺玛苷组(50、100、200、400 μmol/L).酶联免疫吸附测定法(ELASA)检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.用Western blot方法检测细胞中VEGF和ICAM-1蛋白表达水平.结果 与NG组比较,HG组MDA明显升高,SOD、CAT、GSH-Px明显降低(P＜ 0.05或P＜ 0.01).与HG组比较,黄诺玛苷干预后,MDA含量显著降低(P＜0.05),SOD、CAT、GSH-Px活力显著上升(P＜0.05).Western blot结果显示,与NG组比较,HG组VEGF和ICAM-1蛋白表达量增多(P＜ 0.05或P＜0.01).与HG组比较,黄诺玛苷干预后VEGF和ICAM-1蛋白表达量随浓度递增而依次减少(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 黄诺玛苷可能通过改善氧化应激水平和下调VEGF、ICAM-1的表达对高糖诱导HUVEC损伤具有一定保护作用.

目的 制备中药两色金鸡菊的活性成分黄诺马苷(Flavanomarein,FM)的人工抗原,为制备FM的单克隆抗体奠定基础.方法 利用曼尼希法将FM与多聚赖氨酸(Poly-lysine,PLL)偶联,并采用薄层色谱法进行鉴定,皮下免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA法对小鼠血清的抗体进行效价与特异性检测.结果 薄层色谱结果显示FM与PLL偶联成功;间接竞争ELISA结果显示,采用FM-PLL免疫的3号小鼠产生了抗FM的抗体(Y=-0.0372X+0.8621,R2=0.969.结论 成功合成了黄诺马苷人工抗原,为进一步研究FM的免疫学检测方法提供了实验基础.

目的:研究金鸡菊乙醇提取物对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激水平的影响,并探讨其可能机制.方法:腹腔注射1％链脲佐菌素制备糖尿病肾病大鼠模型,随机分为正常组、模型组、金鸡菊乙醇提取物给药组(200、400、800 mg/kg)、阳性对照组(盐酸二甲双胍,100 mg/kg).连续给药4周后,测定大鼠体质量、肾脏指数、空腹血糖、尿白蛋白、血清生化指标、肾组织匀浆液中氧化指标.结果:与正常组相比,模型组大鼠表现为体质量下降、肾脏指数、空腹血糖值、尿白蛋白值、血肌酐、尿素氮、三酰甘油、谷氨酰转移酶、总胆固醇等血清生化指标,均显著升高(P＜0.05),肾组织匀浆液中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶水平显著升高(P＜0.05),丙二醛以及一氧化氮含量显著下降(P＜0.05).经金鸡菊乙醇提取物给药后,肾脏指数、血糖值、尿白蛋白以及上述血清生化指标、肾脏氧化指标水平均出现显著逆转(P＜0.05),以800 mg/kg剂量组效果最佳.结论:金鸡菊乙醇提取物对糖尿病大鼠肾脏具有一定的保护作用,其机制可能通过抑制体内异常的氧化应激反应和改善纸质代谢异常发挥效应.

菊科植物具有极强的有性繁殖能力,对外来菊科观赏植物的引进存在极高的入侵风险.本研究以武汉常见的菊科12种外来观赏植物为对象,通过有性繁殖特征调查,研究植株的花部特征、花粉活力、传粉系统、种子产量,分析各物种有性繁殖能力的差异,评估其入侵能力.结果显示,多数物种可在隔绝传粉者情况下结实;访花昆虫类型多样,共观察到26种访花昆虫,其中膜翅目蜂类是主要的传粉者;结实情况具有一定差异.综合考虑花粉活力、传粉情况和结实情况,认为黑心金光菊(Rudbeckia hirtaL.)、松果菊(Echinacea purpurea (L.) Moench)、大花金鸡菊(Coreopsis grandiflora Hogg.)、蛇目菊(Sanvitalia procumbens Lam.)的有性繁殖竞争力较高,对本地传粉环境可能有较大影响.本研究对近缘物种有性繁殖特征的综合分析结果可为评估外来物种的入侵风险提供一定的参考.

目的:考察新疆两色金鸡菊模拟茶饮水提取物清除自由基、胰脂肪酶活性抑制能力,并对其成分进行HPLC分析.方法:采用去离子纯净水煎煮两色金鸡菊获得模拟茶饮水提取物.对模拟茶饮水提取物进行DPPH、ABTS+·、·OH和NO·自由基的清除能力考察;同时考察模拟茶饮水提取物对胰脂肪酶活性抑制能力;使用HPLC法分析模拟茶饮水提取物中的主要物质成分.结果:模拟茶饮水提取物对DPPH自由基的清除能力(SC50)为(228.6±4.61) μg·mL-1;对ABTS+·自由基的清除能力(SC50)为(128.4±5.83) μg·mL-1;对·OH自由基的清除能力(SC50)为(22.41±1.13) μg·mL-1;对NO·自由基的清除能力(SC50)为(149.8±11.6) μg·mL-1;对胰脂肪酶活性抑制能力(IC50)为(366.4±8.12) μg·mL-1.经HPLC成分分析,模拟茶饮水提取物主要含有绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马里苷、异奥卡宁和奥卡宁等成分.结论:新疆两色金鸡菊模拟茶饮水提取物具有一定的自由基清除能力,同时具有一定的抑制胰脂肪酶活性的能力.