目的:评价七氟烷对大鼠离体海马神经元程序性坏死的影响及其与兰尼碱受体的关系。方法:原代培养SD大鼠胎鼠的海马神经元，培养7 d时，以5×10 5个/ml细胞密度接种于培养孔(100 μl/孔)或培养瓶(3 ml/瓶)中，采用随机数字表法分为3组( n＝24)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)和兰尼碱受体拮抗剂组(R组)。C组常规培养，R组加入兰尼碱受体拮抗剂丹曲林，终浓度为3 μmol/L，30 min后将S组和R组细胞放置于含2%七氟烷的培养箱中，37 ℃培养5 h。收集细胞，倒置显微镜下观察神经元形态，采用流式细胞术检测细胞胞浆游离钙离子浓度([Ca 2+] i)，采用Western blot法检测兰尼碱受体和磷酸化人混合系列蛋白激酶样结构域(p-MLKL)的表达，采用免疫荧光法检测受体相互作用蛋白激酶3的表达，计算程序性坏死率。 结果:与C组比较，S组和R组神经元[Ca 2+] i升高，兰尼碱受体和p-MLKL表达上调，程序性坏死率升高( P<0.05)；与S组比较，R组神经元[Ca 2+] i降低，兰尼碱受体和p-MLKL表达下调，程序性坏死率降低( P<0.05)。C组神经元形态未见明显异常，S组神经元胞体皱缩，突起断裂及突起间网络稀疏；R组神经元胞体圆润，形态接近正常。 结论:七氟烷可导致大鼠离体海马神经元程序性坏死，其机制与其上调兰尼碱受体表达，导致钙超载有关。

神经血管耦联是调节血液供应以满足神经元激活所需能量和氧气的重要神经微环路，钙离子在其中发挥着重要作用。将钙离子封存在光化学不稳定的化合物(钙笼)中的过程称为笼锁钙技术，而光解笼锁钙技术则是与笼锁钙技术相反的过程，通过使用合适波长的光源将钙离子从钙笼中释放出来发挥作用。光解笼锁钙技术可以实现在时间、空间及浓度上操控钙离子。笔者现就应用光解笼锁钙技术研究神经血管耦联的现状进行综述，以期为神经血管耦联领域中与钙离子有关的科学问题研究提供更加便利的工具以及增加研究的可行性。

目的:研究甘草酸苷对幼鼠癫痫持续状态（SE）模型的保护机制。方法:年幼SD大鼠采用腹腔注射氯化锂和匹罗卡品制作SE大鼠模型，分为5组：对照组、SE组、SE+低剂量甘草酸苷组、SE+中剂量甘草酸苷组和 SE+高剂量甘草酸苷组，腹腔内注入不同剂量的甘草酸苷（20 mg/kg、40 mg/kg和60 mg/kg）。注射后6 h、12 h和24 h眶内采血，检测各组大鼠血清和(或)海马组织中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化c-Jun氨基酸末端激酶(p-JNK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达水平；流式细胞仪测定海马组织中细胞内钙离子水平。结果:甘草酸苷可以有效减少SE发作后血清和海马组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 的释放水平，注射甘草酸苷后，与SE组相比，低剂量组、中剂量组和高剂量组血清炎症因子表达水平均有不同程度的下调，差异有统计学意义（ P＜0.01）；高剂量组TNF-α表达水平随时间的推移有下降趋势，但差异无统计学意义（ P=0. 070）；中剂量组注射甘草酸苷后6 h、12 h和24 h，血清IL-1β和IL-6水平随时间推移明显下降（ P=0.030, 0.012）；而在低剂量组，随时间的推移TNF-α和IL-6水平呈升高趋势，但差异无统计学意义（ P=0.235,0.229），IL-1β 呈明显升高趋势（ P=0.034）。同时甘草酸苷还可抑制海马组织细胞内Ca 2+的上调（ P＜0.05）；中、高剂量甘草酸苷还能有效下调SE导致的海马组织中HMGB、RAGE、p-ERK/ERK和p-JNK/JNK 比值异常升高（ P＜0.05）。 结论:甘草酸苷可以通过抑制HMGB1/RAGE、ERK和JNK信号通路对SE大鼠模型发挥保护作用。

目的:评价兰尼碱受体2(RyR2)在老龄大鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠60只，20月龄，体质量600～650 g，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、POCD组(P组)和丹曲林组(D组)。P组和D组在七氟烷麻醉下行左侧胫骨骨折闭合复位内固定术制备大鼠POCD模型。D组于术前30 min时尾静脉注射RyR抑制剂丹曲林2 mg/kg。分别于术前1 d和于术后7 d时行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能，并于术后7 d水迷宫实验开始前行旷场实验检测大鼠自发运动功能。水迷宫实验结束后处死大鼠取海马组织，采用Western blot法检测RyR2和裂解的caspase-3的表达，采用流式细胞术检测海马神经元凋亡率和胞浆钙离子浓度，HE染色观察海马CA1区病理学结果。 结果:3组旷场实验运动速度、路程以及旷场中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，P组术后逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马RyR2和裂解的caspase-3表达上调，神经元凋亡率和胞浆钙离子浓度升高( P<0.05)，海马CA1区发生病理学损伤；与P组比较，D组术后时逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马RyR2和裂解的caspase-3表达下调，神经元凋亡率和胞浆钙离子浓度降低( P<0.05)，海马CA1区病理学损伤减轻。 结论:RyR2激活参与了老龄大鼠POCD的过程，可能与增加钙超载诱发的海马神经元凋亡有关。

儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速（CPVT）是遗传性心律失常的一种，临床表现为运动或情绪激动时诱发双向或多形性室性心动过速，导致晕厥或心原性猝死。目前已经发现与之相关的5种突变基因，基因突变增加舒张期钙离子释放至细胞质内，局部形成钙火花，引起延迟后除级，引发心律失常。CPVT治疗的一线用药为β受体阻滞剂，氟卡尼可作为辅助用药，高危人群可选择埋藏式心律转复除颤器（ICD）、左心交感神经结切除（LCSD）及导管射频消融（RFCA）等手术器械治疗，基因治疗仍在研究中，有望提供新的有效治疗手段。

血小板是来源于巨噬细胞的无核片段，广泛分布于人体血液循环中，其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用 [1]。近年来的研究表明，血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用 [2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体的识别、影响内皮屏障功能和改变血管通透性、释放储存的炎症因子、与白细胞相互作用并进行信号传导以及通过表面受体进行免疫调节 [3,4]。近年来，针对血小板表面受体调节免疫信号的研究取得了明显进展，相关受体包括Toll样受体（TLR）、血小板糖蛋白Ⅵ（GPⅥ）、血小板Fc受体FcγRⅡA、钙离子依赖型凝集素样受体-2（CLEC-2）、血小板内皮黏附分子-1（PECAM-1）、癌胚抗原相关黏附分子-1（CEACAM-1）和髓样细胞触发受体样转录因子-1（TLT-1）等 [5]。其中血小板表面受体FcγRⅡA是一种对单体免疫球蛋白（Ig）G具有低亲和力而对含IgG免疫复合物具有高亲和力的受体，无论是IgG单体还是免疫复合物中的IgG都通过Fc片段与FcγRⅡA结合。此外，FcγRⅡA也广泛分布在于巨噬细胞、中性粒细胞、部分树突细胞及其他细胞 [6]，在血小板介导的各类免疫反应中发挥着重要作用。

钙稳态失衡和自噬异常是PD、AD及肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的重要发病机制，二者之间存在相关性。研究显示，细胞不同储钙区室可经钙通道或钙离子(Ca 2+)相关信号蛋白影响自噬，例如细胞膜钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)和瞬时受体电位通道(TRPC)、内质网钙通道肌醇1，4，5-三磷酸受体(IP3R)途径、线粒体Ca 2+摄取相关的钙单向转运体(MCU)、溶酶体钙通道瞬时受体电位通道粘蛋白1(TRPML1)和两孔通道、胞浆钙调素依赖蛋白激酶的激酶β(CaMKKβ)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)途径等。本文现围绕神经退行性疾病中细胞内不同储钙区室和胞浆Ca 2+调控自噬的研究进展进行综述，以期加深临床同道对其的认识。

目的:探究外泌体在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）钙化中的调节作用。方法:体外培养VSMC（A7r5细胞），随机分为正常磷组（0.9 mmol/L）、高磷组（2.6 mmol/L）及高磷外泌体诱导组（即高磷组细胞提取的外泌体加入正常培养的VSMC中）。至培养第7天，收集正常磷组、高磷组细胞培养换液过程中获得的培养液，通过超速离心法得到沉淀物，BCA蛋白定量法测定所得沉淀物蛋白含量，分别对所得沉淀物用透射电镜观察沉淀物形态及大小，Western印迹法检测外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101蛋白（tumor susceptibility gene 101 protein，TSG101）、CD9；并对外泌体微RNA（microRNA，miRNA，miR）进行提取，实时定量PCR法检测miR-30b、miR-204、miR-211含量。分别培养7 d后，观察高磷外泌体诱导组VSMC对外泌体的摄取过程，观察3组细胞形态，茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平，邻甲苯酚络合铜检测细胞钙离子含量，比色法检测细胞碱性磷酸酶含量，Western印迹法检测成骨特异性转录因子（Runx2）蛋白表达情况。结果:（1）VSMC培养液经超速离心法所获沉淀物，经电镜形态学鉴定为外泌体，Western印迹法证实外泌体标志蛋白TSG101、CD9表达阳性。（2）外泌体内富含miRNA，经测定，高磷组外泌体中负向调控Runx2转录的miR-30b、miR-204、miR-211表达较正常磷组明显下调（均 P<0.05）。（3）高磷培养VSMC 7 d后，钙盐沉积明显，与正常磷组相比，钙含量、碱性磷酸酶活性明显增高（均 P<0.05），Runx2表达也明显增高（ P<0.05）。（4）将所得高磷组外泌体加入正常培养的VSMC中，外泌体可被VSMC摄取并成功诱导VSMC发生钙化，VSMC钙化指标及Runx2表达水平均明显增高。 结论:高磷诱导VSMC发生钙化，促进Runx2表达增高，其机制可能是借由VSMC释放外泌体传递细胞信号而实现。

目的:基于药食同源理论，通过网络药理学探讨饮久舒治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的分子机制，并进行实验验证。方法:通过TCMSP筛选饮久舒药物活性成分和靶点。利用Cytoscape 3.7.2构建饮久舒“中药-成分-靶点”网络。利用TTD、GeneCards、DisGeNET等数据库获取NAFLD的潜在靶点，利用Venn图进行靶点映射获取饮久舒与NAFLD的交集靶点。在STRING数据库获取交集靶点的高置信度交互作用关系，筛选饮久舒治疗NAFLD的核心靶点。利用DAVID数据库对交集靶点进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。通过动物实验进行验证，将48只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、西药组及饮久舒高、中、低剂量组，每组8只。除空白组外，其余各组大鼠以高脂饲料喂养制备NAFLD模型，各组给予相应药物进行干预，定期称量大鼠体重，采用ELISA法检测大鼠血清GPT、GOT、TC、TG、IL-6、TNF-α、髓过氧化物酶（MPO）水平，计算肝指数，采用HE染色观察肝细胞脂肪变性程度，采用Western blot法检测CAT、NOS3、SOD、PI3K、p-Akt、Akt蛋白表达。结果:获得NAFLD相关靶点8 418个，饮久舒组方药物活性成分118个，作用于NAFLD的靶点共137个，核心靶点包括IL-6、TNF、VEGFA、TP53、JUN、CAT、NOS3、SOD等。KEGG通路富集通路筛选出20条相关信号通路，其中PI3K/Akt通路、钙离子通路、cAMP通路、TNF通路可能在治疗NAFLD中发挥关键作用。饮久舒与NAFLD的炎症反应、氧化应激、血管生成、自噬及细胞增殖、分化、代谢、凋亡等密切相关，或可通过促进细胞凋亡、抑制细胞增殖及迁移等方面治疗NAFLD。动物实验结果显示，饮久舒可降低NAFLD大鼠体重、肝湿重、肝指数，降低血清GPT、GOT、TG、TC及IL-6、TNF-α、MPO水平，上调肝组织CAT、NOS3、SOD表达，并激活PI3K/Akt通路关键蛋白。结论:饮久舒可通过抑制炎症介质释放，改善肝细胞脂代谢紊乱，修复氧化应激损伤，促进肝功能恢复等途径，发挥治疗NAFLD的作用。

目的 探索去乙酰化酶3(Sirtuin-3,SIRT3)对皮肤鳞状细胞癌的影响及潜在调控机制.方法 采用基因表达谱交互分析数据库(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)分析SIRT3在多种肿瘤中的表达.采用SIRT3小干扰RNA转染A431细胞株构建SIRT3敲低细胞(si-SIRT3组),将阴性对照siRNA转染至A431细胞中,构建对照组细胞.采用RT-qPCR及Western blot分别检测细胞中SIRT3 mRNA及蛋白水平,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,采用Western blot检测细胞中促凋亡蛋白Bax、细胞色素C蛋白及抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,采用CCK-8实验检测细胞的增殖.A431细胞分别用SIRT3抑制剂3-TYP处理(3-TYP组)和等量DMSO处理(对照组)后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用转录组测序分析对照组和si-SIRT3组的差异表达基因,并对差异表达基因进行GO及KEGG富集分析.结果 SIRT3在胸腺瘤及弥漫性大B细胞淋巴瘤中表达上调(P＜0.05).相比于对照组,si-SIRT3组细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),ROS释放增加(P＜0.05),MMP明显降低(P＜0.001),促凋亡蛋白Bax和细胞色素C蛋白表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调,细胞增殖受到抑制(P＜0.001).相比于对照组,3-TYP组细胞凋亡率增加(P＜0.001).转录组测序分析结果显示,对照组和si-SIRT3组细胞中差异表达基因共有94个,其中上调基因59个,下调基因35个,差异表达基因主要富集在代谢、信号转导、钙离子、蛋白转运、蛋白水解、胞外基质、金属内肽酶及激素分泌等信号通路中.结论 下调皮肤鳞癌细胞中SIRT3的表达,可以促进癌细胞凋亡,抑制增殖,SIRT3有望作为皮肤鳞癌患者新的治疗靶点.