目的:研究钙池操纵的钙内流(SOCE)在哮喘小鼠气道上皮屏障破坏中的作用及可能机制.方法:建立屋尘螨(HDM)致敏的C57BL/6急性过敏性哮喘小鼠模型,分为正常对照组、哮喘模型组和SOCE阻断剂BTP-2干预的哮喘模型组,剔除造模过程中死亡鼠和肺泡灌洗失败小鼠,每组10只.肺组织HE染色评估肺组织炎症,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-13和血清中IgE水平.右旋糖酐通透性实验评估屏障通透性,肺免疫荧光及肺组织化学染色评估连接蛋白(ZO-1和occludin)的分布和表达,RT-PCR和Western Blot评估肺组织中连接蛋白的表达.结果:与正常对照组相比,HDM致敏的小鼠气道炎症加重,肺组织ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达水平显著降低,同时右旋糖酐通透性增高(P＜0.000 1);与哮喘模型组相比,BTP-2干预组小鼠气道炎症减轻,ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达水平较哮喘组增高,右旋糖酐通透性亦明显下降(P＜0.000 1).结论:SOCE及其介导的钙信号可能参与了 HDM诱导的小鼠气道上皮屏障的破坏.

目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)及钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导的Ca2+内流和一氧化氮(N0)生成中的作用.方法 取2～3代HUVEC进行随机分组,将构建的TRPC1、Orai1干扰质粒(shTRPC1、shOrai1)分别转染入HUVEC,采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、Orai1 mRNA和蛋白的表达及转染抑制效率.将各组细胞分别与钙敏感受体(CAR)激动剂精胺、ROC模拟剂(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220与经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化.结果 与对照组比较,shTRPC1组和shOrai1组mRNA表达(抑制率分剐为84.50％、76.10％)和蛋白的表达(抑制率分别为83.98％、71.73％)明显降低(P＜0.05).在4种不同药物作用下,shTRPC1组和shOrai1组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05).结论 TRPC1、Orai1参与了人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成.

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)诱导冠状动脉收缩的机制.方法:取雄性Wistar成年大鼠,制备离体冠状动脉环,经血管张力测定仪测定动脉环的张力变化,并探讨给予不同信号通路抑制剂对5-HT诱导的冠状动脉收缩的影响.结果:首先发现给予5-HT2A受体阻断剂沙格雷酯(sarpogrelate,1 μmol/L)可完全消除5-HT引起的冠状动脉浓度依赖性收缩;磷脂酶Cβ(PLCβ)抑制剂U73122(10 μmol/L和50 μmol/L)、Rho相关蛋白激酶抑制剂Y-27632(3 μmol/L和10 μmol/L)和蛋白激酶C δ亚基(PKCδ)抑制剂rottlerin(3 μmol/L和10 μmol/L)孵育后,均可明显抑制5-HT引起的冠状动脉环收缩(P<0.05);此外,L-型钙通道(Cav1.2)阻断剂硝苯地平(1 μmol/L)及细胞内钙池操纵性钙内流(SOCE)抑制剂SKF96365(10 μmol/L和30 μmol/L)和2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB, 50 μmol/L和100 μmol/L)孵育后,5-HT诱导的血管收缩张力较未处理组明显下降(P<0.05);另外,在含硝苯地平(1 μmol/L)的无钙Kerbs-Henseleit(K-H)液中,发现5-HT仍可诱导血管收缩.结论:5-HT通过激活5-HT2A受体诱导冠状动脉收缩,其机制可能与PKC和Rho激酶信号通路,以及钙调控有关.

基质相互作用蛋白分子1(STIM1)与肿瘤的发生发展密切相关,其参与多种癌症细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的调节过程.阻断或敲除STIM1可以显著抑制癌细胞的增殖和迁移.阐明STIM1在癌症细胞中的调节机制,将有助于新的治疗靶点的确定.本文对STIM1分子在不同肿瘤中的作用机制及临床应用前景作一综述.

目的:观察钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365 对小鼠慢性哮喘模型气道重塑和气道高反应性的影响.方法:用鸡卵清白蛋白(OVA)致敏和激发小鼠,建立慢性哮喘模型,33只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、SKF96365组,每组11只,其中SKF96365组于每次激发前30 min给予SKF96365(10mg/kg)干预.哮喘组和SKF96365组于第0、7、14 d腹腔注射(i.p)200μL致敏液(含OVA粉剂20 μg、氢氧化铝凝胶2 mg);自第21天起,腹腔注射1％戊巴比妥钠(70mg戊巴比妥钠/kg小鼠体重)麻醉小鼠后,OVA(40 μg)滴鼻(i.n),连续6周,每周3次,共18次.对照组则在相同时间给予相应剂量的生理盐水腹腔注射和滴鼻.最后一次激发后24 h,各组分别随机取5只小鼠用于检测组织病理学变化,另6只小鼠采用Buxco小动物肺功能仪检测气道高反应性.其中组织病理学检测计算杯状细胞(过碘酸希夫染色阳性,PAS+)、胶原细胞(Masson阳性)和平滑肌细胞(α-SMA阳性)阳染面积/支气管基底膜周长值来评估小鼠气道重塑;观察给予不同浓度乙酰甲胆碱雾化时的气道阻力(resistance index,RI)最大值,评估小鼠气道高反应性.结果:对照组未见PAS阳性染色区域,哮喘组和SKF96365组杯状细胞增生高于对照组(7.29 ±2.04,4.49 ±1.70 vs 0.00 ±0.00,均P＜0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P＜0.05).Masson染色显示哮喘组和SKF96365组上皮下胶原沉积高于对照组(9.23 ± 1.41,7.30 ± 1.33 vs 1.60 ± 0.77,均P＜0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P＜0.05).α-SMA免疫组化显示哮喘组和SKF96365组平滑肌增生肥大高于对照组(4.54 ± 1.05,3.15 ±0.57 vs 1.97 ±0.69,均P＜0.05),且SKF96365组低于哮喘组(P＜0.05).当乙酰甲胆碱(Mch)＜6.25 mg/mL时,3组小鼠气道阻力无显著差异(P＞0.05),当25 mg/mL＞Mch≥12.25 mg/mL时,哮喘组小鼠气道阻力明显大于对照组小鼠(P＜0.001),当 Mch≥25 mg/mL时,哮喘组小鼠气道阻力大于 SKF96365 组(P＜0.05).结论:采用SKF96365干预后,慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性指标均有改善,提示SKF96365可能对哮喘气道重塑和气道高反应性具有抑制作用.

本研旨在探讨Janus激酶3(JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制.利用siRNA (siJAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)活性,用Western blot和RT-PCR检测钙池操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)过程中的重要分子Orai1和STIM1表达水平.结果 显示,SOCC抑制剂2-APB对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用.siJAK3转染可显著抑制MCF-7细胞的迁移能力,降低SOCC活性,下调Orai1和STIM1的mRNA和蛋白表达水平.在JAK3沉默细胞中过表达Orai1或STIM1,可使MCF-7细胞迁移力恢复.上述结果提示,JAK3通过影响SOCC促进乳腺癌细胞的迁移.

钙池操纵性钙内流(store-operated Ca2+entry,SOCE)是由基质相互作用分子(stromal interaction molecules,STIM)、钙释放激活钙通道蛋白(calcium release-activated calcium channel modulator,Orai)介导的细胞外Ca2+内流过程,在钙库亏空时激活,对骨骼肌生理功能维持具有重要作用.运动通过重塑肌浆网与横小管结构对SOCE进程产生影响,是提高骨骼肌抗疲劳能力的关键.本文将以骨骼肌SOCE进程为核心,梳理该进程的分子机制及其在骨骼肌机能维持与失常中的作用,探讨运动干预对骨骼肌SOCE进程的影响,为进一步探索骨骼肌收缩、舒张机制,提高运动能力提供新思路.

[背景]氟可以通过诱导胞内钙超载导致细胞损伤.钙池操纵性钙内流(SOCE)对于维持胞内钙稳态具有重要作用,但氟对肾组织SOCE的影响是未知的.[目的]探究氟离子经饮水亚慢性染毒对小鼠的肾脏毒性,以及对肾脏SOCE关键蛋白中的基质相互作用分子1(STIM1)和钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)表达的影响.[方法]将20只雄性ICR小鼠随机分为4组,每组5只:分别为0(对照组)、0.3、3和30 mg·L?1的氟离子染毒组,饮水染毒12周.测定染毒后小鼠的体重及肝肾脏器系数;观察小鼠肾脏的组织病理学改变;收集小鼠染毒12周末的24 h尿液,测定尿肌酐(UCr)、尿钙(UCa)、白蛋白(ALB)和β2-微球蛋白(β2-MG)的水平;使用蛋白质免疫印迹法检测肾脏中STIM1和ORAI1的蛋白表达水平;通过STIM1和ORAI1荧光共定位进一步验证STIM1和ORAI1的表达水平.[结果]氟离子染毒后,各组间小鼠的体重及肝肾脏器系数差异无统计学意义(均P>0.05).光镜下,3、30 mg·L–1的氟离子组中,小鼠肾脏组织可见肾小管细胞变性、顶端突出、脱落和扩张等;小鼠尿液指标可见,各组间小鼠UCr差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,3、30 mg·L–1氟离子组中UCr校正后的UCa水平分别为(0.075±0.014)、(0.081±0.012)mol·mol–1(以每摩尔UCr表示),虽略有升高趋势,但差异无统计学意义;ALB水平在各组间差异也无统计学意义(P>0.05);不同染毒组β2-MG水平有差异,30 mg·L?1氟离子组的β2-MG水平为(0.077±0.014)g·mol?1,较对照组升高(P<0.05);蛋白质免疫印迹法结果显示,各组间STIM1和ORAI1水平差异均具有统计学意义(F=18.411、6.853,P=0.001、0.013);与对照组相比,3、30 mg·L?1氟离子组中STIM1蛋白表达水平升高(P<0.05),30 mg·L?1氟离子组ORAI1蛋白表达水平升高(P<0.05);STIM1和ORAI1荧光共定位可见,3、30 mg·L?1氟离子组STIM1和ORAI1的表达上调.[结论]氟离子经饮水亚慢性染毒可以上调肾组织STIM1和ORAI1表达水平,诱导肾损伤.